ELISA-analysen gir tre forskjellige typer datautgang:
Kvantitativ
ELISA-data kan tolkes i forhold til en standardkurve (en seriell fortynning av et kjent, renset antigen) for nøyaktig å beregne konsentrasjonene av antigen i forskjellige prøver (Figur 6).
Kvalitativ
ELISAs kan også brukes til å oppnå et ja eller nei-svar som indikerer om et bestemt antigen er tilstede i en prøve, sammenlignet med en tom brønn som ikke inneholder antigen eller et ikke-relatert kontrollantigen.
Semi-quantitative
ELISAs kan brukes til å sammenligne de relative nivåene av antigen i analyseprøver, siden signalintensiteten vil variere direkte med antigenkonsentrasjonen.
Standard kurve
ELISA data er typisk grafert med optisk tetthet vs log konsentrasjon for å produsere en sigmoidal kurve som vist i Figur 6. Kjente konsentrasjoner av antigen brukes til å produsere en standardkurve, og deretter brukes disse dataene til å måle konsentrasjonen av ukjente prøver i forhold til den lineære delen av standardkurven. Dette kan gjøres direkte på grafen eller med kurvetilpasning programvare som vanligvis finnes PÅ ELISA plate lesere.
Fig. 6. En TYPISK ELISA standard kurve.
Kalibreringskurvemodeller
hvis et kvantitativt resultat er nødvendig, er den enkleste måten å fortsette å gjennomsnittlig tre eksemplarer av standardavlesningene og trekke avlesningen av den tomme kontrollprøven. Deretter plotte standardkurven, finn linjen med best passform eller i det minste tegne et punkt til punkt-kurve slik at konsentrasjonen av prøvene kan bestemmes. Eventuelle fortynninger må justeres for på dette stadiet. Dette er generelt den praktiske i hvilken manuell beregning kan tas.
en variant er å plotte dataene ved hjelp av semi-log, log / log, log / logit og dets derivater – 4 eller 5 parameter logistiske modeller. Bruk av programvarebaserte / automatiserte løsninger gjør det mulig å vurdere mer sofistikerte grafiske tilnærminger. Ved hjelp av lineær regresjon i en programvarepakke legger til flere flere kontrollmuligheter; det er mulig å sjekke r2-verdien for å bestemme total godhet av passform. For den delen av kurven hvor forholdet mellom konsentrasjon og avlesning har et lineært forhold, representerer r2-verdier > 0,99 en veldig god passform. Nøyaktigheten kan da forbedres ytterligere ved å bruke ytterligere standardkonsentrasjoner i dette området.
Et aspekt av det lineære plottet er at det komprimerer datapunktene på de lavere konsentrasjonene av standardkurven, og dermed gjør det det mest nøyaktige området (område mest sannsynlig å oppnå den nødvendige r2-verdien). For å motvirke denne komprimeringen kan et semi-loggdiagram brukes; her er loggen av konsentrasjonsverdien (på x-aksen) plottet mot avlesningen (på y-aksen). Denne metoden gir En S-formet datakurve som distribuerer flere av datapunktene i det mer brukervennlige sigmoidmønsteret.
log/log (log of concentration mot log of readout) plot type klarer å linearisere mer av datakurven. Det lave til middels standard konsentrasjonsområdet er generelt lineært i denne modellen, bare den høyere enden av området har en tendens til å skråne av. Log / logit og dets derivater, 4 eller 5 parameter logistiske modeller, er mer sofistikerte som krever mer komplekse beregninger og estimeringer av max, min, EC50 og hellingsverdier. 5-parametermodellen krever i tillegg asymmetriverdien.
selv om disse kalibreringskurvemodellene kan levere forbedret ytelse, vil et godt utgangspunkt være å bruke logg-loggplottet med en sjekk på gjenopprettingsprosenten (analytgjenoppretting fra spikede prøver). Alternativt, minst ‘back-fitting’ standard kurve avlesning verdier, er ofte ‘en god nok’ tilnærming. Den enkleste måten å sjekke på er å beregne kalibreringsstandardene og kontrollere at de faller innenfor 20% av den nominelle avlesningsverdien. En advarsel er ikke å stole på ‘gode’ r2-verdier og finne den kalibreringskurvemodellen som leverer de beste gjenopprettingsverdiene for standardene.
Elisa Sensitivitet
ELISAs er en av de mest sensitive immunanalysene som er tilgjengelige. Det typiske deteksjonsområdet for EN ELISA er 0,1 til 1 fmol eller 0,01 ng til 0,1 ng, med følsomhet avhengig av de spesielle egenskapene til antistoff-antigen-interaksjonen. I tillegg kan noen substrater som de som gir forbedret kjemiluminescerende eller fluorescerende signal, brukes til å forbedre resultatene.
som nevnt tidligere vil indirekte deteksjon gi høyere signalnivåer og bør derfor være mer følsomme. Det kan imidlertid også føre til høyere bakgrunnssignal og dermed redusere netto spesifikke signalnivåer.