Monoaminooxidázy-Inhibice a Související Antioxidační Aktivitu Rostlinných Extraktů s Potenciální Antidepresivní Akce

Abstrakt

monoaminooxidázy (MAO) katalyzuje oxidativní deaminaci aminů a neurotransmiterů a je zapojen do poruchy nálady, deprese, oxidační stres a nepříznivé farmakologické účinky. Tato práce studuje inhibici lidského MAO-A Hypericum perforatum, Peganum harmala a Lepidium meyenii, o nichž se uvádí, že zlepšují a ovlivňují náladu a duševní stavy. Následně je antioxidační aktivita spojená s inhibicí MAO poprvé stanovena v rostlinných extraktech. H. perforatum inhiboval lidský MAO-A a extrakty z květů poskytly nejvyšší inhibici (IC50 63,6 µg / mL). Rostlinné extrakty byly analyzovány pomocí HPLC-DAD-MS a obsažené pseudohypericin, hypericin, hyperforinu, adhyperforin, hyperfirin, a flavonoidy. Hyperforin neinhiboval lidský MAO-A a hypericin byl špatným inhibitorem tohoto izoenzymu. Kvercetin a flavonoidy významně přispěly k inhibici MAO-A. P. extrakty semen harmala vysoce inhibovaly MAO-A (IC50 49,9 µg / L), což je tisíckrát účinnější než extrakty h. perforatum díky obsahu β-karbolinových alkaloidů (harmalin a harmin). Extrakty z kořene l. meyenii (maca) neinhibovaly MAO-a. tyto rostliny mohou vykazovat ochranné účinky související s antioxidačními účinky. Výsledky této práce ukazují, že extrakty P. harmala A H. perforatum vykazují antioxidační aktivitu spojenou s inhibicí MAO (tj.

1. Úvod

enzym monoaminooxidáza (MAO) metabolizuje xenobiotické a endogenní aminy a neurotransmitery včetně serotoninu, dopaminu, norepinefrinu, tyraminu, tryptaminu a neurotoxinu MPTP . Vyskytuje se jako dva izoenzymy, MAO-A a MAO-B, které hrají důležitou roli v centrálním nervovém systému (CNS) a periferních orgánech. MAO-B se podílí na neurodegenerativních onemocněních a MAO-A na psychiatrických stavech a depresích. Inhibitory MAO-B jsou užitečné neuroprotectants, vzhledem k tomu, že inhibitory MAO-A jsou účinná antidepresiva, i když jejich použití může vyvolat nežádoucí účinky (např. hypertenzní krize s potraviny obsahující tyramin) . Na druhou stranu, oxidaci biogenních aminů a neurotransmiterů MAO enzymů vytváří peroxid vodíku (H2O2), kyslíkové radikály a aldehydy, které jsou rizikové faktory pro buněčný oxidační zranění. Proto inhibice MAO může vést k ochraně před oxidačním stresem a neurotoxiny . Nedávné výzkumy ukázaly, že rostlinné a potravinářské extrakty mohou inhibovat enzymy MAO, což má za následek výše uvedené biologické účinky . Na druhé straně v důsledku inhibice MAO mohou být tyto produkty zapojeny do nežádoucích interakcí s jinými rostlinnými přípravky, potravinami nebo léky .

Hypericum perforatum L. (čeleď Hypericaceae) (třezalka tečkovaná), je široce používán pro zdravotní účely a jejich produkty jsou komerčně dostupné jako bylin, potravních doplňků, čajů, tinktur, šťáv, olejových macerátu, phytopharmaceuticals a potravinářských přídatných látek a doplňků . H. perforatum je populární pro léčbu mírné a středně těžké deprese . Může vyvolat nepříznivé farmakologické interakce s ostatními bylinami, léky nebo potravinami . Jeho schopnost zmírnit a zlepšit poruchy nálady a deprese je přičítána aktivním sloučeninám, které vykazují antidepresivní vlastnosti . Nejvíce uznávaných mechanismu účinku je monoaminů inhibice zpětného vychytávání ale dalších mechanismů, včetně inhibice monoaminooxidázy a synergické účinky mohou být zapojeny . Nitraria harmala (rodina Zygophyllaceae) a Lepidium meyenii (čeleď Brassicaceae) (maca) jsou rostliny s účinky na CNS a potenciální antidepresivní akce . P. harmala, původem ze středomořské oblasti a Asie a rozšířený do oblastí Severní Ameriky, se používá jako víceúčelový lék na zdraví včetně poruch CNS. Přípravky této rostliny mohou vyvolat nepříznivé farmakologické interakce . L. meyenii je jedlé rostliny z centrálních Andách, jejíž kořeny se používají jako potraviny povzbuzující a nutraceutical na zlepšení fyzické a psychické podmínky a plodnosti . Cílem této práce bylo studium inhibice lidské MAO-A tím extraktů H. perforatum, P. harmala a L. meyenii (maca), stejně jako jejich aktivních složek, které byly identifikovány a analyzovány pomocí HPLC-DAD-MS a následně zhodnotit antioxidační aktivitu, která je specificky spojena s inhibice MAO. Tato specifická antioxidační aktivita je poprvé stanovena v rostlinných extraktech.

