Chimerická antigen receptor T (AUTO-T) buněk ukázaly pozoruhodnou aktivitu v hematologické malignity. Molekuly CAR jsou vytvořeny fúzí variabilního fragmentu s jedním řetězcem (scFv) odvozeného z protilátky zaměřené na povrchový antigen se signální doménou T buněk . Tyto molekuly jsou naroubovány na T buňky, ačkoli inženýrský proces, který častěji používá retro – nebo lentiviry, nebo, v některých případech, plazmidy. CD19 je racionální cíl pro B-buněčných malignit včetně lymfomů, protože je exprimován na B-buňky ve všech fázích diferenciace, stejně jako v buňkách, které mají škodlivě proměnil . AUTO-T buněk namířených proti CD19 prokázaly vynikající reakce u pacientů s relabující nebo refrakterní B-buněčných lymfomů, zejména difuzní velkobuněčný B-lymfom (DLBCL) s některými trvalé remise vidět , vydělávat schválení FDA pro tuto indikaci. Nicméně alternativní cíle, které jsou potřeba pro jiné typy lymfomů, že nedostatek exprese CD19, včetně chorob, jako je klasický Hodgkinův lymfom (HL), anaplastický velkobuněčný lymfom (ALCL) a další T-buněčné lymfomy.
ačkoli většina pacientů s HL je vyléčena terapiemi první linie, asi 15% pacientů má buď primární refrakterní onemocnění, nebo později relaps po počáteční odpovědi na léčbu . Standard péče pro pacienty, kteří relapsu po první linii léčby je vysoká dávka chemoterapie s následnou autologní transplantaci kmenových buněk (ASCT) s asi polovina pacientů relaps po transplantaci . Prognóza těchto pacientů je bohužel špatná, přičemž alogenní transplantace kmenových buněk (alloSCT) tradičně nabízí nejlepší šanci na trvalou remisi . Tato léčba je však také spojena s významnou morbiditou a mortalitou. U pacientů s relapsem a refrakterním HL jsou zapotřebí nové terapie.
ALCL je podtyp lymfomu periferních T buněk s heterogenními charakteristikami . Zatímco prognóza pro anaplastické lymfom kinázy-pozitivní (ALK+) ALCL je dobrá, s 5 leté přežití sazby obvykle v rozmezí od 70 do 90%, ALK-negativní ALCL má více hlídané prognóza, s 5 leté přežití 40-60% . Záchranná terapie u pacientů s chemosenzitivním onemocněním obvykle sestává z vysoké dávky chemoterapie následované ASCT. Nicméně, prognóza pro pacienty s relabující/refrakterní ALCL, kteří nejsou způsobilí pro transplantaci nebo selhání druhé linie terapie je tristní, s jedním retrospektivní studie s mediánem přežití bez progrese a celkové přežití 3 a 1,8 měsíců, respektive . Pro léčbu pacientů s relabujícím nebo refrakterním ALCL jsou proto zapotřebí alternativní léčebné přístupy.
definující charakteristikou pro oba HL a ALCL je přítomnost společného povrchovou molekulu CD30, transmembránový receptor a členem tumor nekrotizující faktor (TNF) receptor nadčeleď . CD30 je také vyjádřena v dalších lymfomů, včetně všeobecně v lymphomatoid papulosis a v některých případech DLBCL, primární mediastinální B-buněčný lymfom, mykóz fungoides, periferní T-buněčný lymfom, a pro dospělé T-buněčné leukémie/lymfomu . U těchto lymfomů je také zapotřebí nové léčby, zejména u pacientů, kteří nereagují na počáteční léčbu.
CD30 je vynikající kandidát pro imunitní terapie vzhledem k jeho omezené expresi na nádorových buňkách, s omezenou výraz na malé podmnožiny aktivován normální (non-maligní) lymfocytů , což vede k nízké riziko pro nádor na cíl toxicity.
