Chimeric antigen receptor T (CAR-T) celler har vist bemerkelsesverdig aktivitet i hematologiske maligniteter. Bilmolekyler er opprettet ved å fusjonere scFv (single chain variable fragment) avledet fra et antistoff rettet mot et overflateantigen med t-cellesignaleringsdomenet . Disse molekylene er podet På T-celler, men en ingeniørprosess som vanligvis bruker retro – eller lentivirus, eller i noen tilfeller plasmider. CD19 er et rasjonelt mål for B-celle maligniteter, inkludert lymfomer, som det uttrykkes På B-celler under Alle stadier av differensiering, så vel som i celler som har malignant transformert . BIL – t-celler rettet mot CD19 har vist utmerket respons hos pasienter med residiverende eller refraktære b-celle lymfomer, spesielt diffuse store b-celle lymfom (DLBCL) med noen varige remisjoner sett, tjene FDA-godkjenning for denne indikasjonen. Men alternative mål er nødvendig for andre typer lymfom som mangler CD19 uttrykk, inkludert sykdommer som klassisk Hodgkin lymfom (HL), anaplastisk storcellet lymfom (ALCL) og Andre T-celle lymfomer.
selv om flertallet av pasientene med HL er kurert med førstelinjebehandling, har omtrent 15% av pasientene enten primær refraktær sykdom eller senere tilbakefall etter en innledende respons på behandlingen . Standardbehandling for pasienter som får tilbakefall etter førstelinjebehandling er høydose kjemoterapi etterfulgt av autolog stamcelletransplantasjon (ASCT) med omtrent halvparten av pasientene som får tilbakefall etter transplantasjon . Dessverre er prognosen for disse pasientene dårlig, med allogen stamcelletransplantasjon (alloSCT) som tradisjonelt gir den beste sjansen for vedvarende remisjon . Imidlertid er denne behandlingen også forbundet med betydelig sykelighet og dødelighet. Nye terapier er nødvendig for pasienter med residiverende OG refraktær HL.
ALCL er en subtype av perifert t-cellelymfom med heterogene egenskaper . Mens prognosen for anaplastisk lymfomkinase-positiv (ALK+) ALCL er god, med 5 års overlevelse generelt fra 70 til 90%, HAR ALK-negativ ALCL en mer bevoktet prognose, med 5 års overlevelse på 40-60% . Bergingsterapi for pasienter med kjemosensitiv sykdom består vanligvis av høydose kjemoterapi etterfulgt AV ASCT. Prognosen for pasienter med residiverende/refraktær ALCL som ikke er egnet for transplantasjon eller mislykket andrelinjebehandling er imidlertid dyster, med en retrospektiv studie som viser en median progresjonsfri overlevelse og total overlevelse på henholdsvis 3 og 1,8 måneder . Alternative behandlingsmetoder er derfor nødvendig for behandling av pasienter med residiverende ELLER refraktær ALCL.
en definerende egenskap for BÅDE HL og ALCL er tilstedeværelsen av ET felles overflatemolekyl, CD30, en transmembranreseptor og medlem av tnf-reseptorens superfamilie . CD30 uttrykkes også i andre lymfomer, inkludert universelt i lymfomatoid papulose og i noen tilfeller AV DLBCL, primært mediastinalt b-cellelymfom, mykoser fungoides, perifert t-cellelymfom og voksen t-celle leukemi/lymfom . Nye behandlinger er også nødvendig for disse lymfomer, spesielt for pasienter som ikke svarer på første behandling.
CD30 er en utmerket kandidat for immunbaserte terapier på grunn av begrenset ekspresjon på tumorceller, med begrenset ekspresjon på en liten undergruppe av aktiverte normale (ikke-maligne) lymfocytter , noe som fører til lav risiko for off-tumor på måltoksisitet.
