monoamin-oxidáz-a gátlás és a kapcsolódó antioxidáns aktivitás növényi kivonatokban, potenciális antidepresszáns hatásokkal

absztrakt

a monoamin-oxidáz (Mao) katalizálja az aminok és neurotranszmitterek oxidatív deaminációját, és részt vesz a hangulati rendellenességekben, a depresszióban, az oxidatív stresszben és a nemkívánatos farmakológiai reakciókban. Ez a munka az emberi Mao-A gátlását vizsgálja a Hypericum perforatum, a Peganum harmala és a Lepidium meyenii által, amelyek javítják és befolyásolják a hangulatot és a mentális feltételeket. Ezt követően a MAO gátlásával kapcsolatos antioxidáns aktivitást először növényi kivonatokban határozzuk meg. A H. perforatum gátolta az emberi MAO-A-t, és a virágkivonatok adták a legnagyobb gátlást (IC50 63,6 .. g/mL). A növényi kivonatokat HPLC-DAD-MS elemezte, és pszeudohypericint, hipericint, hiperforint, adhyperforint, hiperpirint és flavonoidokat tartalmazott. A hiperforin nem gátolta a humán MAO-A-t, és a hipericin gyenge inhibitora volt ennek az izoenzimnek. A kvercetin és a flavonoidok jelentősen hozzájárultak a MAO-A gátlásához. P. a harmala magkivonatok erősen gátolják a MAO-A-t (IC50 49,9 Ft/L), ezerszer erősebbek, mint a H. perforatum kivonatok, mivel a karbolin-alkaloidok (harmalin és harmin) tartalma miatt. A L. meyenii gyökér (maca) kivonatok nem gátolták a MAO-A-t.ezek a növények antioxidáns hatásokkal kapcsolatos védőhatásokat fejthetnek ki. E munka eredményei azt mutatják, hogy a P. harmala és a H. perforatum kivonatok antioxidáns aktivitást mutatnak a MAO gátlásával (azaz a H2O2 alacsonyabb termelésével).

1. Bevezetés

a monoamin-oxidáz (Mao) enzim metabolizálja a xenobiotikus és endogén aminokat és neurotranszmittereket, beleértve a szerotonint, a dopamint, a noradrenalint, a tiramint, a triptamint és az MPTP neurotoxint . Két izoenzimként fordul elő, MAO-A és MAO-B, amelyek fontos szerepet játszanak a központi idegrendszerben (CNS) és a perifériás szervekben. A MAO-B részt vesz a neurodegeneratív betegségekben, a MAO-A pedig a pszichiátriai állapotokban és a depresszióban. A MAO-B inhibitorai neuroprotektánsként hasznosak, míg a MAO-A inhibitorok hatékony antidepresszánsok, bár használatuk mellékhatásokat válthat ki (például hipertóniás krízis tiramint tartalmazó ételekkel) . Másrészt a biogén aminok és neurotranszmitterek Mao enzimek általi oxidációja hidrogén-peroxidot (H2O2), oxigéngyököket és aldehideket hoz létre, amelyek a sejtek oxidatív károsodásának kockázati tényezői. Ezért a MAO gátlása védelmet eredményezhet az oxidatív stressz és a neurotoxinok ellen . A legújabb vizsgálatok rámutattak, hogy a növényi és élelmiszer-kivonatok gátolhatják a MAO enzimeket, ami a fent említett biológiai hatásokat eredményezi . Másrészt a MAO gátlás eredményeként ezek a termékek nemkívánatos kölcsönhatásokban vehetnek részt más növényi készítményekkel, ételekkel vagy gyógyszerekkel .