2. Materiály a metody

Hypericum perforatum L. rostliny shromážděné v Ciudad Real (Španělsko) byly sušeny a odděleny po částech: květiny; horní nadzemní části rostliny včetně rozvětvených stonků a listů, ale bez květů; a hlavní stonky (střední a nižší) a kořeny. Byly mleté a prášek použitý pro přípravu vzorku. Komerční byliny a bylinné doplňky (kapsle a tablety) h. perforatum byly také zakoupeny v místních bylinných obchodech. Peganum harmala L. rostlina a semena byly shromážděny v Toledu (Španělsko). Lepidium meyenii (maca) ve formě prášku i komerčních tablet byly získány z Peru a místních obchodů. Hypericin standard (>95% purity by HPLC) from HWI Analytik GMBH pharma solutions, hyperforin dicyclohexylammonium salt, quercetin, harmaline, harmine, catalase, clorgyline, 3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine (TMB), and horseradish peroxidase (HRP) type II were purchased from Sigma-Aldrich.

2.1. Sample Preparation of Plant Extracts

Samples containing H. perforatum (i.e., plant parts, herbal preparation, capsules, or tablets) (500 mg) were homogenized in 10 mL of water/methanol (1 : 1) použitím homogenizátoru Ultra Turrax se odstředí při 10000 ot / min po dobu 10 minut a supernatant se odebere. Proces byl opakován dvakrát se zbytky a tři supernatant frakce, získané, smíšené a analyzovány pomocí HPLC, jak je uvedeno níže. Po třech po sobě jdoucích extrakcích byly výtěžky hypericinu a pseudohypericinu vyšší než 97%. Vzorky L. meyenii (maca) (500 mg) a P. harmala semena (500 mg) byly homogenizované, respektive v 10 mL vody/methanolu (1 : 1) nebo 10 mL 0,6 M kyselina chloristá : methanol (1 : 1) použitím homogenizátoru Ultra Turrax se odstředí při 10000 ot / min po dobu 10 minut a supernatant se odebere. Tento postup se opakoval dvakrát se zbytkem a shromážděné supernatanty byly smíchány a analyzovány HPLC, jak je uvedeno níže.

2.2. RP-HPLC Analýzu Rostlinných Extraktů

analýza H. perforatum extraktů byla provedena pomocí RP-HPLC s diode array UV a fluorescenční detekcí pomocí HPLC 1050 (Agilent) spolu s 1100 detektor diodového pole (DAD) (Agilent) a 1046A-fluorescenční detektor. 150 3,9 mm i.d., 4 µm, pro separaci byl použit sloupec Nova-pak C18 (Waters). Chromatografické podmínky byly 50 mM pufr fosforečnanu amonného (pH 3) (pufr a) a 20% a v acetonitrilu (pufr B). Gradient byl naprogramován z 0% (100% A) na 32% B za 8 min a 100% B za 10 min. Průtok byl 1 mL / min, teplota kolony byla 40°C a objem injekce byl 20 µL. Detekce hypericinů byla provedena absorpcí při 590 nm a fluorescencí při 236 nm pro excitaci a 592 nm pro emise. Koncentrace hypericinu byla stanovena z kalibrační křivky odezvy (absorbance při 590 nm) oproti koncentraci s řešení vyrobené v laboratoři z hypericin standard. Stejný faktor odpovědi byl aplikován na pseudohypericin, protohypericin a protopseudohypericin. Flavonoidy a flavonoidní glykosidy byly analyzovány na 265 nm a 355 nm a koncentrace kvercetinu byla stanovena na 355 nm z kalibrační křivky odezvy versus koncentrace. HPLC frakce odpovídající flavonoidy a flavonoidní glykosidy (7 až 11 min) bylo odebráno po sobě jdoucí injekce H. perforatum extrakt (bylinky) a po odpaření ve vakuu, se rozpustí v 30% methanolu a použit pro MAO-A inhibice. Na phloroglucinols (hyperforinu, adhyperforin, hyperfirin, a adhyperfirin) byly analyzovány při vlnové délce 280 nm za použití stejné kolony (Nova-pak C18) a podmínek, ale v rámci po izokratické eluci s 20% 50 mM fosforečnan amonný pufr, pH 3, a 80% acetonitrilu. Koncentrace těchto sloučenin byla stanovena z kalibrační křivky standardu hyperforinu. Analýza β-karbolinových alkaloidů v P. harmala a L. meyenii byla provedena, jak bylo popsáno výše .

