1,2,3-triatsolien Vastamyrkkyvaikutukset Bothrops jararaca-ja Lachesis muta-käärmeisiin

abstraktit

Käärmemyrkyt ovat monimutkaisia seoksia sekä entsyymien että nonentsyymien proteiineista, jotka aiheuttavat useita biologisia vaikutuksia. Ihmisen envenomation käärmeen puremat erityisesti viperid perheen aiheuttaa monimutkainen patofysiologinen kuva ominaista näyttäviä muutoksia hemostaasi ja usein verenvuoto nähdään myös. Tässä työssä kerrotaan kuuden 1,2,3-triatsolijohdannaisen kyvystä estää joitakin farmakologisia vaikutuksia, jotka johtuvat Botrops jararacan ja Lachesis Mutan myrkyistä. In vitro-tutkimukset osoittivat, että näiden yhdisteiden pitoisuusriippuvainen vaikutus oli molempien myrkkyjen tuottaman fibrinogeenin tai plasman hyytymistä, hemolyysiä ja proteolyysiä. Lisäksi nämä yhdisteet estivät biologisia vaikutuksia myös In vivo. Näillä yhdisteillä hoidetut hiiret olivat täysin suojassa tällaisten myrkkyjen aiheuttamilta verenvuotohäiriöiltä. Mutta vain B. triatsolit neutralisoivat jararacan turvotusta aiheuttavan aktiivisuuden. Triatsolijohdannaisten inhiboiva vaikutus joihinkin käärmeenmyrkkyjen in vitro-ja In vivo-biologisiin määrityksiin viittaa lupaaviin seikkoihin, jotka voivat osoittaa ne molekyylimalleiksi, joilla parannetaan tehokkaan vastamyrkkyvalmisteen tuotantoa tai täydennetään vastamyrkkyneutralisaatiota, erityisesti paikallisia patologisia vaikutuksia, jotka ovat osittain vastamyrkkyjen neutralisoimia.

1. Johdanto

käärme-venomit ovat monimutkaisia seoksia, jotka koostuvat entsyymeistä (metalloproteinaasit, seriiniproteinaasit, fosfolipaasit A2 ja L-aminohappo-oksidaasi) ja proteiineista, joilla ei ole entsymaattista aktiivisuutta, kuten disintegriineistä, C-tyypin lektiineistä, KYSTEIINIPITOISISTA sekretorisista proteiineista (CRISP) toksiineista, natriureettisista peptideistä ja myotoksiineista. Myrkylliset pit vipers Bothrops jararaca ja Lachesis muta ovat vastuussa onnettomuuksista, joissa on osallisena ihmisiä useilla alueilla Etelä-Amerikassa. B. jararacaa tavataan Brasilian eteläosissa, Paraguayssa ja Argentiinan pohjoisosissa, L. muta elää Päiväntasaajan metsissä Andien itäpuolella Ecuadorin, Kolumbian, Perun, Pohjois-Bolivian ja Itä-ja Pohjois-Venezuelan itäosista Guyanaan, Ranskan Guyanaan, Surinamiin ja Pohjois-Brasiliaan. Levinneisyysalueellaan niitä on usein runsaasti ja ne ovat tärkeä käärmeenpuremien aiheuttaja . Enmenoming näiden käärmeiden on pääasiassa ominaista systeeminen (yleistynyt verenvuoto, koagulopatia, munuaisten vajaatoiminta ja sokki) ja paikallisia vaikutuksia (verenvuoto, turvotus, ja nekroosi) . Kuten muualla on raportoitu, käärmeenpuremat ovat kansanterveysongelma Latinalaisessa Amerikassa ja muissa trooppisissa ja subtrooppisissa maissa, joissa niitä pidetään maailman terveysjärjestön (WHO) mukaan laiminlyötynä terveysongelmana . Etelä-Amerikassa B. jararaca aiheuttaa suuremman puremien esiintyvyyden (95%) kuin L. muta (noin 2%); kuitenkin L. muta-puremat johtavat yleensä vakavampiin enmenoming-oireisiin ja sen kuolleisuus on kolme kertaa suurempi kuin B. jararaca . Nykyään eläinperäisen vastamyrkyn antaminen parenteraalisesti on ainoa erityinen lääke käärmeenpuremien aiheuttamaan enmenomingiin. Brasiliassa, laskimoon annetaan joko Bothrops polyvalent vastamyrkkyä käytetään hoitamaan envenoming tapaukset aiheuttama Bothrops puremat tai polyvalent bothropic-lachetic seerumin L. muta ja Bothrops (B. atrox) käärmeen puremat Amazonian alueilla. Kuten edellä todettiin, kohtalainen tai vaikea envenopings aiheuttama Bothrops ja Lachesis käärmeitä on ominaista monimutkainen sarja paikallisia ja systeemisiä muutoksia, kuten verenvuoto, myonekroosi, koagulopatia, sydän-sokki, munuaisten vajaatoiminta, ja lopulta kuolema . Kuten muut kirjoittajat ovat raportoineet, turvallisuudestaan huolimatta, suuret annokset vastamyrkkyjä, joita joskus käytetään Brasiliassa potilaiden hoitoon, joilla on todistettu tai epäilty Bothrops/Lachesis envenoming, voivat edistää varhaisia anafylaktisia ja myöhäisiä (seerumitauti) tyyppisiä reaktioita . Näin ollen riittävän laadukkaiden vastamyrkkyjen tuottaminen on melkoinen haaste. Lisäksi vastamyrkkyjen hinnat ovat nousseet ja jotkin maat ovat lopettaneet niiden valmistuksen . Jotkut vastamyrkkyjä tehokkaasti neutraloida systeeminen myrkyllisiä vaikutuksia myrkky; kuitenkin paikalliset vaikutukset eivät ole tukossa ja tämä tilanne voi johtaa amputaatio tai vammaisuuteen .