Hypericum perforatum L. (hypericaceae család) (St. John ‘ s wort) széles körben használják egészségügyi célokra, és termékeik kereskedelmi forgalomban kaphatók gyógynövények, táplálékkiegészítők, teák, tinktúrák, gyümölcslevek, olajos macerátok, fitofarmakonok, valamint élelmiszer-adalékanyagok és kiegészítők . H. perforatum népszerű kezelésére enyhe és közepes depresszió . Káros farmakológiai kölcsönhatásokat válthat ki másokkal gyógynövények, gyógyszerek, vagy élelmiszerek . A hangulati rendellenességek és a depresszió enyhítésére és javítására való képessége az antidepresszáns tulajdonságokkal rendelkező aktív vegyületeknek tulajdonítható . A leginkább elfogadott hatásmechanizmus a monoamin újrafelvétel gátlása, de további mechanizmusok, köztük a monoamin-oxidáz gátlás és a szinergikus hatások is szerepet játszhatnak . A Peganum harmala (zygophyllaceae család) és a Lepidium meyenii (Brassicaceae család) (maca) központi idegrendszeri hatású és potenciális antidepresszáns hatású növények . A P. harmala, amely a mediterrán térségből és Ázsiából származik, és Észak-Amerika területeire is kiterjedt, többcélú egészségügyi gyógymódként használják, beleértve a központi idegrendszeri rendellenességeket is. Ennek a növénynek a készítményei káros farmakológiai kölcsönhatásokat válthatnak ki . A L. meyenii a közép-Andokból származó ehető növény, amelynek gyökereit élelmiszer-energizálóként és táplálékkiegészítőként használják a fizikai és mentális állapotok és a termékenység javítására . A munka célja az volt, hogy tanulmányozza a humán Mao-A gátlását a H. perforatum, P. harmala és L. meyenii (maca) kivonataival, valamint a HPLC-DAD-MS által azonosított és elemzett aktív komponensekkel, majd értékelje a MAO gátlásával specifikusan összefüggő antioxidáns aktivitást. Ezt a specifikus antioxidáns aktivitást először növényi kivonatokban határozzák meg.

2. Anyagok és módszerek

a Ciudad Realban (Spanyolország) gyűjtött Hypericum perforatum L. növényeket szárítottuk és részekre bontottuk: Virágok; a növény felső légi részei, beleértve az elágazó szárakat és leveleket, de nem virágokat; és a fő szárakat (középső és alsó) és a gyökereket. Őrölték őket, és a port a minta előkészítéséhez használták. A H. perforatum kereskedelmi gyógynövényeit és gyógynövény-kiegészítőit (kapszulákat és tablettákat) a helyi gyógynövényboltokban is megvásárolták. A Peganum harmala L. növényeket és magokat Toledóban (Spanyolország) gyűjtötték. A Lepidium meyenii (maca) mind por, mind kereskedelmi tabletta formájában Peruból és helyi üzletekből származik. Hypericin standard (>95% purity by HPLC) from HWI Analytik GMBH pharma solutions, hyperforin dicyclohexylammonium salt, quercetin, harmaline, harmine, catalase, clorgyline, 3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine (TMB), and horseradish peroxidase (HRP) type II were purchased from Sigma-Aldrich.

2.1. Sample Preparation of Plant Extracts

Samples containing H. perforatum (i.e., plant parts, herbal preparation, capsules, or tablets) (500 mg) were homogenized in 10 mL of water/methanol (1 : 1) egy Ultra Turrax homogenizátor alkalmazásával, 10000 fordulat / perc sebességgel centrifugálva 10 percig, majd a felülúszót összegyűjtöttük. Az eljárást kétszer megismételtük a maradék és a három felülúszó frakció összegyűjtésével, összekeverésével és elemzésével a HPLC-vel az alábbiak szerint. Három egymást követő extrakció után a hipericin és a pszeudohypericin visszanyerése meghaladta a 97% – ot. Az L. meyenii (maca) (500 mg) és a P. harmala mag (500 mg) mintáit 10 mL vízben/metanolban (1 : 1) vagy 10 mL 0,6 M perklórsavban : metanolban (1 : 1) egy Ultra Turrax homogenizátor alkalmazásával, 10000 fordulat / perc sebességgel centrifugálva 10 percig, majd a felülúszót összegyűjtöttük. Ezt az eljárást kétszer megismételtük a maradékkal, majd az összegyűjtött felülúszókat összekeverjük és elemezzük a HPLC-vel az alábbiak szerint.