2.3. Identifikace pomocí HPLC-ESI-Hmotnostní Spektrometrie

Identifikace sloučenin v H. perforatum extraktů bylo provedeno pomocí HPLC-MS (elektrosprejem-negativní ion režimu) pomocí série 1200 HPLC-DAD spolu na 6110 kvadrupól-MS (Agilent). Chromatografická separace byla provedena na 150 2,1 mm i.d. koloně zorbax SB-C18 (5 µm) (Agilent Technologies). Chromatografické podmínky byly eluentu A: kyselina mravenčí (0.1%); B: kyselina mravenčí (o 0,1%) v acetonitrilu; gradient: 0% až 70% B v 8 min a 100% B na 10 min, průtok: 0,3 mL/min; : 40°C; hmotnost rozsah: 50 do 700 u, a kužel napětí: 150 V. Pro určení phloroglucinols (např. hyperforinu), separace byla provedena pomocí Nova-pak C18 (4 µm) sloupec se stejným eluents a po izokratické eluce (eluční A, 20% a eluent B, 80%) při průtoku 0,7 mL/min a zaznamenáno hmotnostní spektrum v pozitivní a negativní ionizace. Identifikace sloučenin byla provedena na základě hmotnostních spekter, UV-VIS spekter (DAD) chromatografických píků a koeluce se standardy. β-Karboliny v P. harmala a L. meyenii byly identifikovány, jak bylo dříve popsáno .

2.4. Testy inhibice monoaminooxidázy (MAO-A)

MAO byly provedeny stejně jako jinde . Stručně řečeno, membránové proteinové frakce obsahující MAO-A (BD-Gentest)byly zředěny na požadované koncentrace ve 100 mM pufru fosforečnanu draselného (pH 7,4). 0,2 mL reakční směsi obsahující 0,01 mg / mL proteinu a 0.25 mM kynuramin ve 100 mM fosforečnanu draselném (pH 7,4) byl inkubován při 37°C po dobu 40 minut. Po inkubaci byla reakce zastavena přidáním 2 N NaOH (75 µL), následované přídavkem 70% HClO4 (25 µL) a vzorek byl odstředěna (10000) 10 min. Supernatant (20 µL) byl aplikován do HPLC a deaminace produkt kynuramine (tj., 4-hydroxychinolin), vytvořené v průběhu enzymatické reakce určí RP-HPLC-diode array detekcí při 320 nm. Pro výpočet koncentrace 4-hydroxychinolinu byla vytvořena křivka odezvy plochy versus koncentrace. Aby bylo možné provést testy inhibice MAO, alikvoty extraktů z rostlin nebo komerční přípravky nebo místo čisté sloučeniny byly vhodně zředěny a přidán do reakční směsi obsahující kynuramine (0,25 mM) a MAO-A (0,01 mg/mL proteinu) v 100 mM draselného fosfátového pufru (pH 7.4), enzymatické reakce a analýzy provádí jak je uvedeno výše, a ve srovnání s odpovídajícími kontrolami, které obsahují rozpouštědla. Standardní inhibitor klorgylin byl použit jako pozitivní kontrola inhibice (>90% inhibice při 2,5 µM). Inkubace byly prováděny alespoň ve dvou vyhotoveních z různých experimentů a hodnoty IC50 byly vypočteny pomocí GraphPad Prism 4.0.

