WST-1 Cell Proliferation Assay System mahdollistaa solujen proliferaation ja elinkyvyn nopean ja helpon kolorimetrisen mittauksen 96-kuoppaisessa muodossa ilman radioaktiivisia isotooppeja tai orgaanisia liuottimia. Kantaliuos WST-1-solujen proliferaation Määritysjärjestelmää voidaan soveltaa myös sytotoksisuus-ja inhibitorisiin määrityksiin, joissa väriaineen tuotanto pikemminkin vähenee kuin lisääntyy.
kolorimetrinen määritys perustuu tetratsoliumsuolan WST-1 pilkkoutumiseen formatsaaniluokan väriaineeksi mitokondriosukkinaattitetratsoliumreduktaasin vaikutuksesta elinkelpoisissa soluissa. Solujen lisääntyessä yhä useampi WST-1 muuttuu formatsaanituotteeksi. Formatsaaniväriaineen määrä on suoraan verrannollinen metabolisesti aktiivisten solujen määrään, ja se voidaan kvantifioida mittaamalla absorbanssi aallonpituudella 420-480 nm (Amax 450 nm) moniwell-levylukijassa.
vaivaton protokolla
WST-1-kantasolujen proliferaation Määritysjärjestelmässä ei tarvita pesu -, keruu-tai liuotusvaiheita. Koko toimenpide soluviljelmästä data-analyysiin voidaan suorittaa moniwell-levylukijalla samalla 96-kuoppalevyllä.
soluviljelyn jälkeen määritys voidaan suorittaa noin 1 tunnin kuluttua. Lisätään vain esisekoitettu WST-1-solujen Proliferaatioreagenssi lautaselle, viljellään soluja vähintään 30 minuuttia kostutetussa ilmakehässä (enintään 4 tuntia solutyypistä ja tiheydestä riippuen) ja mitataan absorbanssi. Värillinen tuote syntyy jatkuvasti, joten voit seurata kokeilusi etenemistä ajan mittaan lukemalla levyä toistuvasti ja palauttamalla sen hautomoon jatkokehitystä varten. Tämä poistaa arvailut ja varmistaa, ettei optimaalista määrityksen päätepistettä unohdeta.
stabiilit reagenssit
toisin kuin perinteiset WST-1-määritysreagenssit, joita voidaan säilyttää vain kolme päivää 4°C: ssa tai yhden kuukauden -20°C: ssa, esisekoitettu WST-1-solujen Proliferaatioreagenssi on kehitetty lisäämään stabiilisuutta: sitä voidaan säilyttää kaksi viikkoa 4°C: ssa tai vuoden -20°C: ssa.se toimitetaan käyttövalmiina liuoksena, joka sisältää WST-1: tä ja elektronikytkentäreagenssia, laimennettuna steriili fosfaattipuskuroitu suolaliuos.
ei-radioaktiivinen kolorimetrinen määritys
monet solujen proliferaatiomääritykset perustuvat DNA-synteesin aikana radioaktiivisesti merkityn nukleosidin soluunoton mittauksiin. Esisekoitettu WST-1-solujen Proliferaatioreagenssimääritys on nonradioaktiivinen, mikä lisää käyttömukavuutta ja laboratorioturvallisuutta. Lisäksi esisekoitettu WST-1-solujen Proliferaatioreagenssi on erittäin vesiliukoinen verrattuna muihin vastaavissa määrityksissä käytettäviin tetratsoliumsuoloihin, joiden liukeneminen voi vaatia pinta-aktiivisia aineita tai orgaanisia liuottimia.
esisekoitettu WST-1-solujen Proliferaatioreagenssi yksinkertaistaa ja virtaviivaistaa solujen proliferaatiokokeita. Yksinkertainen, yhden ratkaisun protokolla säästää aikaa ja on helppo käyttää 96-hyvin levy muodossa. Levyt voidaan lukea ja palauttaa inkubaattoriin jatkokehitystä varten aikakokeilujen yksinkertaistamiseksi.