tällaisten ongelmien vuoksi on etsitty vaihtoehtoisia hoitoja, ja joissakin niistä on etsitty uusia molekyylejä, jotka pystyvät neutraloimaan myrkkyjen systeemisiä ja paikallisia vaikutuksia. Kasviuutteet ja muut luonnolliset lähteet (kuten meren eliöt) on testattu niiden kykyä neutraloida erilaisia biologisia ja myrkyllisiä vaikutuksia käärme myrkkyjä. Erilaisia farmakologisesti aktiivisia molekyylejä on tunnistettu , ja niille on jo listattu monia vaikutuksia, muun muassa niiden vastamyrkkykyky . Nykyään tutkitaan monia uusia bioprospektointitapoja. Tähän liittyen on kuitenkin huomattava, että toistaiseksi orgaanisesta synteesistä johdettujen molekyylien biologisia vaikutuksia ei ole tutkittu kunnolla. Kirjallisuudessa on kuvattu 1,2,3-triatsoliyhdiste tärkeäksi viisijäsenisen typpiherosyklisen järjestelmän luokaksi, jolla on erilaisia farmakologisia profiileja , kuten verihiutaleiden toimintaa , hyytymistä , antiviraalista , trypanosidista , antimikrobista ja/tai niiden käyttöä skitsofrenian ja leishmaniaasin hoidossa . 1,2,3-triatsolirenkaiden rakentamiseen on käytettävissä kaksi yleistä menetelmää: Huisgen-1,3-dipolaarinen sykloadditioreaktio , erityisesti kupari(I)-katalysoitu sykloadditio , ja β-substituoitujen α-diatsokarbonyyliyhdisteiden intramolekulaarinen 1,5-sähkösyklisointi . Aiemmat tutkimuksemme ovat osoittaneet, että kuusi uutta synteettistä 1,2,3-triatsoliyhdistettä (1-aryylisulfonyyliamino-5-metyyli-1h–triatsoli-4-karboksyylihapon etyyliesterit) estivät L. muta-myrkyn aiheuttamaa hemolyysiä . Itse asiassa tällaiset johdannaiset osoittivat monenlaisia farmakologisia toimintoja .

tämän työn tarkoituksena oli arvioida näiden kuuden –1-(p-kloorifenyyli)-1h–triatsoli-4-karbohydratsidiin perustuvan 1,2,3-triatsolijohdannaisen kykyä bothrops jararaca-ja Lachesis muta venomien in vivo-ja in vitro-aktiivisuuteen.