2.2. Növényi kivonatok RP-HPLC elemzése

a H. perforatum kivonatok elemzését RP-HPLC-vel végeztük UV dióda tömbökkel és fluoreszcencia detektálással HPLC 1050 (Agilent) segítségével, 1100 dióda tömb detektorral (DAD) (Agilent) és 1046A fluoreszcencia detektorral párosítva. Egy 150 3,9 mm-es azonosító., 4 6 m, Nova-pak C18 oszlopot (vizet) használtunk az elválasztáshoz. A kromatográfiás körülmények között 50 mM-es ammónium-foszfát puffer (pH 3) (a puffer) és 20% a volt acetonitrilben (B puffer). A gradienst 0% – ról (100% A) 32% B-re programoztuk 8 perc alatt, 100% B-t pedig 10 perc alatt. Az átfolyási sebesség 1 mL / perc volt, az oszlop hőmérséklete 40 Ft, a befecskendezési térfogat pedig 20 ft. A hipericinek kimutatását 590 nm-es abszorbanciával, gerjesztés esetén 236 nm-es fluoreszcenciával, emisszió esetén pedig 592 nm-es fluoreszcenciával végeztük. A hipericin koncentrációját a válasz kalibrációs görbéje alapján határoztuk meg (abszorbancia 590 nm-en), szemben a laboratóriumban a hipericin standard alapján készített oldatokkal. Ugyanezt a válaszfaktort alkalmazták a pszeudohypericinre, a protohypericinre és a protopszeudohypericinre. A flavonoidokat és a flavonoid glikozidokat 265 nm-en és 355 nm-en elemezték, és a kvercetin koncentrációját 355 nm-en határozták meg a válasz és a koncentráció közötti kalibrációs görbe alapján. A flavonoidoknak és flavonoid glikozidoknak megfelelő HPLC-frakciót (7-11 perc) a H. perforatum kivonat (gyógynövények) egymást követő injekcióival gyűjtöttük össze, majd vákuumban történő bepárlás után 30% metanolban oldottuk, és MAO-a gátlásra használtuk. A flóroglucinolokat (hiperforin, adhyperforin, hiperfirin és adhyperfirin) 280 nm-en elemeztük ugyanazon oszlop (Nova-pak C18) és feltételek alkalmazásával, de izokratikus elúcióval, 20% 50 mM-es ammónium-foszfát pufferrel, pH 3-mal és 80% acetonitril alkalmazásával. Ezeknek a vegyületeknek a koncentrációját a hiperforin standard kalibrációs görbéje alapján határoztuk meg. A P. harmalában és L. meyenii-ben a P. harmala-ban és a L. meyenii-ben a korábban leírtak szerint végeztük el a karbolin-alkaloidok analízisét .

2.3. Azonosítás HPLC-ESI-tömegspektrometriával

a H. perforatum kivonatokban lévő vegyületek azonosítását HPLC-MS-vel (elektrospray-negatív ion mód) végeztük egy 1200-as sorozatú HPLC-DAD alkalmazásával, amely egy 6110 kvadrupol-MS-hez (Agilent) kapcsolódik. A kromatográfiás elválasztást egy 150 mm-es, 2,1 mm-es, i.d. Zorbax SB-C18 (5 6 m) oszlopon végeztük (Agilent Technologies). A kromatográfiás körülmények a következők voltak: a eluens: hangyasav (0,1%); B: hangyasav (0,1%) acetonitrilben; gradiens: 0%-70% B 8 perc alatt és 100% B 10 perc alatt, áramlási sebesség : 0,3 mL/perc;: 40 Kb C; tömegtartomány: 50-700 u, kúpfeszültség: 150 V. A klóroglucinolok (pl. hiperforin) azonosításához az elválasztást Nova-pak alkalmazásával végeztük C18-as oszlop (4 km) azonos eluenssel és izokratikus elúcióval (a eluens, 20% és B eluens, 80%) 0,7 ml/perc áramlási sebességgel és negatív és pozitív ionizációs tömegspektrumokkal. A vegyületek azonosítását tömegspektrumok, kromatográfiás csúcsok UV-vis spektruma (dad) és standard koelúció alapján végeztük. a P. harmala és L. meyenii karbolinjait a korábban leírtak szerint azonosították .