CD30 har blitt grundig undersøkt som antistoffbasert terapi, fra naken til immunkonjugert. De mest bemerkelsesverdige resultatene er oppnådd med brentuksimabvedotin (BV), et antistoffkonjugat rettet mot CD30, som faktisk har vist god toleranse samt lovende aktivitet i CD30+ lymfomer, med en samlet responsrate (ORR) på 75% og komplett responsrate (cr) på 34% hos pasienter med residiverende ELLER refraktær HL og EN ORR på 86% og CR-rate på 57% i residiverende eller refraktær systemisk ALCL . SELV OM BV ser ut til å ha utmerket respons, er disse vanligvis ikke varige med bare 22% av pasientene med residiverende ELLER refraktær HL som ikke har progrediert etter 5 år . FOR å overvinne noen av utfordringene med antistoffbasert terapi, nemlig begrenset utholdenhet og svulstpenetrasjon , HAR BIL-T-celler blitt utforsket. Suksessen OG toleransen TIL BV ga bevis for muligheten FOR å målrette CD30 med BIL-T-celler.
Prekliniske studier AV CD30-rettet BIL-T-celler
de første studiene AV BIL – t-celler rettet MOT CD30 ble utført på slutten Av 1990-tallet Av Hombach et al. og viste effektiv cytolyse AV CD30 + HL cellelinjer in vitro . Men disse bilmolekylene manglet co-stimulerende signalering, noe som begrenset effektiviteten. Savoldo et al. foreslått å uttrykke DETTE BILMOLEKYLET på virus (Epstein Barr Virus)-spesifikke cytotoksiske T-celler (EBV-CTLs) for å sikre at disse kimære cellene mottok passende kostimulerende signaler over tid. Som forventet opprettholdt disse cellene sin evne til å gjenkjenne OG drepe EBV+ svulster samtidig som de rettet MOT CD30+ kreftceller (SOM hl og ALCL tumorcellelinjer) både in vitro og in vivo i en xenogen musemodell . Etterfølgende fremskritt i ingeniørprosessen har introdusert co-stimulerende endodomener i BILMOLEKYLET, noe som gjorde produksjonen mindre tungvint og behovet for T-celler med dual antigen-spesifisitet foreldet .
uansett, disse studiene adressert store teoretiske utfordringer knyttet til målretting AV CD30 molekylet. Først og fremst er økte nivåer av løselig CD30 tilstede i plasma hos pasienter MED HL og ALCL, noe som gir bekymringer for konkurranse om binding til BILEN . Imidlertid viste in vitro-studier at forhøyede NIVÅER av oppløselig CD30 ikke negativt påvirket AKTIVITETEN TIL CD30-rettet BIL – t-celler, sannsynligvis fordi epitopen målrettet AV BILEN ikke beholdes i molekylets oppløselige form eller fordi flere immobiliserte molekyler kreves for å aktivere BILSIGNALERING.
For det Andre utforsket disse studiene uttrykksnivåer FOR CD30-molekyl for å sensibilisere BIL-T-celler som drepte. CD30 uttrykkes forbigående av en undergruppe av lymfocytter ved aktivering, noe som gir økt bekymring for tidlig eliminasjon av T-eller B-celler under virusresponser. Omfattende ex vivo-studier har imidlertid utelukket dette problemet , noe som tyder på at NIVÅET AV CD30-oppregulering i minne T-celler som reagerer på virusassosiert antigenstimulering, er lavere enn det som er tilstede på tumorceller, og dermed ikke i stand til å aktivere drapsmaskineriet fullt ut. Antigen sensing AV BILMOLEKYLER blir en viktig egenskap, da differensial ekspresjon av målbare molekyler mellom normale vs tumorceller til slutt vil diktere valget av scFv for anvendelser AV BIL mot faste svulster. Potensialet FOR CD30-rettede BIL-T-celler for å eliminere allo-reaktive T-celler eller regulatoriske T-celler (Tregs), som ser ut TIL å uttrykke CD30 på et betydelig høyere nivå, gjenstår å bli fullstendig utforsket, og kan åpne denne tilnærmingen for andre applikasjoner i stamcelletransplantasjonsfeltet.