2. Materiaali

2.1. Myrkky ja materiaali

Bothrops jararaca, Lachesis muta kylmäkuivatut myrkyt ja anti-Lachesis tai anti-Bothropic vastamyrkky toimitettiin Fundação Ezequiel Diasista, Belo Horizontesta, MG, Brasiliasta, ja niitä säilytettiin -20°C: ssa määrityksiin asti. Sigma Chemical Co: sta saatiin dimetyylisufoksidia (DMSO), naudan fibrinogeeniä ja atsokaseiinia. Kaikki muut reagenssit olivat parasta saatavilla olevaa laatua.

2.2. Synteettiset johdannaiset

kuusi 1-aryylisulfonyyliamino-5-metyyli-1h–triatsoli-4-karboksyylihapon etyyliesterijohdannaista syntetisoitiin edellisen raporttimme mukaan, ja niiden kemialliset rakenteet on esitetty kuvassa 1. Nämä yhdisteet liuotettiin dimetyylisufoksidiin (DMSO) ja varastoitiin 4°C: ssa, kunnes niitä tarvittiin.

Kuva 1

kuuden 1,2,3-triatsolijohdannaisen kemialliset rakenteet N ’ –1-(p-kloorifenyyli)-1h–triatsoli-4-karbohydratsidi. Kuusi derivaattaa suunniteltiin luvuiksi, kuten jokaisen derivaatan jälkeen on esitetty suluissa.

2.3. Eläimet

BALB / C-hiiret (18-20 g) saatiin liittovaltion Fluminensen yliopiston Núcleo de Animais de Laboratóriosta (NAL). Eläimet säilytettiin valvotuissa lämpötiloissa (°C) ja valossa. UFF: n eläinkokeiden etiikkaa käsittelevä Institutional Committee for Ethics in Animal Experimentation-komitea (pöytäkirja nro 297) hyväksyi kokeet Brasilian eläinkokeiden komitean (Cobea) ohjeiden sekä kansainvälisten lakien ja politiikkojen mukaisesti.

3. Menetelmät

3. 1. Epäsuoran hemolyysin estäminen

L. Mutan ja B. jararacan myrkkyjen aiheuttaman hemolyysin aste määritettiin epäsuoralla hemolyyttisellä testillä, jossa käytettiin ihmisen erytrosyyttejä ja kanan munankeltuaisemulsiota substraattina . L. Mutan ja B: n määrä. jararaca-myrkky (µg / mL), joka tuotti 100% hemolyysiä, merkittiin pienimpänä epäsuorana hemolyyttisenä annoksena (MIHD). Inhibitorisia kokeita tehtiin inkuboimalla triatsolijohdannaisia yhdellä MIHD: llä 30 minuutin ajan huoneenlämmössä, minkä jälkeen hemolyyttinen aktiivisuus arvioitiin. Kontrollikokeet tehtiin hautomalla myrkkyjä DMSO: lla tai suolaliuoksella.

3.2. L. Mutan ja B. jararaca venomsin hyytymisaktiivisuus määritettiin digitaalisella Amelung-koagulometrillä, malli KC4A (Labcon, Saksa). L: n eri pitoisuudet. muta (10 µg/mL) ja B. jararaca (40 µg/mL) – myrkky sekoitettiin naudan fibrinogeeniliuokseen (2 mg/mL) tai ihmisen plasmaan, ja se määrä myrkkyä, joka hyytyi joko fibrinogeeniin tai plasmaan 60 sekunnissa, merkittiin vähimmäiskoagulanttiannokseksi (MCD). Estävän vaikutuksensa arvioimiseksi triatsolijohdannaisia inkuboitiin 30 minuuttia huoneenlämmössä yhdellä MYRKKYKERTOIMELLA, minkä jälkeen seos lisättiin fibrinogeeniin tai plasmaan ja hyytymisaika kirjattiin. Kontrollikokeita tehtiin rinnakkain lisäämällä triatsolien sijasta DMSO: ta tai suolaliuosta, joka inkuboitiin myrkkyjen kanssa.

