az ELISA vizsgálat három különböző típusú adatot eredményez:
kvantitatív
az ELISA adatok egy standard görbével (ismert, tisztított antigén soros hígításával) összehasonlítva értelmezhetők az antigén koncentrációjának pontos kiszámítása érdekében a különböző mintákban (6.ábra).
kvalitatív
az ELISAs felhasználható arra is, hogy igen vagy nem választ kapjunk, jelezve, hogy egy adott antigén jelen van-e a mintában, összehasonlítva egy antigént vagy független kontroll antigént nem tartalmazó vakkútval.
szemikvantitatív
az ELISAs felhasználható az antigén relatív szintjének összehasonlítására a vizsgálati mintákban, mivel a jel intenzitása közvetlenül az antigén koncentrációjától függ.
Standard görbe
az ELISA-adatokat jellemzően optikai sűrűséggel és log-koncentrációval ábrázoljuk, hogy a 6.ábrán látható szigmoid görbét hozzunk létre. Ismert antigénkoncentrációkat használunk egy standard görbe előállításához, majd ezeket az adatokat használjuk az ismeretlen minták koncentrációjának mérésére a standard görbe Lineáris részéhez képest. Ez megtehető közvetlenül a grafikonon vagy görbe illesztési szoftverrel, amely általában megtalálható az ELISA lemezolvasókon.
ábra. 6. Tipikus Elisa standard görbe.
kalibrációs görbe modellek
ha kvantitatív eredményre van szükség, a legegyszerűbb módszer a standard értékek három példányának átlagolása és a vak kontrollminta leolvasásának levonása. Ezután rajzolja meg a standard görbét, keresse meg a legjobban illeszkedő vonalat, vagy legalább rajzoljon egy pont-pont görbét, hogy meghatározható legyen a minták koncentrációja. Ebben a szakaszban minden hígítást módosítani kell. Ez általában az a gyakorlati mérték, amelyre a kézi számítás elvégezhető.
a variáció az adatok ábrázolása a semi-log, log/log, log/logit és származékai – a 4 vagy 5 paraméteres logisztikai modellek. A szoftver alapú / automatizált megoldások használata lehetővé teszi a kifinomultabb grafikus megközelítések megfontolását. A lineáris regresszió használata egy szoftvercsomagban még több ellenőrzési lehetőséget kínál; ellenőrizni lehet az R2 értéket az illeszkedés általános jóságának meghatározásához. A görbe azon részére, ahol a koncentráció és a kiolvasás viszonyának lineáris kapcsolata van, az R2 értékek > 0,99 nagyon jól illeszkednek. A pontosság ezután tovább növelhető további standard koncentrációk alkalmazásával ebben a tartományban.
a lineáris diagram egyik aspektusa az, hogy tömöríti az adatpontokat a standard görbe alacsonyabb koncentrációin, így ez a legpontosabb tartomány (terület, amely valószínűleg eléri a szükséges R2 értéket). Ennek a tömörítésnek a ellensúlyozására félnapló diagram használható; itt a koncentrációérték naplóját (az x tengelyen) ábrázoljuk a leolvasáshoz (az y tengelyen). Ez a módszer egy S alakú adatgörbét ad, amely több adatpontot oszt el a felhasználóbarátabb szigmoid mintázatba.
a log/log (log of concentration against log of readout) parcellatípus több adatgörbét képes linearizálni. Az alacsony vagy közepes standard koncentrációtartomány ebben a modellben általában lineáris, csak a tartomány magasabb vége hajlamos lejteni. A log/logit és származékai, a 4 vagy 5 paraméteres logisztikai modellek kifinomultabbak, és bonyolultabb számításokat és becsléseket igényelnek a max, min, EC50 és meredekség értékekre. Az 5 paraméteres modell emellett megköveteli az aszimmetria értékét.
míg ezek a kalibrációs görbe modellek jobb teljesítményt nyújthatnak, jó kiindulási pont lenne a log-log diagram használata a visszanyerési százalék ellenőrzésével (analitikus visszanyerés tüskés mintákból). Alternatív megoldásként, legalább a standard görbe leolvasási értékek’ visszaillesztése ‘gyakran’ elég jó ‘ megközelítés. Az ellenőrzés legegyszerűbb módja a kalibrációs standardok visszaszámlálása, és annak ellenőrzése, hogy azok a névleges leolvasási érték 20% – án belül vannak-e. Az egyik figyelmeztetés az, hogy ne hagyatkozzunk a jó R2 értékekre, és találjuk meg azt a kalibrációs görbe modellt, amely a legjobb helyreállítási értékeket nyújtja a szabványoknak.
ELISA érzékenység
az ELISAs az egyik legérzékenyebb immunvizsgálat. Az ELISA tipikus detektálási tartománya 0,1 – 1 fmole vagy 0,01 ng-0,1 ng, az érzékenység az antitest-antigén kölcsönhatás sajátos jellemzőitől függ. Ezenkívül egyes szubsztrátok, például azok, amelyek fokozott kemilumineszcens vagy fluoreszcens jelet adnak, felhasználhatók az eredmények javítására.
mint korábban említettük, a közvetett detektálás magasabb szintű jelet eredményez, ezért érzékenyebbnek kell lennie. Ugyanakkor magasabb háttérjelet is okozhat, ezáltal csökkentve a nettó specifikus jelszinteket.