et siste viktig aspekt adressert i disse prekliniske studiene behandlet motstanden TIL NOEN CD30 + – celler til BIL – t-cellemediert drap. CD30 uttrykkes faktisk av hematopoietiske stamceller og stamceller (hspcs) under aktivering, noe som potensielt kan føre til forstyrrelser i hematopoiesis, inkludert benmargsaplasi. Ved sammenligning av STYRKEN AV CD30-rettede BIL-T-celler mot CD30+ HSPCs og CD30+ MyLa kutane t-cellelymfomceller ble det imidlertid observert minimal aktivitet mot den tidligere. Videre viste Hspcer som ble sortert I CD30+ og CD30– celler bare litt høyere cytolyse i nærvær AV CAR-T-celler som likevel var mye lavere sammenlignet med lysis Av MyLa lymfomceller . HSPCs som var co-dyrket MED CD30-rettet BIL-T-celler hadde også normal myeloid koloni dannelse, med bare en liten reduksjon i erytroid koloni dannelse. Det er viktig at adoptivoverføringen av autologe CD30-rettede BIL-T-celler under hspc-rekonstituering hos humaniserte mus ikke ga noen forringelse i humane perifere T-og B-celler, noe som tyder på bevart hematopoiesis, og bekrefter mangel på signifikant benmargstoksisitet.
i tillegg til differensialuttrykket AV CD30 på Hspcer på et nivå som er under terskelen FOR CAR-T-celleaktivering, virker noen iboende motstand av stamceller sannsynlig. HSPCs uttrykker høyere nivåer AV SP6 / PI-9 serinprotease som inaktiverer granzyme B, en viktig tilrettelegger For t-cellemediert apoptose . Selv om forskjellige celler bruker forskjellige strategier, er denne observasjonen i samsvar med studier i embryonale celler og svulster som til tross for å uttrykke CD30, er mer motstandsdyktige mot bil-T-celledrap .
Kliniske studier AV CD30-rettede BIL-T-celler
To studier AV CD30-rettede BIL-T-celler har blitt publisert til dags dato, med begge studier som viser at denne behandlingen tolereres godt med noe antitumoraktivitet (Tabell 1). De to studiene benyttet forskjellige scFv, kostimulerende signaler, leveringssystemer, forberedelsesregimer og doser, noe som gjorde sammenligninger vanskelige å utføre, samtidig som de ga brede scenarier av funksjon.
Wang et al. behandlet 18 pasienter med residiverende/refraktær CD30+ lymfom (17 MED HL og 1 med KUTAN ALCL) med EN ANTI-CD30-BIL . DENNE BILEN (avledet FRA AJ878606.1 antistoff) benyttet 4-1BB costimulatory endodomain og en lentiviral vektor For T-celleteknikk. Av de 18 behandlede pasientene hadde 9 tidligere FÅTT ASCT og 5 hadde blitt behandlet MED BV. Pasientene fikk en gjennomsnittlig dose på 1.56 hryvnias 107 BIL – t-celler / kg etter lymfodepleteringsregime, bestående av 3 forskjellige kombinasjoner, som forårsaket en viss grad av cytopeni . Alle pasientene hadde en grad 1 eller 2 febril infusjonsreaksjon (feber og frysninger) som kom seg over natten. Det var bare to toksisiteter grad 3 eller høyere: en pasient hadde abnormiteter i leverfunksjonstester som føltes sekundære til toksisitet fra lymfodepletion, og en pasient hadde systolisk dysfunksjon, sannsynligvis relatert til tidligere antracyklineksponering. Det var ikke noe cytokinfrigjøringssyndrom.
av 18 pasienter behandlet og evaluerbare for respons, hadde 7 pasienter en partiell respons (PR) og 6 pasienter hadde stabil sykdom (SD) Etter infusjon var DET ingen CR og ORR var 39%. Median progresjonsfri overlevelse var 6 måneder, og 4 pasienter hadde fortsatt respons ved publiseringstidspunktet. Det var 5 pasienter som fikk EN ANDRE car-T-celleinfusjon, med 3 pasienter som opprettholdt PR etter 2. behandling, 1 pasient som opprettholdt SD, og 1 pasient som oppnådde PR etter å ha blitt vurdert SOM SD etter 1. infusjon. Lymfeknuter syntes å reagere bedre på behandling enn ekstranodal sykdom, og lungelesjoner syntes å reagere minst på behandling, selv om det er vanskelig å trekke konklusjoner med en så liten prøvestørrelse.