2.5. Stanovení Antioxidační Aktivity Spojené s Inhibitory Monoaminooxidázy (MAO) Inhibice

Testy (0,2 mL) reakční směsi na 70 mM draselného fosfátového pufru (pH 7.4), obsahující 0, 025 mg/mL MAO-protein a 0,25 mM kynuramine, byly inkubovány při 37°C po dobu 40 min v nepřítomnosti (kontrolní testy), nebo v přítomnosti rostlinných extraktů. Testy MAO byly také provedeny v přítomnosti klorgylinu (25 µM), klasického inhibitoru MAO-A (pozitivní kontrola inhibice) nebo katalázového enzymu (100 µg/mL). Po inkubační době byla reakční směs přidána s aktivním uhlím (3,5 mg), smíchána a filtrována (0,45 µm). K roztoku bylo přidáno 20 µL 10 mM tetramethylbenzidin (TMB) v 40% DMSO a 20 µL křenovou peroxidázou (HRP) typ II (1 mg/mL), stále 5 min, a přidá se 0,3 mL 0,5 M roztoku H2SO4. Absorbance při 450 nm byla měřena pro stanovení TMB diiminu, žlutého produktu, který je výsledkem oxidace TMB HRP a H2O2 generovaného při oxidační deaminaci katalyzované MAO. Oxidace TMB v přítomnosti inhibitorů MAO byla porovnána s odpovídajícími kontrolami bez inhibitorů a odpovídající polotovary vykazovaly nepřítomnost interferencí.

3. Výsledky a diskuse

komerční přípravky h. perforatum inhibovaly lidský MAO-A s podobnou účinností: hodnoty IC50 142,3 ± 30.6 µg / mL (rostlinný přípravek), 193 ± 61 µg / mL (tobolky) a 173 ± 29 µg / mL (tablety) (Obrázek 1 písm. a)). O rostliny H. perforatum výtažky z květů poskytují nejvyšší inhibice (IC50 63,6 ± 9.4 µg/mL), následuje letecký stonky a listy (IC50 143.6 ± 16.5 µg/mL) a nejnižší v kořenové extrakty (Obrázek 1(b)). Extrakty z nadzemních částí H. perforatum byly analyzovány pomocí HPLC-DAD-ESI (elektrosprejem-negativní ionizace). Prokázaly přítomnost dvou hlavních naftodiantronů identifikovaných jako pseudohypericin a hypericin(Obrázek 2 (A) a tabulka 1). Květinové extrakty měly dvě další sloučeniny identifikované jako protopseudohypericin a protohypericin. Fenoliky a flavonoidy oplývaly extrakty h. perforatum (Obrázek 2(b)). Chlorogenová kyselina a quercetin, glykosidy rutin, hyperosid, isoquercitrin, miquelianin, acetyl hyperosid, a quercitrin, stejně jako volný quercetin a biapigenin, byly identifikovány pomocí HPLC-DAD (ESI, negativní ionizace) a TÁTA (Tabulka 1). Na druhou stranu, květinové výtažky, obsažené čtyři phloroglucinols (Obrázek 2(c)), které byly identifikovány pomocí HPLC-DAD-MS (ESI negativní a pozitivní ionizace) a TÁTA jako hyperforinu, adhyperforin, hyperfirin, a adhyperfirin (Tabulka 1). Přítomnost těchto sloučenin (obrázek 3) v rostlině souhlasí s dalšími výsledky . Obsah hlavních složek byl stanoven HPLC (Tabulka 2). Koncentrace pseudohypericin byla vyšší než hypericin, vzhledem k tomu, protopseudohypericin a protohypericin byly menší sloučeniny (0.4 µg/mg protopseudohypericin a 0.V květech bylo zjištěno 17 µg/mg protohypericinu). V rostlině byl nejvyšší obsah hypericinů zjištěn u květů s výrazně nízkými hladinami zjištěnými ve stoncích a nepřítomností v kořenech. Hyperforin byl vysoce hojný v květinách (27,2 µg / mg), zatímco koncentrace v komerčních přípravcích se pohybovala od 0,36 do 2,4 µg/mg. V květech se také objevil adhyperforin (1,4 ± 0,07 µg/mg), hyperfirin (4,2 ± 0,02 µg/mg) a adhyperfirin (0,46 ± 0,02 µg/mg). Flavonoidy oplývaly h. perforatum a většina z nich byla quercetin, glykosidy (Obrázek 2(b)), jejichž přítomnost byla výrazně vyšší u květů než v jiných částech rostliny. Obsah volného kvercetinu v květech byl 2,0 µg / mg, zatímco obsah 6,7 µg / mg byl stanoven v komerčních přípravcích.