2.4. A monoamin-oxidáz (MAO-a) gátlási vizsgálatokat

Mao-vizsgálatokat máshol is elvégezték . Röviden, a MAO-A-t (BD-Gentest) tartalmazó membránfehérje-frakciókat a kívánt koncentrációkra hígítottuk 100 mM-es kálium-foszfát pufferben (pH 7,4). 0,2 mL reakcióelegy, amely 0,01 mg/mL fehérjét és 0-at tartalmaz.25 mM-es kynuramint 100 mM-es kálium-foszfátban (pH 7,4) inkubáltunk 37 Kb-on 40 percig. Inkubálás után a reakciót leállítottuk 2 N NaOH (75 ons) hozzáadásával, majd 70% HClO4 (25 ml) hozzáadásával, majd a mintát centrifugáltuk (10000) 10 percig. A felülúszót (20 6L) a HPLC-be és a kynuramin (azaz 4-hidroxi-kinolin) dezaminációs termékébe injektáltuk, amelyet az RP-HPLC-dióda tömb detektálásával 320 nm-en meghatározott enzimatikus reakció során alakítottunk ki. A 4-hidroxi-kinolin koncentrációjának kiszámításához a terület és a koncentráció közötti válaszgörbét készítettük. A MAO-gátlás vizsgálatainak elvégzéséhez a növényi kivonatok alikvotjait, kereskedelmi forgalomban kapható készítményeket vagy tiszta vegyületeket megfelelő módon hígítottuk, és kynuramint (0,25 mM) és MAO-A-t (0,01 mg/mL fehérje) tartalmazó reakcióelegyekhez adtuk 100 mM-es kálium-foszfát pufferben (pH 7,4), a fentiek szerint végzett enzimatikus reakcióval és elemzéssel, és összehasonlítottuk az oldószert tartalmazó megfelelő kontrollokkal. A gátlás pozitív kontrolljaként a standard inhibitort, a klorgylint alkalmazták (>90% – os gátlás 2,5 mm-nél). Az inkubációkat különböző kísérletekből legalább két példányban végeztük, és az IC50 értékeket a GraphPad Prism 4.0 segítségével számítottuk ki.

2.5. A monoamin-oxidáz (Mao) gátlással összefüggő antioxidáns aktivitás meghatározása

a reakcióelegyeket (0,2 mL) 70 mM-es kálium-foszfát pufferben (pH 7,4), amely 0,025 mg/mL Mao-A fehérjét és 0,25 mM-es kinuramint tartalmazott, 37 Kb C hőmérsékleten inkubáltuk 40 percig (kontrollvizsgálatok) vagy növényi kivonatok jelenlétében. A MAO-vizsgálatokat klorgyline (25 MHz), a MAO-A Klasszikus inhibitora (a gátlás pozitív kontrollja) vagy kataláz enzim (100 Ft/mL) jelenlétében is elvégeztük. Az inkubációs periódus után a reakcióelegyet aktív szénnel (3,5 mg) adtuk hozzá, összekevertük, majd leszűrtük (0,45 MHz). Az oldatot 20 db 60 mm-es tetrametil-benzidin (TMB) 40% – os DMSO-ban és 20 db 6 mg/mL II-es típusú torma-peroxidáz (HRP) (1 mg / mL) hozzáadásával adtuk hozzá, 5 percig tartottuk, majd 0,3 mL 0,5 M H2SO4 oldattal adtuk hozzá. A 450 nm-es abszorbanciát a TMB diimin, a TMB HRP általi oxidációjából származó sárga termék, valamint a MAO által katalizált oxidatív deamináció során keletkező H2O2 meghatározásához mértük. A TMB oxidációját MAO inhibitorok jelenlétében hasonlították össze a megfelelő, inhibitorok nélküli kontrollokkal, és a megfelelő vakpróbák interferenciák hiányát mutatták.