CD30 byl rozsáhle zkoumán jako terapie založená na protilátkách, od nahé po imunokonjugovanou. Nejvíce pozoruhodné výsledky byly dosaženy s brentuximab vedotin (BV), protilátka konjugát droga, namířená proti CD30, který má skutečně prokázaly dobrou toleranci stejně jako slibné aktivity v CD30+ lymfomy, s celkovou odpověď na léčbu (ORR) o 75% a kompletní remise (CR) rychlost 34% u pacientů s relabujícím nebo refrakterním HL a ORR 86% a ČR 57% sazby v relabujícím nebo refrakterním systémovým ALCL . Ačkoli se zdá, že BV má vynikající odpovědi, tyto nejsou obvykle trvalé, přičemž pouze 22% pacientů s relabující nebo refrakterní HL nepostupovalo po 5 letech . K překonání některých výzev s terapií založenou na protilátkách, jmenovitě omezená Perzistence a penetrace nádoru, byly prozkoumány CAR-T buňky. Úspěch a snášenlivost BV poskytly důkazy o proveditelnosti cílení CD30 s CAR-T buňkami.
Preklinické studie CD30-režie AUTO-T buňky
první studie VOZU-T buňky cílení CD30 byly provedeny v pozdní 1990 tím, Hombach et al. a prokázala účinnou cytolýzu buněčných linií CD30+ HL in vitro . Tyto molekuly automobilů však postrádaly ko-stimulační signalizaci, což omezovalo jejich účinnost. Savoldo a kol. navrhuje vyjádřit to AUTO molekuly na virus (virus Epstein Barrové)-specifické cytotoxické T buňky (EBV-Ctl), aby bylo zajištěno, že tyto chimerické buňky obdržel vhodné kostimulační signály v průběhu času. Jak se dalo očekávat, tyto buňky udržovány jejich schopnost rozpoznat a zabít EBV+ nádorů, zatímco ve stejnou dobu, cílení CD30+ nádorové buňky (jako HL a ALCL nádorových buněčných linií), a to jak in vitro a in vivo v xenogenních myší model . Následné pokroky v inženýrství proces zavedli ko-stimulační endodomains v AUTĚ molekuly, které z výrobní méně těžkopádné a že je třeba pro T-buňky s dual antigen specifičnost zastaralé .
bez ohledu na to se tyto studie zabývaly hlavními teoretickými výzvami spojenými s cílením molekuly CD30. Za prvé, zvýšené hladiny rozpustného CD30 jsou přítomny v plazmě pacientů s HL a ALCL, což vyvolává obavy z konkurence o vazbu na auto . Nicméně, in vitro studie ukázaly, že zvýšené hladiny rozpustné CD30 neměl negativně ovlivnit činnost CD30-řídil AUTO-a T-buněk , pravděpodobně proto, že epitop, na něž AUTO není zachována v rozpustné formě molekuly nebo protože více imobilizované molekuly jsou požadovány pro aktivaci AUTO signalizace.
za druhé, tyto studie zkoumaly úrovně exprese molekuly CD30 pro senzibilizaci CAR-T buněk zabíjení. CD30 je exprimován přechodně podskupinou lymfocytů po aktivaci, což vyvolává obavy z předčasné eliminace T nebo B buněk během virové odpovědi. Rozsáhlé ex vivo studie však vyloučit tento problém , naznačuje, že úroveň CD30 upregulace v paměťových T-buněk reagovat na virus-associated antigen stimulace je nižší než přítomné na nádorových buňkách, a tudíž nejsou schopni plně aktivovat zabíjení stroje. Antigen snímání AUTEM molekuly se stává důležitou vlastnost, jako je diferenciální exprese cílené molekuly mezi normální vs nádorové buňky nakonec bude diktovat výběr scFv pro aplikace AUTO proti solidních nádorů. Nicméně, potenciál pro CD30-režie AUTO-T buňky odstranit allo-reaktivní T buňky nebo regulačních T buněk (Tregs), které se objevují vyjádřit CD30 na výrazně vyšší úrovni, zůstává plně prozkoumány, a může otevřít tento postup pro ostatní aplikace v transplantaci kmenových buněk pole.