()

(b)

(a)
(b)

Obrázek 1

Inhibice lidské monoaminooxidázy-A (MAO-A) výtažky z komerčních přípravků z H. perforatum (a) (kapsle, ■; tablety, ▲; byliny,▼) a výtažky z různých částí rostliny (b) (květiny,∆; horní stonky,◊; hlavní stonky (centrální),×; kořeny,○). Významné rozdíly () mezi extrakty ve vybrané koncentraci jsou označeny různými písmeny.

(a) nm

(b) nm

(c) nm

(a) nm
(b) nm
(c) nm

Figure 2

HPLC chromatograms of extracts from H. perforatum flowers. (a) Detection of hypericins at 590 nm. 1: protopseudohypericin; 2: pseudohypericin; 3: protohypericin; and 4: hypericin. (b) Detection of phenols and flavonoids at 265 nm. 1: chlorogenic acid; 2: rutin; 3: hyperoside; 4: isoquercitrin; 5: miquelianin; 6: acetyl hyperosid; 7: quercitrin; 8: quercetin; a 9: biapigenin. c) detekce floroglucinolů při 280 nm. 1: hyperfirin, 2: adhyperfirin; 3: hyperforin; a 4: adhyperforin.

Obrázek 3

Struktury sloučenin identifikovaných v H. perforatum: hypericins, quercetin a flavonoidy quercetin a phloroglucinols (hyperforinu, adhyperforin, hyperfirin, a adhyperfirin).

inhibice MAO – A H. extrakty perforatum indikují výskyt inhibitorů. Hypericiny, hyperforin a flavonoidy jsou možnými přispěvateli k této inhibici a byly hodnoceny jako inhibitory (obrázek 4). Hypericin inhiboval MAO-a (IC50 35,5 ± 2,1 µM nebo 17,9 µg/mL) (Obrázek 4 písm. a)). Z koncentrace v tabulce 2 je hypericin slabým přispěvatelem k inhibici MAO v extraktech h.perforatum. Opravdu, vypočítá obsah hypericinu v IC50 hodnoty v testech flower extract (tj. 63.6 µg/mL) 0,1 µg/mL, která je nízká ve srovnání s IC50 hypericin (17.9 µg/mL). Hyperforin NEINHIBOVAL MAO-A (obrázek 4 b)). 4 písm. b)) s hodnotou IC50 11,1 ± 0,8 µM (tj. 3,36 µg / mL). Pak byl quercetin lepším inhibitorem než hypericin, i když jeho účinnost byla stále nízká, aby vysvětlila celou inhibici extraktů. Vypočítaný obsah kvercetinu při IC50 v testech květového extraktu byl tedy 0,13 µg / mL, což je nižší než IC50 kvercetinu (3,4 µg/mL). Když frakce odpovídající glykosidy, quercetin a flavonoidy (7-11 min, Obrázek 2(b)) byly shromážděny pomocí RP-HPLC, inhibují MAO-A (90% inhibice na 700 µg/mL extraktu), což ukazuje na přínos těchto sloučenin inhibice MAO v H. perforatum, pravděpodobně aditivní účinky. Poté by inhibice MAO – A mohla vzniknout ze složek, jako je kvercetin a příbuzné flavonoidy (tj. Kromě toho by zde neidentifikované minoritní sloučeniny mohly také přispívat k inhibici MAO, protože hlavní sloučeniny v tabulce 2 nevysvětlují celou inhibici.