hos de fleste pasienter som ble behandlet, nådde BILTRANSGENE i perifert blod 3-9 dager etter infusjon og redusert til baseline 4-8 uker etter infusjon Høyere antall BILTRANSGENER samt et redusert antall CD30+ tumorceller hos de få pasientene som hadde tumorbiopsier utført på den tiden, noe som tyder på at funksjonelle BIL-T-celler trafficket til tumorsteder.
Ramos et al. rapportert resultatene av 9 pasienter med residiverende / refraktær CD30 + lymfom (6 MED HL, 1 MED kutan ALK negativ ALCL, 1 med systemisk ALK + ALCL, og 1 med DLBCL utviklet SEG TIL HL). FOR denne studien BLE CAR CD30 (avledet FRA HSR3-antistoffet) kombinert med ET CD28 kostimulerende endodomain og levert til T-celler via en gammaretroviral vektor . Av de 9 behandlede pasientene hadde 8 aktiv sykdom ved tidspunktet for celleinfusjon. Alle pasientene var sterkt forbehandlet og hadde tilbakefall etter 3 eller flere tidligere behandlingslinjer, 7 hadde tidligere blitt behandlet MED BV, og 6 hadde tilbakefall etter ASCT.
Pasienter fikk opptil 2 × 108 CD30-rettet BIL-T-celler/m2 uten lymfodepleteringsregime administrert før infusjon . Behandlingen ble godt tolerert uten at det ble rapportert om toksisiteter FOR BIL-T-celler eller episoder med cytokinfrigjøringssyndrom. Forfatterne overvåket Også T – celleimmunitet mot virale antigener før og etter infusjon og fant ingen forskjell I t-cellerespons på vanlige viruspatogener . I tillegg var det ingen rapporter om virusinfeksjoner etter behandling MED CD30 CAR-T-celler.
av 8 pasienter behandlet som hadde aktiv sykdom ved infusjonstidspunktet, gikk 2 pasienter inn I CR med 1 pasient MED ALK + ALCL som opprettholdt CR i 9 måneder før tilbakefall, og den andre pasienten med HL fortsatte å være I CR i mer enn 2,5 år ved publisering . Tre pasienter hadde SD og 3 pasienter hadde progressiv sykdom. Den behandlede pasienten som allerede var I CR ved infusjonstidspunktet etter å ha fått berging kjemoterapi etter ASCT, har opprettholdt EN CR i over 2 år ved publisering. De fleste responsene ble sett hos pasienter som fikk det høyeste dosenivået. Det var en doseavhengig utvidelse AV BIL-T-celler i perifert blod, og nivåene toppet seg innen 1 uke etter infusjon og falt etterpå, MEN BILSIGNALER var fortsatt påviselige 6 måneder etter infusjon hos 6 pasienter .
til tross for begge studier som viser god toleranse og noen effekter, er resultatene beskjedne sammenlignet med DE som oppnås MED CD19-rettede BIL-T-celler. Det er for tiden flere pågående kliniske studier med FORSKJELLIGE CD30 CAR – t-cellekonstruksjoner i residiverende / refraktære lymfomer som adresserer måter å forbedre utfallet på (Tabell 2).