3.3. Antiproteolyyttinen aktiivisuus

L. muta-ja B. jararaca venoms-bakteerien proteolyyttinen aktiivisuus määritettiin atsokaseiinilla substraattina (0, 2% w/v, 20 mM Tris-HCl: ssä, 8 mM CaCl2: ssa, pH 8, 8) vähäisin muutoksin . Tehokas pitoisuus (EC) määriteltiin myrkkymääräksi (µg/mL), joka kykenee tuottamaan vaihtelua 420 nm: ssä, joka on noin 0,2. Triatsolijohdannaisia inkuboitiin yhdellä EC: llä myrkkyä 30 minuuttia huoneenlämmössä, minkä jälkeen mitattiin proteolyysi. Kontrollikokeet tehtiin hautomalla myrkkyjä DMSO: lla tai suolaliuoksella.

3.4. Antihemorraginen aktiivisuus

L. muta-ja B. jararaca-venomien aiheuttamat verenvuotohäiriöt määritettiin Kondo et al-järjestön kuvaamalla menetelmällä. , muutoksin. Näytteet ruiskutettiin lyhyesti hiirten vatsan ihoon intradermaalisesti (id.). Kaksi tuntia myöhemmin Eläimet lopetettiin mestaamalla, vatsan iho poistettiin, venytettiin ja tarkastettiin näkömuutosten varalta, jotta verenvuototäplät voitiin paikallistaa. Verenvuoto määritettiin pienimpänä verenvuotoannoksena (MHD), joka määriteltiin myrkkymääräksi (mg/kg), joka pystyy tuottamaan 10 mm: n verenvuotokehon . Triatsolijohdannaisten estävää vaikutusta tutkittiin inkuboimalla yhdisteitä kahdella MHD: llä L. muta-tai B. jararaca-myrkkyä 30 minuutin ajan huoneenlämmössä, minkä jälkeen seosta ruiskutettiin hiiriin ja verenvuoto mitattiin. Hemorraginen aktiivisuus ilmaistiin myrkkyjen aiheuttaman hemorragisen halon keskihalkaisijana (millimetreinä) triatsolijohdannaisten puuttuessa ja läsnä ollessa. Negatiiviset kontrollikokeet tehtiin ruiskuttamalla DMSO: ta tai suolaliuosta.

3.5. Antiedematogeeninen aktiivisuus

L. Mutan ja B. jararaca venomsin turvotusta indusoiva aktiivisuus määritettiin Yamakawa et al-tutkimuksen mukaan. , muutoksin. Viiden hiiren ryhmille ruiskutettiin ihon alle (s.c) oikeaan jalkatyynyyn 50 µL myrkkyä, kun taas vasempaan ruokatyynyyn annettiin 50 µL suolaliuosta. Tunnin kuluttua injektiosta arvioitiin turvotusta ja ilmaistiin oikean jalkatyynyn painon kasvuprosenttina vasempaan verrattuna. Triatsolijohdannaisten inhibitorista vaikutusta tutkittiin inkuboimalla yhdisteitä L. muta-tai B. jararaca-myrkyllä 30 minuutin ajan huoneenlämmössä, minkä jälkeen seosta ruiskutettiin hiiriin (oikea jalkatyyny) ja turvotus mitattiin.

3.6. Tilastollinen analyysi

tulokset ilmaistaan keskiarvona ± sem, joka on saatu ilmoitetulla määrällä eläimiä tai tehtyjä kokeita. Kokeellisten ryhmien välisten erojen tilastollista merkitsevyyttä arvioitiin Ylioppilaskokeella. Arvoa ≤ 0,05 pidettiin merkittävänä.