poslední důležitý aspekt řešený v těchto předklinických studiích se zabýval rezistencí některých buněk CD30+ na zabíjení zprostředkované CAR – T buňkami. CD30 je skutečně vyjádřen hematopoetických kmenových a progenitorových buňkách (HSPCs) během aktivace , což může vést k poruchy krvetvorby včetně aplazie kostní dřeně. Při porovnání účinnosti CAR-T buněk zaměřených na CD30 proti CD30+ Hspc a CD30+ MyLa kožním lymfomovým buňkám T buněk byla pozorována minimální aktivita proti prvním. Kromě toho hspc, které byly tříděny na CD30+ a CD30– buňky, vykazovaly pouze mírně vyšší cytolýzu v přítomnosti CAR – T buněk, která byla nicméně mnohem nižší ve srovnání s lýzou buněk myla lymfomu . Hspc, které byly současně kultivovány s CAR-T buňkami zaměřenými na CD30, měly také normální tvorbu myeloidních kolonií, pouze s mírným poklesem tvorby erytroidních kolonií. Důležité je, že adoptivní přenos autologní CD30-režie AUTO-T buňky během HSPC rozpuštění v humanizované myši vyrábí žádné zhoršení v lidské periferní T a B buněk, což naznačuje, zachovalé krvetvorby , a potvrzuje nedostatek významné toxicitě na kostní dřeň.
kromě diferenciální exprese CD30 na Hspc na úrovni, která je pod prahem pro aktivaci CAR – T buněk, se zdá pravděpodobná určitá vnitřní rezistence progenitorových buněk. Hspc exprimují vyšší hladiny serinové proteázy SP6 / PI-9, která inaktivuje granzym B, hlavní zprostředkovatel apoptózy zprostředkované T-buňkami . Ačkoli různé buňky používají různé strategie, toto pozorování je v souladu se studiemi na embryonálních buňkách a nádorech, které jsou navzdory exprimaci CD30 odolnější vůči zabíjení CAR – T buněk .
Klinických studiích CD30-režie AUTO-T buňky
Dvě zkoušky CD30 řídil AUTO-T buňky byly zveřejněny k dnešnímu dni, s oběma pokusy ukazující, že toto ošetření musí být dobře snášen s určitou protinádorovou aktivitu (Tabulka 1). Dvě studie využity různé scFv, kostimulační signály, dodávka systémů, příprava režimy a dávky, takže srovnání obtížné provádět, zatímco ve stejné době poskytuje široké scénáře z funkce.
Wang et al. léčeno 18 pacientů s relabujícím / refrakterním CD30 + lymfomem (17 s HL a 1 s kožním ALCL) s anti-CD30 CAR . Tohle AUTO (odvozené z AJ878606.1 protilátka) využití 4-1BB kostimulační endodomain a lentiviral vektor pro T buněčné inženýrství. Z 18 léčených pacientů bylo 9 dříve léčeno ASCT a 5 bylo léčeno BV. Pacienti dostávali průměrnou dávku 1.56 × 107 CAR – T buněk / kg po lymfodepletačním režimu sestávajícím ze 3 různých kombinací, které způsobily určitý stupeň cytopenie . Všichni pacienti měli febrilní infuzní reakci stupně 1 nebo 2 (horečky a zimnice), která se zotavila přes noc. Byly tam jen dva stupně 3 nebo vyšší toxicita: jeden pacient měl abnormality testů jaterních funkcí cítil být sekundární toxicity lymphodepletion a jeden pacient měl systolická dysfunkce, které pravděpodobně souvisí s předchozí antracyklinové expozice. Nebyl zjištěn žádný syndrom uvolňování cytokinů.
z 18 pacientů léčených a hodnotitelná odpověď, 7 pacientů částečná odpověď (PR) a 6 pacientů mělo stabilní onemocnění (SD) po infuzi Tam byly žádné CR a ORR bylo 39%. Medián přežití bez progrese byl 6 měsíců, přičemž 4 pacienti měli v době zveřejnění pokračující odpověď. Tam bylo 5 pacientů, kteří obdrželi druhé AUTO-T buňky infuze, u 3 pacientů zachování PR po 2. ošetření 1 pacienta zachování SD, a 1 pacient získání PR poté, co byly posouzeny jako s SD po 1. infuzi. Lymfatické uzliny se zdálo, lépe reagovat na léčbu než extranodálních onemocnění a plicní léze se objevil reagovat nejméně na léčbu, i když je obtížné dělat závěry u tak malé velikosti vzorku.
