엘리사 분석 결과는 세 가지 유형의 데이터 출력을 산출합니다:
정량
엘리사 데이터는 다양한 샘플에서 항원의 농도를 정확하게 계산하기 위해 표준 곡선(알려진 정제 된 항원의 연속 희석)과 비교하여 해석 될 수 있습니다(그림 6).
정성적
엘리사는 또한 특정 항원이 샘플에 존재하는지 여부를 나타내는 예 또는 아니오 대답을 달성하는 데 사용될 수 있는데,이는 항원이 없는 빈 우물 또는 관련 없는 대조군 항원과 비교된다.
반 정량적
엘리사는 신호의 강도가 항원 농도에 따라 직접 변화하기 때문에 분석 샘플에서 항원의 상대 수준을 비교하는 데 사용할 수 있습니다.
표준 곡선
엘리사 데이터는 일반적으로 그림 6 과 같이 시그 모이 드 곡선을 생성하기 위해 광학 밀도 대 로그 농도로 그래프로 표시됩니다. 항원의 알려진 농도는 표준 곡선을 생성하기 위하여 이용되고 그 후에 이 자료는 표준 곡선의 선형 부분에 비교하여 불명한 표본의 농도를 측정하기 위하여 이용됩니다. 이 그래프에 직접 또는 일반적으로 엘리사 플레이트 리더에서 발견되는 곡선 피팅 소프트웨어를 수행 할 수 있습니다.
그림. 6. 전형적인 엘리사 표준 곡선.
교정 곡선 모델
정량적 결과가 필요한 경우 가장 간단한 방법은 표준 판독 값의 3 중 평균을 내고 블랭크 제어 샘플의 판독 값을 공제하는 것입니다. 다음으로,표준 곡선을 그리거나,가장 적합한 선을 찾거나,적어도 시료의 농도를 결정할 수 있도록 점 대 점 곡선을 그립니다. 만든 모든 희석은이 단계에서 조정 해야 합니다. 이것은 일반적으로 수동 계산을 수행 할 수있는 실용적인 범위입니다.
변형은 세미 로그,로그/로그,로그/로짓 및 그 파생물(4 또는 5 매개 변수 로지스틱 모델)을 사용하여 데이터를 플로팅하는 것입니다. 소프트웨어 기반/자동화 솔루션을 사용하면보다 정교한 그래프 작성 방법을 고려할 수 있습니다. 소프트웨어 패키지 내에서 선형 회귀를 사용하면 몇 가지 더 많은 검사 가능성이 추가됩니다. 농도 대 판독값의 관계가 선형 관계를 갖는 곡선의 해당 부분에 대해 아르 자형 2 값>0.99 는 매우 양호한 적합을 나타냅니다. 그런 다음 해당 범위의 추가 표준 농도를 사용하여 정확도를 더욱 향상시킬 수 있습니다.
선형 플롯의 한 측면은 표준 곡선의 낮은 농도에서 데이터 포인트를 압축하여 가장 정확한 범위(필요한 아르 자형 2 값을 달성 할 가능성이 가장 높은 영역)를 만드는 것입니다. 이 압축에 대응하기 위해 세미 로그 차트를 사용할 수 있습니다. 이 방법은 더 많은 데이터 포인트를 사용자 친화적 인 시그 모이드 패턴으로 분배하는 에스 모양의 데이터 곡선을 제공합니다.
로그/로그(판독 로그에 대한 농도 로그)플롯 유형은 더 많은 데이터 곡선을 선형화합니다. 중간 표준 농도 범위에 낮은 이 모형에서 일반적으로 선형입니다,범위의 단지 더 높은 끝은 경사 떨어져 경향이 있습니다. 로그/로짓 및 그 파생물 인 4 또는 5 매개 변수 로지스틱 모델은 최대,최소,최소 및 기울기 값의 더 복잡한 계산 및 추정이 필요한보다 정교합니다. 5 매개 변수 모델에는 비대칭 값이 추가로 필요합니다.
이러한 보정 곡선 모델은 향상된 성능을 제공 할 수 있지만 좋은 출발점은 복구 비율(스파이크 샘플에서 분석물 복구)을 확인하는 로그-로그 플롯을 사용하는 것입니다. 또는 표준 곡선 판독 값을 적어도’백 피팅’하는 것은 종종’충분히 좋은’접근 방식입니다. 확인하는 가장 간단한 방법은 교정 표준을 다시 계산하고 공칭 판독 값의 20%에 해당하는지 확인하는 것입니다. 한 가지 주의해야 할 점은’좋은’아르 자형 2 값에 의존하지 않고 표준에 가장 적합한 복구 값을 제공하는 교정 곡선 모델을 찾는 것입니다.
엘리사 감도
엘리사는 이용 가능한 가장 민감한 면역화학적검정법 중 하나이다. 엘리사의 전형적인 검출 범위는 항체-항원 상호 작용의 특정 특성에 따라 감도가 0.1 내지 1 에프몰 또는 0.01 내지 0.1 이다. 또한,향상된 화학 발광 또는 형광 신호를 산출하는 것과 같은 일부 기판은 결과를 개선하는 데 사용될 수 있습니다.
앞서 언급한 바와 같이,간접 검출은 더 높은 레벨의 신호를 생성하므로 더 민감해야 한다. 그러나,그것은 또한 따라서 순 특정 신호 레벨을 감소 높은 배경 신호를 일으킬 수 있습니다.