()

(b)

(a)
(b)

Obrázek 4

Inhibice lidské monoaminooxidázy-A (MAO-A) aktivní složky H. perforatum: hypericin (a) a quercetin (■) a hyperforinu (▲) (b).

výtažky ze semen P. harmala vysoce inhibované lidské MAO-A(obrázek 5 (A)), které poskytují hodnotu IC50 49,9 ± 5,6 µg / L. Chromatografická analýza ukázala, že inhibice byla vzhledem k přítomnosti beta-carboline alkaloidy harmalin a harmin, které byly identifikovány pomocí HPLC-DAD-MS (Obrázek 5(c)). Obsah těchto alkaloidů stanoven v semenech byl 48,5 mg/g pro harmalin a 40,0 mg/g pro harmin (to znamená, 2.4 ng/mL a 2,0 ng/mL, resp., do testů na IC50). Proto byla inhibiční účinnost Mao-A semen P. harmala 1274krát účinnější než účinnost květů h.perforatum. Jak je znázorněno na obrázku 5(b), extrakty z kořenů Lepidium meyenii neinhibují lidské MAO-A. L. meyenii (maca) je populární rostlina z andské Vysočiny, jejíž kořeny se stále více používají pro své nutriční a léčivé vlastnosti jako povzbuzující a ke zlepšení nálady a sexuální výkonnosti . Předchozí zprávy ukázaly, že obsahují alkaloidy včetně β-karbolinů, které by mohly inhibovat MAO. Analýza extraktů pro β-karbolinové alkaloidy poskytla 25 µg / g (prášek maca) a 11,7 µg / g (tobolky)kyseliny 1-methyl-1,2,3,4-tetrahydro-β-karbolin-3-karboxylové jako hlavní sloučeninu. Tento specifický β-karbolin není inhibitorem MAO-A .

()

(b)

(c)

(a)
(b)
(c)

Obrázek 5

Inhibice lidské monoaminooxidázy-A (MAO-A) podle P. harmala semena (a) a L. meyenii kořen (maca) extrakty (b) (kapsle, ▼ a prášek, ■). c) HPLC chromatogram extraktu ze semen P. harmala, který při 254 nm silně inhiboval detekci Absorbance lidského MAO-a. Identifikované sloučeniny jsou harmalin (m/Z při 215 (M + H)+, při 375 nm) a harmin (m / z při 213 (M + H)+, při 245 a 322 nm).

MAO vytváří peroxid vodíku (H2O2), který se podílí na oxidačním poškození buněk a patologických stavech . Poté může inhibice MAO vést ke specifickým antioxidačním účinkům . Pro studium antioxidační aktivity, která je spojena s inhibice MAO, experimenty byly navrženy v tomto výzkumu, který souvisí aktivita MAO-A s oxidací tetramethylbenzidin (TMB) s křenovou peroxidázou (HRP) a H2O2 vyrábí během oxidativní deaminace katalyzované MAO (viz Obrázek 6). Extrakty h. perforatum a P. harmala, které inhibovaly MAO-a, jak je uvedeno výše, vysoce snížená oxidace TMB. Naproti tomu extrakty l. meyenii root (maca), které neinhibují MAO, měly v tomto testu nízkou antioxidační aktivitu. Klorgylin, který je silným inhibitorem MAO-a, při použití jako kontrola velmi snížil oxidaci TMB. Totéž se stalo u přítomnosti katalasy v médiích, že odstraňuje H2O2 generovaného MAO-A. Proto, tyto výsledky ukazují, že H. perforatum a P. harmala extrakty poskytují specifické antioxidační akce spojené s nižší produkce H2O2 inhibicí MAO.

Obrázek 6

Antioxidační aktivity, která je spojena s inhibice MAO v testech tažné aktivita MAO-A, s následnou oxidaci tetramethylbenzidin (TMB) v přítomnosti H2O2 generovány v reakci MAO, a křenovou peroxidázou (HRP). Graf ukazuje oxidaci TMB na diimine (absorbance při 450 nm) v kontrolních testů (100%), a v přítomnosti H. perforatum (bylinky a květinové výtažky, 800 µg/mL), P. harmala semena výtažky (o 0,8 µg/mL), L. extrakty z kořene meyenii (maca) (800 µg / mL), klorgylinu (standardní inhibitor MAO-A) (25 µM) a katalázy (100 µg/mL). rozdíly () ve srovnání s kontrolami.