Ve většině léčených pacientů, AUTO transgenu úrovně v periferní krvi vrcholu za 3-9 dnů po infuzi a snížil na základní 4-8 týdnů po infuzi Vyšší čísla AUTO transgenů, stejně jako se snížil počet CD30+ nádorové buňky byly nalezeny u několika pacientů, kteří měli nádor biopsie provedena v té době, což naznačuje, že funkční AUTO-T buňky obchodované na nádorových lokalit.
Ramos et al. uvádí výsledky z 9 pacientů s relabujícím/refrakterním CD30+ lymfom (6 s HL, 1 s kožní ALK negativní ALCL, 1 se systémovými ALK+ ALCL, a 1 s DLBCL vyvinul HL) . Pro tuto studii byl CAR CD30 (odvozený z protilátky HSR3) kombinován s cd28 costimulačním endodomainem a dodán do T buněk prostřednictvím gammaretrovirového vektoru . Z 9 léčených pacientů mělo 8 aktivní onemocnění v době infuze buněk. Všichni pacienti byli silně předléčeni a relapsovali po 3 nebo více předchozích liniích léčby, 7 bylo dříve léčeno BV a 6 relapsovalo po ASCT.
pacienti dostávali až 2 × 108 CAR-T buněk zaměřených na CD30 / m2 bez lymfodepletačního režimu podaného před infuzí . Léčba byla dobře tolerována, bez připadající toxicity na AUTO-T buňky nebo epizody syndromu z uvolnění cytokinů hlášeny. Autoři také sledovali imunitu T buněk vůči virovým antigenům před a po infuzi a nezjistili žádný rozdíl v odpovědi T buněk na běžné virové patogeny . Kromě toho nebyly po léčbě CD30 CAR-T buňkami hlášeny žádné virové infekce.
z 8 léčených pacientů, kteří měli aktivní onemocnění v době infuze, 2 pacienti šli do ČR s 1 pacienta s ALK+ ALCL udržování ČR za 9 měsíců před relapsem, a dalších pacientů s HL nadále být v ČR po dobu delší než 2,5 roku v době zveřejnění . Tři pacienti měli SD a 3 pacienti měli progresivní onemocnění. Jeden léčený pacient, který byl již v CR V době infuze po obdržení záchranné chemoterapie po ASCT, udržuje CR více než 2 roky v době zveřejnění. Většina odpovědí byla pozorována u pacientů, kteří dostávali nejvyšší dávku. Tam byl závislý na dávce rozšíření CAR-T buněk v periferní krvi a úrovně dosáhla během 1 týdne infuze a odmítl poté, ale AUTO signály byly zjistitelné ještě 6 měsíců po infuzi u 6 pacientů .
navzdory tomu, že obě studie prokázaly dobrou snášenlivost a některé účinky, jsou výsledky ve srovnání s výsledky dosaženými u CAR-T buněk zaměřených na CD19 skromné. V současné době probíhá několik klinických studií s různými konstrukcemi CD30 CAR – T buněk u relabujících / refrakterních lymfomů, které řeší způsoby zlepšení výsledku (Tabulka 2).
