ELISA testu dává tři různé typy dat výstup:
Kvantitativní
ELISA údaje mohou být interpretovány ve srovnání se standardní křivkou (sériové ředění známé, čištěný antigen), aby bylo možné přesně vypočítat koncentrace antigenu v různých vzorcích (viz Obrázek 6).
Kvalitativní
testy Elisa může být také použit k dosažení odpověď ano nebo ne označující, zda konkrétní antigen je přítomen ve vzorku, ve srovnání s prázdnou dobře obsahující antigen nebo nepříbuzného kontrolní antigen.
Semi-kvantitativní
testy Elisa může být použita pro porovnání relativní úrovně antigen v testu vzorků, neboť intenzita signálu se bude měnit přímo s antigenem koncentrace.
Standardní křivky
ELISA dat je obvykle v grafu s optickou hustotou vs log koncentrace produkovat esovitě křivky, jak je znázorněno na Obrázku 6. Známou koncentrací antigenu se používají k vytvoření standardní křivky, a pak tato data jsou využívána k měření koncentrace neznámých vzorků ve srovnání s lineární část standardní křivky. To lze provést přímo na grafu nebo pomocí softwaru pro přizpůsobení křivky, který se obvykle nachází na čtečkách desek ELISA.
obr. 6. Typická standardní křivka ELISA.
Kalibrační křivky modely
Pokud kvantitativní výsledek je zapotřebí, nejjednodušší způsob, jak pokračovat, je v průměru třikrát z normy, hodnoty a odečíst čtení slepého kontrolního vzorku. Dále vykreslete standardní křivku, najděte linii nejvhodnější nebo alespoň nakreslete křivku bod k bodu, aby bylo možné určit koncentraci vzorků. V této fázi je třeba upravit všechna ředění. To je obecně praktický rozsah, v jakém lze provést ruční výpočet.
variací je vykreslení dat pomocí semi-log, log/log, log/logit a jeho derivátů – logistických modelů 4 nebo 5 parametrů. Použití softwarových / automatizovaných řešení umožňuje uvažovat o sofistikovanějších přístupech grafů. Použití lineární regrese v rámci softwarového balíčku přidává několik dalších možností kontroly; je možné zkontrolovat hodnotu R2 a určit celkovou dobrotu fit. Pro tu část křivky, kde má vztah koncentrace k odečtu lineární vztah, představují hodnoty R2 >0,99 velmi dobrou kondici. Přesnost pak může být dále zvýšena použitím dalších standardních koncentrací v tomto rozmezí.
Jeden aspekt lineární děj, je to, že je to komprimuje datové body nižší koncentrací standardní křivky, tedy aby ten nejpřesnější rozsah (oblast s největší pravděpodobností k dosažení požadované R2 hodnota). K potlačení této komprese lze použít polologový graf; zde je protokol hodnoty koncentrace (na ose x) vynesen proti odečtu (na ose y). Tato metoda dává ve tvaru S daty křivku, která distribuuje více datových bodů do více uživatelsky přívětivé esovitě vzor.
typ grafu log/log (log koncentrace proti logu odečtu) dokáže linearizovat více datové křivky. Nízký až střední standardní rozsah koncentrací je v tomto modelu obecně lineární, pouze vyšší konec rozsahu má tendenci se sklonit. Log / logit a jeho deriváty, logistické modely 4 nebo 5 parametrů, jsou sofistikovanější a vyžadují složitější výpočty a odhady hodnot max, min, EC50 a sklonu. Model 5 parametrů navíc vyžaduje hodnotu asymetrie.
zatímco tyto modely kalibračních křivek mohou přinést lepší výkon, dobrým výchozím bodem by bylo použití grafu log-log s kontrolou procenta zotavení (zotavení analytu ze špičatých vzorků). Případně alespoň zpátky-montáž‘ standardní křivky odečet hodnot, je často ‚dost dobrý‘ přístup. Nejjednodušší způsob, jak zkontrolovat, je zpět vypočítat kalibrační standardy a zkontrolovat, zda spadají do 20% jmenovité hodnoty odečtu. Jednou námitkou není spoléhat se na „dobré“ hodnoty R2 a najít model kalibrační křivky, který poskytuje nejlepší hodnoty obnovy pro standardy.
citlivost ELISA
Elisa jsou jedním z nejcitlivějších dostupných imunotestů. Typický detekční rozsah pro ELISA je 0,1 až 1 fmol nebo 0,01 ng až 0,1 ng, s citlivostí závislou na konkrétních charakteristikách interakce protilátka-antigen. Kromě toho, některé substráty jako ty, dávat rozšířené chemiluminiscenční nebo fluorescenční signál, mohou být použity pro zlepšení výsledků.
jak již bylo zmíněno, nepřímá detekce bude produkovat vyšší úrovně signálu, a proto by měla být citlivější. Může však také způsobit vyšší signál na pozadí, čímž se sníží úroveň čistého specifického signálu.