h. perforatum zlepšuje poruchy nálady a deprese . Jak je ukázáno zde, obsahuje sloučeniny, jako je hyperforin, hypericiny a flavonoidy odpovědné za antidepresivní účinky (Obrázek 2 a Tabulka 2). Specifický mechanismus antidepresivního účinku však není zcela pochopen. Nejvíce přijatým mechanismem je inhibice zpětného vychytávání monoaminu . Některé studie však naznačují kombinaci mechanismů a synergických účinků . P. harmala má řadu biologických a farmakologických účinků. Jejich semena se stále častěji používají k rekreačním účelům kvůli jejich psychoaktivním a neuroaktivním účinkům . Inhibice lidského MAO-A je zavedeným mechanismem antidepresivního účinku . Jako antidepresiva se úspěšně používají jak ireverzibilní, tak reverzibilní inhibitory MAO-A (např. V této studii extrakty h. perforatum inhibovaly lidský MAO-a. tato inhibice však byla mírná. To bylo více než tisíckrát nižší než u extraktů semen P.harmala. Sacher et al. hlásili, že obsazení MAO-A lokalit do lidského mozku určena PET zobrazování s 11C-harmin závazné (tj. stejné beta-carboline zodpovědný za inhibice MAO, v. P. harmala) byla vysoká reverzibilní inhibitor MAO, jako je moklobemid, ale nízká pro H. perforatum extrakt (třezalka tečkovaná) . To znamená, že inhibitory MAO-a v H.perforatum se na rozdíl od β-karbolinového harminu účinně nevážou na aktivní místa MAO-A v mozku. Inhibitory MAO-a v H. perforatum jsou flavonoidy, jako je quercetin a jejich glykosidy a hladiny těchto látek, které dosáhnou mozek nemusí být dostatečně obsadit místa MAO-v mozku a inhibují enzym . V kontrastu, inhibitory P. harmala jsou beta-carboline alkaloidy včetně harmin a harmalin, které mají velmi dobrý mozek penetrace, vázat se s vysokou afinitou k MAO stránky, a vykazují antidepresivní účinky . Proto si p. harmala mohl dovolit antidepresivní účinky inhibicí MAO. V tomto ohledu by mohlo být zajímavé zkoumat antidepresivní účinky h. perforatum a P. harmala samotné a v kombinaci, protože mají různé mechanismy působení.

inhibice MAO-H. perforatum a P. harmala výtažky, může přispět k další biologické účinky těchto rostlin, jako jsou antioxidační akce a nepříznivé farmakologické účinky. Výtažky těchto rostlin vykazují neuroprotektivní a protizánětlivé účinky, které souvisejí s antioxidační aktivitou . V tomto ohledu pomocí nového postupu, výsledky v této práci dokládá, že H. perforatum a P. extrakty harmala vykazují antioxidační aktivitu spojenou s inhibicí MAO (nižší produkce H2O2). Na druhou stranu, jedním z hlavních omezení používání těchto rostlin je jejich potenciál pro produkci nepříznivých interakcí s jinými bylinami, potraviny, a drogy . Inhibice MAO-A může za určitých okolností vyvolat nepříznivé účinky .

4. Závěry

extrakty z H. perforatum inhibovaly lidský MAO-A a extrakty z květů byly nejúčinnějšími inhibitory. Byly studovány HPLC-DAD-MS a obsahovaly pseudohypericin, hypericin, hyperforin, adhyperforin, hyperfirin a flavonoidy. Nejvyšší obsah těchto sloučenin se objevil v květech. Hypericin byl slabým inhibitorem MAO – A; hyperforin neinhiboval enzym a kvercetin byl středně silným inhibitorem. Frakce kvercetinových glykosidů a flavonoidů přispěla k inhibici MAO. Extrakty semen P. harmala vysoce inhibovaly MAO-A a jeho účinnost inhibice byla více než tisíckrát vyšší než extrakty h. perforatum díky obsahu alkaloidů harmalin a harmin. L. meyenii kořen (maca) extrakty ani inhibují MAO-A. inhibice MAO-A nemusí vysvětlovat celý účinky na CNS připsat H. perforatum, ale to se očekává, že přispívají na tyto akce v P. harmala. Tyto rostliny mají antioxidační účinky. Použitím nové metody tato práce prokázala, že extrakty P. harmala A H. perforatum vykazují antioxidační aktivitu spojenou s inhibicí MAO.

střet zájmů

autoři deklarují Žádný konkurenční finanční zájem.

Poděkování

autoři jsou vděční MINECO-FEDER (SAF2015-66690-R a SAF2015-68580-C2-R) a CSIC (Španělsko) (Projekt 200470E658) pro podporu této práce. Autoři jsou vděční také Martě Aguilar Preissové za technickou pomoc a Dr. V. Aránovi za pomoc s identifikací a výběrem rostlin.