3. Eredmények és megbeszélés

a H. perforatum kereskedelmi készítményei hasonló hatékonysággal gátolták a humán MAO-A-t: az IC50 értéke 142,3 kb 30.6 6G/mL (gyógynövénykészítmény), 193 61 61G/mL (kapszula) és 173 29g/mL (tabletta) (1.a) ábra). Ami a növényeket illeti, a virágokból származó H. perforatum kivonatok biztosították a legnagyobb gátlást (IC50 63,6 kb 9,4 Ft/mL), ezt követték a légi szárak és levelek (IC50 143,6 Ft/16,5 Ft / mL), és a legalacsonyabb a gyökérkivonatok (1.b) ábra). A H. perforatum légi részeiből származó kivonatokat HPLC-DAD-ESI-vel (elektrospray-negatív ionizáció) elemeztük. Két fő naftodiantron jelenlétét mutatták ki, amelyeket pszeudohypericinként és hipericinként azonosítottak(2 (A) Ábra és 1.táblázat). A virágkivonatok két további vegyületet tartalmaztak, amelyeket protopszeudohypericinként és protohypericinként azonosítottak. Fenolok és flavonoidok bővelkedtek H. perforatum kivonatokban(2.b) ábra). A klorogénsavat és a kvercetin glikozidokat, a rutint, a hiperozidot, az izoquercitrint, a miquelianint, az acetil-hiperozidot és a kvercitrint, valamint a szabad kvercetint és a biapigenint a HPLC-DAD (ESI negatív ionizáció) és a DAD (1.táblázat) azonosította. Másrészt a virágkivonatok négy floroglucinolt tartalmaztak(2.ábra (c)), amelyeket a HPLC-DAD-MS (ESI negatív és pozitív ionizáció) és a DAD azonosított hiperforin, adhyperforin, hyperfirin és adhyperfirin (1. táblázat). Ezeknek a vegyületeknek a jelenléte (3 .ábra) a növényben egyetért más eredményekkel. A fő komponensek tartalmát HPLC-vel határoztuk meg (2.táblázat). A pszeudohypericin koncentrációja magasabb volt, mint a hipericiné, míg a protopszeudohypericin és a protohypericin minor vegyületek voltak (0,4 6G/mg protopszeudohypericin és 0.17 6G/mg protohypericint mutattak ki virágokban). A növényben a legmagasabb hipericintartalmat a virágokban találták, a szárakban szignifikánsan alacsony szintet, a gyökerekben pedig hiányt észleltek. A hiperforin nagyon bőséges volt a virágokban (27,2 Ft/mg), míg a kereskedelmi készítményekben a koncentráció 0,36 és 2,4 Ft/mg között mozgott. A virágok, adhyperforin (1.4 ± 0.07 µg/mg), hyperfirin (4.2 ± 0.02 µg/mg), valamint adhyperfirin (0.46 ± 0.02 µg/mg) is megjelent. Flavonoidok bővelkedett H. a perforatum és ezek többsége kvercetin glikozidok (2. B) ábra), amelyek jelenléte szignifikánsan magasabb volt a virágokban, mint a növény más részein. A virágokban a szabad kvercetin-tartalom 2,0 Ft/mg volt, míg a kereskedelmi készítményekben 6,7 Ft/mg-ot határoztak meg.

(a)

(b)

a)
b)

1. ábra

humán monoamin-oxidáz-A (MAO-a) gátlása a kereskedelmi forgalomban kapható H. perforatum (a) készítmények kivonataival (kapszulák, stb.; tabletták, stb.); fűszernövények, 6. szám), valamint a növény különböző részeiből származó kivonatok (b) (Virágok, 6.szám; felső szára, 5. szám; fő szára (Közép), 5. szám; gyökér, 5. szám). A kiválasztott koncentrációjú kivonatok közötti jelentős különbségeket () különböző betűkkel jelöljük.

(a) nm

(b) nm

(c) nm

(a) nm
(b) nm
(c) nm

Figure 2

HPLC chromatograms of extracts from H. perforatum flowers. (a) Detection of hypericins at 590 nm. 1: protopseudohypericin; 2: pseudohypericin; 3: protohypericin; and 4: hypericin. (b) Detection of phenols and flavonoids at 265 nm. 1: chlorogenic acid; 2: rutin; 3: hyperoside; 4: izoquercitrin; 5: miquelianin; 6: acetil-hiperozid; 7: kvercitrin; 8: kvercetin; és 9: biapigenin. C) a floroglucinolok kimutatása 280 nm-en. 1: hiperfirin, 2: adhyperfirin; 3: hiperforin; és 4: adhyperforin.