4. Tulokset ja keskustelu

tehokkaiden, turvallisten, halvempien ja helpommin saatavilla olevien vastamyrkkyjen kehittäminen ansaitsee huomiota, sillä käärmeenpuremat voivat aiheuttaa vakavia vammoja ja tappaa myös tuhansia ihmisiä. Yhä useammat tutkimukset ovat keskittyneet etsimään käärmeenmyrkkyjen inhibiittoreita useista eri lähteistä, olivat ne sitten luonnollisia tai synteettisiä . Suramiini ja bentsoyylifenyylibentsoaatti ovat synteettisiä molekyylejä, jotka kykenevät estämään eri sukujen käärmeenmyrkkyjen myotoksisuutta, hyytymistä ja fosfolipaasi A2: n ja hyaluronidaasin toimintaa. Laktonianalogit syntetisoitiin ja estivät myotoksisuutta ja turvotusta indusoivia ja entsymaattisia toimintoja, jotka indusoivat B. jararacussusta eristettyä fosfolipaasi A2: ta . Toisaalta myös meren bioaktiiviset periaatteet ovat herättäneet huomiota laajalla farmakologisella vaikutuksellaan .

tässä työssä arvioitiin kuuden 1-aryylisulfonyyliamino-5-metyyli-1h-triatsoli-4-karboksyylihapon etyyliestereiden kykyä neutraloida joitakin B. jararacan ja L.: n aiheuttamia in vitro (hemolyysi, hyytyminen ja proteolyysi) ja In vivo (verenvuoto ja turvotusta indusoiva vaikutus). muta venoms, koska aiemmat tulokset osoittivat, että nämä kuusi johdannaista estivät L. muta-myrkyn aiheuttamaa hemolyysiä, mutta eri potensseilla . Tästä syystä ajateltiin, että olisi syytä tutkia tällaisten johdannaisten vaikutusta muihin tärkeisiin biologisiin toimintoihin, jotka liittyvät käärmeenpuremiin, kuten proteolyysiin, hyytymiseen, hemolyysiin, verenvuotoon ja turvotukseen. Osoitettiin, että nämä yhdisteet estivät B. jararaca (50 µg/mL) – ja L. muta (15 µg/mL) – myrkkyjen aiheuttamaa hemolyysiä (kuva 2(A)). Johdannaisten estoprosentti oli yli 50% molempia myrkkyjä vastaan. Johdannaisen 6 inhibitorisessa profiilissa havaittiin kuitenkin pieni ero, kun B. jararacan ja L. muta Venomin hemolyysin esto saavutettiin 50% ja 90%. Sen paremmin johdannaiset kuin DMSO eivät johtaneet erytrosyyttejä hemolyysiin, eikä DMSO häirinnyt myrkkyjen aiheuttamaa hemolyysiä.

(a)

(b)

(a)
(b)

kuva 2

johdannaisten vaikutus hemolyysiin ja proteolyysiin. Johdannaisia 1-6 (45 µM) inkuboitiin B. jararacalla (tummat kolonnit) tai L. mutalla (murskatut kolonnit) 30 minuutin ajan huoneenlämmössä, minkä jälkeen suoritettiin hemolyyttinen (A) ja proteolyyttinen (b) toiminta. Tiedot ilmoitetaan yksittäisten kokeiden keskiarvona ± sem ().