Fremtidige retninger AV CD30-rettet BIL – t-celler
Dissekere strategier for å forbedre CD30-BIL T-celler må være trinnvis og mangefasettert.
først av alt skal lymfodepleteringsregimer vurderes grundig (Fig. 1a). Lymfodepletering eller kondisjonering av kjemoterapi administrert før INFUSJON AV BIL-T-celler forbedrer tydelig utholdenhet og effekt av CD19-rettede BIL-T-celler . Lymfodepleterende kjemoterapi reduserer pasientens tumorbelastning og antall undertrykkende celler . HL-mikromiljøet har spesielt mange hemmende celler, inkludert Tregs, t helper type 2-celler og tumorassosierte makrofager (TAM) , som støtter overlevelsen Av Hodgkin Reed Sternberg (HRS) celler, de ondartede cellene I HL . Derfor kan lymfodepletion ved HL i TILLEGG gjøre lymfomceller mer mottakelige FOR BIL – t-celleeliminering ved å forstyrre dette hemmende mikromiljøet. Endelig fjerner lymfodepletion konkurrerende vaskeceller, NOE SOM gjør IL-7 og IL-15 cytokiner raskt tilgjengelige for BIL-t-celleutvidelse .
Lymfodepleterende kjemoterapi reduserer antall undertrykkende celler, som regulatoriske T-celler og type 2-hjelperceller, som kan forstyrre tumorens mikromiljø. Det stimulerer også produksjon av cytokiner, SOM IL-7 OG IL-15, som kan fremme utvidelse AV BIL-T-celler. b. Hodgkin Reed-Sternberg celler produserer thymus og aktivering-regulert chemokine/CC chemokine ligand 17 (TARC/CCL17) og makrofag-avledet chemokine (MDC / CCL22), som tiltrekker type 2 hjelperceller og regulatoriske T-celler som uttrykker CCR4. BIL-t-celler som er konstruert for å uttrykke CCR4 kan ha forbedret handel med tumorstedet. C. Anti-CD30 BIL – t-celler har blitt funnet å uttrykke PD-1, noe som antyder at de kan være mottakelige FOR PD-1/PD-L1-banen som fører til immunhemming. I Tillegg uttrykker Hodgkin Reed-Sternberg-celler OGSÅ PD-L1, som kan ha en hemmende effekt på BIL-T-celler som uttrykker PD-1. Kontrollpunktshemmere kan avbryte pd-1/PD-L1-banen og føre til forbedret ekspansjon og utholdenhet AV BIL-T-celler. Vekstfaktorer, som kolonistimulerende faktor 1 (CSF1), stimulerer tumorassosierte makrofager (TAM) til å være antiinflammatoriske og fremme tumorutvikling. Kombinasjoner MED csf1-reseptor (CSF1R) – hemmere kan bidra til å avbryte det hemmende tumormikromiljøet og forbedre EFFEKTEN AV BIL-T-celler
det optimale lymfodepleteringsregimet som skal brukes SAMMEN MED CD30 CAR-T-celler er ikke kjent. I sin kliniske studie AV CD30-rettet BIL-t-celler, Wang et al. behandlede pasienter med 1 av 3 forskjellige kondisjoneringsregimer (bestående av fludarabin og cyklofosfamid, eller gemcitabin, mustargen og cyklofosfamid, eller nab-paklitaksel og cyklofosfamid), men fant ingen statistisk signifikant forskjell mellom dem . Mange pågående studier benytter fludarabin og cyklofosfamid som lymfodepletion, ekstrapolering fra DATA MED CD19-rettede CAR – t kliniske studier (Se Tabell 2; NCT02259556, NCT02917083, NCT03049449). Et alternativt behandlingsregime kombinerer fludarabin og bendamustin som lymfodepletion (NCT02690545). En annen tilnærming er å infuse pasienter MED CD30 CAR-T-celler som konsolidering etter ASCT. I dette scenariet fungerer ASCT som det ultimate lymfodepletionregimet, noe som fører til høye nivåer av stimulerende cytokiner SOM IL-7 og IL-15 som kan støtte CAR-T-celleutvidelse og eliminere suppressive lymfoide celler . DET er en pågående klinisk studie AV CD30-rettet BIL-T-celler som konsolidering etter ASCT hos pasienter MED CD30 + lymfomer (NCT02663297).