3. ábra

a H. perforatumban azonosított vegyületek szerkezete: hipericinek, kvercetin és kvercetin flavonoidok és flóroglucinolok (hiperforin, adhyperforin, hiperfirin és adhyperfirin).

a MAO-A gátlása H. perforatum kivonatok előfordulását jelzi inhibitorok. A hipericinek, a hiperforin és a flavonoidok hozzájárulhatnak ehhez a gátláshoz, és inhibitorként értékelték őket (4.ábra). A hipericin gátolta a MAO-A-t (IC50 értéke 35,5 kb 2,1 ft vagy 17,9 Ft/mL) (4.ábra(a)). A 2. táblázatban szereplő koncentrációból a hipericin gyengén járul hozzá a MAO gátláshoz a H. perforatum kivonatokban. Valójában a hipericin számított tartalma IC50 értéknél a virágkivonat vizsgálataiban (azaz 63,6 Ft/mL) 0,1 Ft/mL volt, ami alacsony a hipericin IC50-hez képest (17,9 Ft/mL). A hiperforin nem gátolta a MAO-A-T (4.B) ábra). A kvercetin gátolta a humán MAO-A-T (4(b) ábra), IC50 értéke 11,1 0,8 (azaz 3,36 6G/mL) volt. Ezután a kvercetin jobb inhibitor volt, mint a hipericin, bár hatékonysága még mindig alacsony volt a kivonatok teljes gátlásának magyarázatához. Így a kvercetin számított tartalma az IC50-nél a virágkivonat vizsgálataiban 0,13 KB / mL volt, ami alacsonyabb, mint a kvercetin IC50-je (3,4 KB/mL). Amikor a kvercetin glikozidoknak és flavonoidoknak megfelelő frakciót(7-11 perc, 2.ábra (b)) RP-HPLC-vel gyűjtöttük össze, gátolta a MAO-A-T (90% – os gátlás 700 MHz/mL extraktumnál), ami azt jelzi, hogy ezek a vegyületek hozzájárulnak a H. perforatum MAO gátlásához, valószínűleg additív hatásokkal. Ezután a MAO-A gátlása olyan összetevőkből származhat, mint a kvercetin és a kapcsolódó flavonoidok (azaz a kvercetin glikozidok), amelyek bőségesek a növényben. Ezenkívül az itt nem azonosított kisebb vegyületek szintén hozzájárulhatnak a MAO gátláshoz, mivel a 2. táblázatban szereplő főbb vegyületek nem magyarázzák a teljes gátlást.

(a)

(b)

a)
b)

4. ábra

a humán monoamino-oxidáz-A (MAO-A) gátlása a H. perforatum aktív komponensei által: hipericin (a) és kvercetin (ca) és hiperforin (ca) (B).

a P. harmala magokból származó kivonatok erősen gátolják az emberi MAO-A-T(5. ábra (a)), így az IC50 értéke 49,9 5,6 6G/L. A kromatográfiás analízis azt mutatta, hogy a gátlás a HPLC-DAD-MS-sel azonosított HPLC-karbolin alkaloidok, harmalin és harmin jelenlétének volt köszönhető (5(c) ábra). Ezeknek a magokban meghatározott alkaloidoknak a tartalma 48,5 mg/g volt a harmalin és 40,0 mg/g a harmin esetében (ez 2,4 ng/mL és 2,0 ng/mL, ill., az IC50 vizsgálataiba). Ezért a P. harmala magok Mao-A gátló hatása 1274-szer erősebb volt, mint a H. perforatum virágoké. Amint azt az 5. b) ábra mutatja, a Lepidium meyenii gyökérkivonatok nem gátolták a humán MAO-A. L. a meyenii (maca) egy népszerű növény az Andok-Felvidékről, amelynek gyökereit egyre inkább használják táplálkozási és gyógyászati tulajdonságaik energetizálására, valamint a hangulat és a szexuális teljesítmény javítására . Korábbi jelentések azt mutatták, hogy alkaloidokat tartalmaznak, beleértve a MAO-t gátoló .. – karbolinokat. Analízise kivonatok a CA-karbolin alkaloidok kapott 25 CA-G/G (maca por) és 11,7 CA-g/g (kapszula) 1-metil-1,2,3,4-tetrahidro-CA-karbolin-3-karboxilsav, mint a fő vegyület. Ez a specifikus karbolin nem gátolja a MAO-A-t .