Budoucí směry CD30-režie AUTO-T buňky
Rozebírá strategie pro zvýšení CD30-AUTO T-buňky musí být postupné a mnohostranný.
nejprve je třeba důkladně zvážit lymfodepleční režimy (obr. 1a). Lymphodepleting nebo klimatizace chemoterapie podávána před AUTO-T buňky infuze jasně zlepšit vytrvalost a účinnost CD19-řídil AUTO-a T-buněk . Lymfodepleční chemoterapie snižuje pacientovu nádorovou zátěž a počet supresivních buněk . Zejména mikroprostředí HL má řadu inhibičních buněk včetně Tregů, T pomocných buněk typu 2 a nádorových makrofágů (TAM), které podporují přežití buněk Hodgkin Reed Sternberg (HRS), maligních buněk v HL . Proto, v HL, lymphodepletion mohou navíc se lymfom buňky více citlivé na AUTO-T mobilní odstranění narušením této inhibiční mikroprostředí. Nakonec lymfodeplece odstraňuje konkurenční dřez buňky, takže IL-7 a IL-15 cytokiny okamžitě k dispozici pro expanzi CAR – T buněk .
a. Lymphodepleting chemoterapie snižuje počet tlumivé buňky, jako jsou T regulačních buněk a typ 2 helper buněk, které mohou ovlivňovat mikroprostředí nádoru. Stimuluje také produkci cytokinů, jako jsou IL-7 a IL-15, které mohou podporovat expanzi CAR-T buněk. b. Hodgkinův Reed-Sternberg buňky produkují brzlík a aktivace regulované chemokinový/CC chemokinový ligand 17 (TARC/CCL17) a makrofágů odvozených z chemokinový (MDC/CCL22), které přitahují typ 2 helper buněk a T regulačních buněk, které exprimují CCR4. CAR-T buňky, které jsou navrženy tak, aby exprimovaly CCR4, mohly zlepšit přenos do místa nádoru. c. bylo zjištěno, že Anti-CD30 CAR-T buňky exprimují PD-1, což naznačuje, že mohou být citlivé na cestu PD-1/PD-L1, která vede k imunitní inhibici. Kromě toho Hodgkinovy Reed-Sternbergovy buňky také exprimují PD-L1, což může mít inhibiční účinek na CAR-T buňky exprimující PD-1. Inhibitory kontrolních bodů mohou přerušit dráhu PD-1 / PD-L1 a vést ke zlepšení expanze a perzistence CAR-T buněk. Růstové faktory, jako je faktor stimulující kolonie 1 (CSF1), stimulují makrofágy spojené s nádorem (TAM), aby byly protizánětlivé a podporovaly vývoj nádoru. Kombinace s CSF1 receptor (CSF1R inhibitory) může pomoci přerušit inhibiční mikroprostředí nádoru a zlepšit AUTO-T buňky účinnost
optimální lymphodepleting režim má být použit s CD30 AUTO-T-buňky, není znám. Ve své klinické studii CAR-T buněk zaměřených na CD30 Wang et al. pacientů léčených s 1 ze 3 různých, klimatizace režimů (skládající se z fludarabin a cyklofosfamid, nebo gemcitabin, mustargen a cyklofosfamid nebo nab-paklitaxelu a cyklofosfamid), ale nenašel statisticky významný rozdíl mezi nimi . Mnoho probíhajících studií využít fludarabin a cyklofosfamid jako lymphodepletion, extrapolace z dat s CD19-režie AUTO-T klinických studiích (viz Tabulka 2; NCT02259556, NCT02917083, NCT03049449). Alternativní zkoumaný režim kombinuje fludarabin a bendamustin jako lymfodepleci (NCT02690545). Dalším přístupem je infuze pacientů s CD30 CAR-T buňkami jako konsolidace po ASCT. V tomto scénáři, ASCT působí jako konečný lymphodepletion režim, což vede k vysoké hladiny stimulační cytokiny, jako jsou IL-7 a IL-15, které může podpora AUTO-T expanzi buněk a odstranění potlačující lymfoidních buněk . Probíhá klinická studie CAR-T buněk zaměřených na CD30 jako konsolidace po ASCT u pacientů s CD30 + lymfomy (NCT02663297).