näiden käärmeenpuremien aiheuttama Envenomaatio aiheuttaa vakavan verenvuodon johtuen sinkin riippuvaisen metalloproteaasin tai seriiniproteaasin korkeasta pitoisuudesta, joka sulattaa solunulkoisen matriisin proteiinikomponentteja tai kuluttaa veren hyytymistekijöitä . B. jararaca ja L. muta-myrkky hydrolysoi atsokaseiinin pitoisuudesta riippuvalla tavalla EC: llä 20 µg/mL ja 6 µg / mL (tietoja ei näy). Johdannaiset estivät B. jararacan tai L. Mutan aiheuttamaa proteolyysiä (kuva 2 b)). Johdannaiset 1, 2, 3 ja 6 estivät molempien myrkkyjen aiheuttamaa proteolyysiä jopa 80% ja johdannainen 5 estivät tällaisen aktiivisuuden Alle 50%. Johdannaisten estoprofiilissa havaittiin huomattava ero johdannaisen 4 kohdalla, jossa se esti 97% B. jararacan ja L. muta Venomin aiheuttamaa proteolyysiä 25% (kuva 2 b)).

kuten kuvassa 3, johdannaiset 1, 2, 4, 5 ja 6, mutta ei johdannainen 3, joka estää pitoisuudesta riippuvalla tavalla (23-94 µM) B. jararacan (40 µg/mL) tai L. Mutan (10 µg/mL) myrkkyjen aiheuttamaa fibrinogeenin hyytymistä. Näytti siltä, että johdannaiset estivät tehokkaammin L. muta-indusoivaa hyytymistä kuin B. jararaca. Suurimmalla pitoisuudella (94 µM) johdannaiset 1, 2, 3, 5 ja 6 estivät L. Mutan hyytymisen (kuva 3 b), kun taas johdannaiset 2 ja 6 estivät B. jararacan kerran(kuva 3 B). Jopa 200 µM: n pitoisuuksina kaikki 1,2,3-triatsolijohdannaiset estivät tehokkaasti molempien myrkkyjen aiheuttamaa fibrinogeenin hyytymistä, mutta alle 10 µM: n pitoisuuksina mikään näistä yhdisteistä ei estänyt hyytymistä. Kun johdannaiset (10 µM) kuitenkin laitettiin yhteen ja inkuboitiin joko B. jararaca-tai L. muta-myrkyllä, hyytymisaika viivästyi kaksinkertaiseksi. Havaittiin, että jos seoksesta poistettiin johdannaisia 2 tai 6, hyytymistä estävää vaikutusta ei havaittu. Lisäksi johdannaiset estivät myös myrkkyjen aiheuttamaa hyytymistä käytettäessä plasmaa. DMSO (1% v/v, lopullinen pitoisuus) tai suolaliuos eivät häirinneet hyytymisprosesseja.

(a)

(b)

(a)
(b)

kuva 3

johdannaisten vaikutus fibrinogeenin hyytymiseen. Kaksikymmentä kolme µM: n johdannaista (harmaat kolonnit), 46 µM (valkoiset kolonnit) tai 94 µM (Mustat kolonnit) inkuboitiin 40 µg/mL B. jararaca (A): lla tai 10 µg/mL L. muta (b): lla 30 minuutin ajan huoneenlämmössä. Sitten seos lisättiin fibrinogeeniin (2 mg / mL)ja hyytymisaika kirjattiin. Myrkkyjä inkuboitiin suolaliuoksella (C1), 1% v/v DMSO (C2), johdannaisella 1 (sarake 1), johdannaisella 2 (sarake 2), johdannaisella 3 (sarake 3), johdannaisella 4 (sarake 4), johdannaisella 5 (sarake 5) ja johdannaisella 6 (sarake 6). # tarkoittaa, että fibrinogeeni hyytyi vasta 600 sekunnin tarkkailun jälkeen. Tiedot ilmoitetaan yksittäisten kokeiden keskiarvona ± sem ().