(a)

(b)

(c)

(a)
(b)
(c)

5.ábra

a humán monoamino-oxidáz-A (MAO-a) gátlása a P. harmala mag (a) és az L. meyenii gyökér (maca) kivonatok (B) (kapszulák, stb. és por, stb.) által. c) A P. harmala magkivonat HPLC kromatogramja, amely hatékonyan gátolta a humán Mao-A. abszorbancia kimutatását 254 nm-en. Az azonosított vegyületek: harmalin (m/z 215 (M + H)+, 375 nm) és harmin (m/z 213 (M + H)+, 245 és 322 nm).

a MAO hidrogén-peroxidot (H2O2) termel, amely részt vesz az oxidatív sejtkárosodásban és a kóros állapotokban . Ezután a MAO gátlása specifikus antioxidáns hatásokat eredményezhet . A MAO-gátlással kapcsolatos antioxidáns aktivitás vizsgálata érdekében ebben a kutatásban olyan kísérleteket terveztek, amelyek a MAO-A aktivitását a tetrametil-benzidin (TMB) torma-peroxidázzal (HRP) és a MAO által katalizált oxidatív deamináció során keletkező H2O2-vel kapcsolták össze (6.ábra). H. perforatum és P. harmala kivonatok, amelyek gátolták a MAO-A-t, amint azt a fentiekben bemutattuk, nagymértékben csökkent a TMB oxidációja. Ezzel szemben a MAO-t nem gátló L. meyenii gyökér (maca) kivonatok alacsony antioxidáns aktivitást mutattak ebben a vizsgálatban. A klorgyline, amely a MAO-A erős inhibitora, nagymértékben csökkentette a TMB oxidációját, ha kontrollként használják. Ugyanez történt a kataláz jelenlétével a közegben, amely eltávolítja a MAO-A által generált H2O2-t.ezért ezek az eredmények azt mutatják, hogy a H. perforatum és a P. harmala kivonatok specifikus antioxidáns hatást fejtettek ki a H2O2 alacsonyabb termelésével a MAO gátlásával.

6. ábra

Mao gátlással összefüggő antioxidáns aktivitás a MAO-A kapcsolási aktivitásával, majd a tetrametilbenzidin (TMB) oxidációjával a MAO reakciójában keletkező H2O2 jelenlétében, valamint a torma-peroxidáz (HRP). A grafikon a TMB diiminné történő oxidációját mutatja (abszorbancia 450 nm-nél) kontrollvizsgálatokban (100%), valamint H. perforatum (gyógynövény-és virágkivonatok, 800 6 g/mL), P. harmala magkivonatok (0,8 g/mL), L. jelenlétében. meyenii gyökér (maca) kivonatok (800 .. g/mL), klorgyilin (a MAO-A standard inhibitora) (25 .. m) és kataláz (100 .. g/mL). különbségek () a kontrollokhoz képest.

a H. perforatum javítja a hangulati rendellenességeket és a depressziót . Amint itt látható, olyan vegyületeket tartalmaz, mint a hiperforin, a hipericinek és az antidepresszáns hatásokért felelős flavonoidok (2.ábra és 2. táblázat). Az antidepresszáns hatás specifikus mechanizmusa azonban nem teljesen ismert. A leginkább elfogadott mechanizmus a monoamin újrafelvételének gátlása . Egyes tanulmányok azonban a mechanizmusok és a szinergikus hatások kombinációját sugallják . P. harmala számos biológiai és farmakológiai hatást fejt ki. Magjaikat pszichoaktív és neuroaktív hatásuk miatt egyre inkább rekreációs célokra használják . Az emberi MAO-A gátlása az antidepresszáns hatás megalapozott mechanizmusa . A MAO-A irreverzibilis és reverzibilis inhibitorait (pl. fenelzin és moklobemid) sikeresen alkalmazzák antidepresszánsként. Ebben a tanulmányban a H. perforatum kivonatok gátolták az emberi MAO-A-t. Több mint ezerszer alacsonyabb volt, mint a P. harmala magkivonatoké. Sacher és munkatársai. számoltak be arról, hogy a MAO-a helyek elfoglaltsága az emberi agyban PET képalkotással meghatározva 11C-harmin kötéssel (azaz ugyanaz a MAO gátlásért felelős a P. harmala-ban) magas volt a MAO reverzibilis inhibitora, például a moklobemid esetében, de alacsony a H. perforatum kivonat (orbáncfű) esetében . Ez azt jelenti, hogy a MAO-A inhibitorai a H. perforatumban nem kötődnek hatékonyan a MAO-A Aktív helyeihez az agyban, szemben az a .. -karbolin harmin. A MAO-A inhibitorai h-ban. a perforatum olyan flavonoidok, mint a kvercetin és glikozidjaik, és ezeknek a vegyületeknek az agyba jutó szintje nem elegendő ahhoz, hogy elfoglalják a MAO-A helyét az agyban, és gátolják az enzimet . Ezzel szemben a P. harmala inhibitorai a .. -karbolin alkaloidok, beleértve a harmint és a harmalint, amelyek nagyon jó agyi behatolással rendelkeznek, nagy affinitással kötődnek a MAO helyekhez, és antidepresszáns hatást mutatnak . Ezért P. harmala Mao-gátlással antidepresszáns hatásokat engedhetett meg magának. Ebben a tekintetben érdekes lehet a H antidepresszáns hatásainak vizsgálata. perforatum és P. harmala önmagában és kombinációban, mivel különböző hatásmechanizmusuk van.