Et annet viktig aspekt å vurdere FOR CD30 maligniteter er sykdom lokalisering (Fig. 1b). Lymfomer er hovedsakelig en sykdom i lymfoide vev( lymfeknuter og benmarg), MEN CD30 + svulster gir ytterligere utfordringer. I HL er kjemokin-miljøet svært viktig for å påvirke hvilke celler som akkumuleres i svulsten . HRS-celler produserer tymus og aktiveringsregulert kjemokin / CC kjemokin ligand 17 (TARC / CCL17) og makrofag-avledet kjemokin (MDC/CCL22). Disse kjemokinene tiltrekker seg celler som uttrykker SIN beslektede reseptor, CCR4, som type 2-hjelperceller, Tregs og myeloid-avledede suppressorceller (MDSC) . Infiltreringen av DISSE cellene beskytter HRS-celler ved å skape, ikke bare et undertrykkende miljø, men også en fysisk barriere mot tilgang av cytotoksiske t-lymfocytter. For å sikre fortrinnsrett handel TIL HL celler, Savoldo et al. skapte T-celler som, i tillegg til å uttrykke CD30-BILEN, også uttrykte kjemokin-reseptoren, CCR4 . DE fant AT CD30-rettet BIL-T-celler som uttrykte CCR4 hadde forbedret migrasjon til svulsten og økt anti-lymfom aktivitet sammenlignet MED CD30-rettet BIL-T-celler som ikke uttrykke CCR4 I HL musemodeller . EN bekymring for denne tilnærmingen er AT TARC og MDC er produsert av andre vev, for eksempel hud, noe som kan øke giftigheten. MEN SIDEN CD30 ikke er uttrykt på disse stedene, BØR CD30-rettet BIL-T-celler ikke forårsake på målet av tumor toksisitet. I stedet KAN CD30-regisserte BIL – t-celler som co-express CCR4 også være mer effektive I CD30 + kutane lymfomer på grunn av økt handel med huden. En klinisk studie AV CD30-rettet BIL-T-celler co-uttrykke CCR4 hos pasienter med residiverende / refraktær CD30 + lymfomer er planlagt å åpne i nær fremtid.
som beskrevet ovenfor er tumormiljøet av lymfomer og HL spesielt rik på hemmende celler og molekyler. Derfor er det viktig å vurdere å knytte BIL CD30 med andre immunregulatorer. Blant kandidat strategier, immun sjekkpunkt hemmere (ICIs, Fig. 1c) er nøkkelen. Dette er spesielt interessant I HL, hvor ICIs har vist utmerket enkeltmiddelaktivitet . I tillegg, Ramos et al. FUNNET AT PD1 ble uttrykt av 33% AV infused CD30-rettet BIL-T-celler, noe som tyder på at disse cellene vil forbli mottakelige FOR PD1 / PDL1-hemmende vei en gang på tumorstedet. I tilfeller der pasienter som har progrediert etter Å ha fått CD19-rettet BIL-T-celler og deretter ble behandlet med pembrolizumab, ble det observert reekspansjon AV CD19 BIL-T-celler og klinisk respons . Imidlertid må optimal timing og sekvensering av kombinasjon For ICIs OG CD30 CAR-T-celler identifiseres. I tillegg er effekten av denne kombinasjonen på immunrelaterte bivirkninger og cytokinfrigjøringssyndrom ukjent. Alternativt, med fremskritt innen genteknologi, representerer selektiv nedregulering av hemmende reseptorer AV BIL T-celler spennende alternativer .
tilstedeværelsen AV MDSC og deres rolle i tumorbeskyttelse i HL krever også testing av kombinasjoner med nye modulatorer som kolonistimulerende faktor 1-reseptor (CSF1R) – hemmere, siden MDSCs uttrykker CSF1R . I tillegg stimulerer vekstfaktorer, SOM CSF1, tumorassosierte makrofager til å være antiinflammatoriske, Eller m2-fenotypen, og fremmer tumorvekst . Økt antall tumorassosierte makrofager er assosiert med dårligere prognose ved HL . Dette støtter videre begrunnelsen FOR CSF1R-hemmere I HL og fase i-studier PÅ CSF1R-hemmere har blitt testet i HL og viser god toleranse, men begrenset effekt . Imidlertid kan kombinasjoner MED CD30CAR T-celler vise seg å være gunstige.