dalším důležitým aspektem, který je třeba zvážit u malignit CD30, je lokalizace onemocnění (obr. 1b). Lymfomy jsou hlavně onemocněním lymfoidních tkání (lymfatických uzlin a kostní dřeně), ale nádory CD30+ představují další výzvy. V HL je chemokinové prostředí velmi důležité při ovlivňování toho, které buňky se hromadí v nádoru . HRS buňky produkují brzlík a aktivace regulované chemokinový/CC chemokinový ligand 17 (TARC/CCL17) a makrofágů odvozených z chemokinový (MDC/CCL22). Tyto chemokiny přitahují buňky, které exprimují jejich příbuzný receptor, CCR4, jako jsou pomocné buňky typu 2, Tregy a myeloidní supresorové buňky (MDSC) . Infiltrace těchto buněk chrání HRS buňky tím, že vytváří nejen supresivní prostředí,ale také fyzickou bariéru před přístupem cytotoxických T lymfocytů. Aby bylo zajištěno preferenční obchodování s buňkami HL, Savoldo et al. vytvořené T buňky, které kromě exprimování CD30 CAR také koexprimovaly chemokinový receptor, CCR4 . Zjistili, že CD30-režie AUTO-T buňky, které vyjádřil CCR4 měl lepší migraci do nádoru a zvýšení anti-lymfom aktivity ve srovnání s CD30-režie AUTO-T buňky, které nelze vyjádřit CCR4 v HL myší modely . Jedním z obav o tento přístup je, že TARC a MDC jsou produkovány jinými tkáněmi, jako je kůže, což by mohlo zvýšit toxicitu. Protože však CD30 není na těchto místech exprimován, CAR-T buňky zaměřené na CD30 by neměly způsobovat toxicitu nádoru na cíl. Místo toho by car-T buňky řízené CD30, které koexprimují CCR4, mohly být také účinnější u kožních lymfomů CD30+ v důsledku zvýšeného přenosu na kůži. Klinické studie CD30-řídil AUTO-a T-buněk co-vyjádření CCR4 u pacientů s relabujícím/refrakterním CD30+ lymfomů se plánuje otevřít v blízké budoucnosti.
jak je popsáno výše, nádorové prostředí lymfomů a HL je zejména bohaté na inhibiční buňky a molekuly. Proto je nezbytné zvážit přidružení CAR CD30 k jiným imunitním regulátorům. Mezi kandidátskými strategiemi jsou inhibitory imunitního kontrolního bodu (ICIs, obr. 1C) jsou klíčové. To je zvláště zajímavé v HL, kde ici prokázaly vynikající aktivitu jednoho agenta . Kromě toho Ramos a kol. zjistil, že PD1 byl vyjádřen 33% infuze CD30-režie AUTO-T buněk , což naznačuje, že tyto buňky zůstávají náchylné k PD1/PDL1 inhibiční dráhy jednou v místě nádoru. V případě hlášení o pacientech, kteří postupovala po obdržení CD19-řídil AUTO-a T-buněk a následně byly ošetřeny s pembrolizumab, re-rozšíření CD19 AUTO-T buňky a klinické odpovědi bylo pozorováno . Je však třeba určit optimální načasování a sekvenování kombinace pro ICIs a CD30 CAR-T buňky. Kromě toho není znám účinek této kombinace na imunitně související nežádoucí účinky a syndrom uvolňování cytokinů. Alternativně, s pokroky v genovém inženýrství, selektivní downregulace inhibičních receptorů CAR T buňkami představují zajímavé alternativy .
přítomnost MDSC a jejich úloha v nádorové prostředí v HL také vyzývá k testování kombinace s román modulátory jako kolonie stimulující faktor 1 receptor (CSF1R inhibitory), protože MDSCs express CSF1R . Kromě toho růstové faktory, jako je CSF1, stimulují protizánětlivé makrofágy spojené s nádorem nebo fenotyp M2 a podporují růst nádoru . Zvýšený počet makrofágů spojených s nádorem je spojen s horší prognózou u HL . To dále podporuje zdůvodnění inhibitorů CSF1R v hl a studie fáze I na inhibitorech CSF1R byly testovány v HL a vykazují dobrou toleranci, ale omezenou účinnost . Kombinace s CD30CAR T buňkami se však mohou ukázat jako prospěšné.