a MAO-A gátlása a H. perforatum és a P. harmala kivonatok által hozzájárulhat e növények egyéb biológiai hatásaihoz, például antioxidáns hatásokhoz és káros farmakológiai reakciókhoz. Ezeknek a növényeknek a kivonatai neuroprotektív és gyulladáscsökkentő hatást fejtenek ki, amelyek az antioxidáns aktivitással kapcsolatosak . Ebben a tekintetben egy új eljárás alkalmazásával a munka eredményei azt bizonyítják, hogy H. perforatum és P. a harmala kivonatok antioxidáns aktivitást mutatnak a MAO gátlásával (alacsonyabb H2O2 termelés). Másrészt az egyik legnagyobb korlátja ezeknek a növényeknek az, hogy képesek káros kölcsönhatásokat előidézni más gyógynövényekkel, élelmiszerekkel és gyógyszerekkel . A MAO-A gátlása bizonyos körülmények között káros hatásokat válthat ki .

4. Következtetések

a H. perforatum kivonatai gátolták az emberi MAO-A-t, és a virágok kivonatai voltak a leghatásosabb inhibitorok. Ezeket a HPLC-DAD-MS tanulmányozta, és pszeudohypericint, hipericint, hiperforint, adhyperforint, hiperfirint és flavonoidokat tartalmazott. Ezeknek a vegyületeknek a legmagasabb tartalma virágokban jelent meg. A hipericin a MAO-A gyenge inhibitora volt; a hiperforin nem gátolta az enzimet, a kvercetin pedig mérsékelt inhibitor volt. A kvercetin glikozidok és flavonoidok frakciója hozzájárult a MAO gátlásához. A P. harmala magkivonatok erősen gátolták a MAO-A-t, és a gátlás hatékonysága több mint ezerszer nagyobb volt, mint a H. perforatum kivonatoké, mivel harmalin és harmin alkaloidokat tartalmaz. L. a MAO-A gátlása nem magyarázza meg a H. perforatumnak tulajdonított teljes központi idegrendszeri hatásokat, de várhatóan hozzájárul ezekhez a hatásokhoz a P. harmala-ban. Ezek a növények antioxidáns hatást fejtenek ki. Egy új módszer alkalmazásával ez a munka bizonyította, hogy a P. harmala és a H. perforatum kivonatok antioxidáns aktivitást mutatnak a MAO gátlásával kapcsolatban.

összeférhetetlenség

a szerzők kijelentik, hogy nincs versengő pénzügyi érdek.

Köszönetnyilvánítás

a szerzők hálásak a MINECO-FEDER (SAF2015-66690-R és SAF2015-68580-C2-R) és a CSIC (Spanyolország) (Project 200470e658) munkájának támogatásáért. A szerzők köszönetet mondanak Marta Aguilar Preiss-nek a technikai segítségért, valamint Dr. V. Ar-nak a növények azonosításában és kiválasztásában nyújtott segítségért.