B. jararacan (12 mg/Kg) tai L. muta (20 mg/Kg) myrkkyruiske ihon sisään aiheutti hiirillä 20 mm: n vuotokehän. Tällainen sädekehä edustaa kahta MHD-myrkkyä. Kun jokainen myrkky sekoitettiin johdannaisiin (90 µM) ja sitten ruiskutettiin hiiriin, nähtiin täydellinen suoja verenvuodolta (tietoja ei näy). Sitä vastoin aiemmat tulokset osoittivat, että antilakeettinen seerumi ei estänyt L. muta-myrkyn aiheuttamaa verenvuotoa . DMSO: n, johdannaisten tai suolaliuoksen ruiskutus ei aiheuttanut verenvuotoa. Turvotus-inducing on toinen tärkeä vaikutus, joka seuraa käärmeen purema . Kuva 4 osoittaa, että 5 mg/Kg B. jararaca (Kuva 4(A)) tai 8 mg/Kg L: n aiheuttama turvotus. muta(Kuva 4 (b)) väheni merkittävästi johdannaisilla (90 µM). Triatsolijohdannaiset 1, 2 ja 4 estivät yli 80% B. jararacan aiheuttaman turvotuksen, kun taas johdannaiset 3, 5 ja 6 estivät noin 70% (Kuva 4(a)). Kuten edellä todettiin, kaikki johdannaiset estivät vähemmän L. Mutan aiheuttamaa edematogeenista aktiivisuutta(Kuva 4 (b)).

(a)

(b)

(a)
(b)

Kuva 4

johdannaisten vaikutus turvotusta aiheuttavaan aktiivisuuteen. Johdannaisia (90 µM) inkuboitiin 5 mg/Kg B. jararaca (A): lla tai 8 mg/Kg L. muta (b): lla 30 minuutin ajan huoneenlämmössä, minkä jälkeen suoritettiin turvotusta indusoiva aktiivisuus. Sarakkeet ovat johdannainen 1 plus venom (1); johdannainen 2 plus venom (2); johdannainen 3 plus venom (3); johdannainen 4 plus venom (4); johdannainen 5 plus venom (5) ja johdannainen 6 plus venom (6). Tiedot ilmoitetaan yksittäisten kokeiden keskiarvona ± sem ().

yhteenvetona voidaan todeta, että 1-aryylisulfonyyliamino-5-metyyli-1h–triatsoli-4-karboksyylihapon etyyliesterijohdannaiset voivat olla hyödyllisiä prototyyppeinä suunniteltaessa uusia molekyylejä B. jararaca-ja L. muta-käärmeenpuremien nykyisen käsittelyn parantamiseksi. Näiden johdannaisten inhibitorinen teho voi vaihdella tai se voi voimistua, kun ne yhdistetään, ja se todennäköisesti vaikuttaa synergistisesti. Näin ollen niitä tarvittaisiin pienempi pitoisuus, jotta B. jararacan ja L. muta venomien aiheuttamat biologiset vaikutukset saataisiin täysin neutralisoitua. Lisäksi johdannaisten rakenne-aktiivisuussuhdetta on analysoitu jo aiemmin . Johdannaiset toimitettiin ”Lipinskin viiden säännön” analyysiin, joka osoittaa, että kemiallinen molekyyli voisi olla oraalisesti aktiivinen lääke ihmisillä, ja tällaisen säännön mukaan molekyyli, joka rikkoo mitä tahansa kahta seuraavista säännöistä, imeytyy todennäköisesti huonosti: (1) molekyylipaino alle 500 Da, (2) vetysidosten luovuttajien (OH-tai NH-ryhmien) määrä on yhtä suuri tai pienempi kuin 5, (3) vetysidosten hyväksyjien määrä alle 10 ja lopuksi (4) laskettu alle 5 . Tulokset osoittivat, että kaikki johdannaiset täyttivät tämän säännön (molekyylipaino = 296.31–341.30; 2.6–3.4; nHBA = 8-11 ja nHBD = 1-3), joka osoittaa hyvän teoreettisen bioponibiliteetin .

kiitokset

tätä työtä ovat tukeneet Kansainvälinen tiedesäätiö (IFS Grant F/4571-1) ja seuraavat brasilialaiset rahoittajat: Conselho Nacional de Desenvolvimento científico e tecnológico( CNPq), Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro Carlos Chagas Filho (Faperj), Coordinação de Aperfeiçoamento de pessoal de Nível Superior (capes) ja Universidade Federal Fluminense/pró-recitoria de Pesquisa e pós-graduação e Inovação (Uff)/proppi).