System testu proliferacji komórek WST-1 umożliwia szybki i łatwy kolorymetryczny pomiar proliferacji i żywotności komórek w formacie 96-studzienkowym, bez izotopów promieniotwórczych lub rozpuszczalników organicznych. System oznaczania proliferacji komórek premiksu WST-1 ma również zastosowanie do testów cytotoksyczności i hamujących, w których produkcja barwnika raczej maleje niż wzrasta.
test kolorymetryczny opiera się na rozszczepianiu soli tetrazoliowej WST-1 do barwnika klasy formazanowej przez mitochondrialny bursztynian-reduktazę tetrazoliową w żywych komórkach. W miarę proliferacji komórek więcej WST – 1 jest przekształcane w produkt formazanowy. Ilość barwnika formazanowego jest bezpośrednio związana z liczbą metabolicznie aktywnych komórek i może być określona ilościowo przez pomiar absorbancji przy 420-480 nm (Amax 450 nm) w czytniku płytkowym multiwell.
bezproblemowy protokół
nie są wymagane etapy mycia, zbioru ani rozpuszczania w systemie oznaczania proliferacji komórek premiksu WST-1. Cała procedura, od hodowli komórkowej do analizy danych, może być przeprowadzona za pomocą czytnika płyt multiwell w tej samej 96-studzienkowej płytce.
po hodowli komórek test można zakończyć w ciągu około 1 godziny. Po prostu dodaj wstępnie zmieszany odczynnik proliferacji komórek WST – 1 do płytki, hoduj komórki przez co najmniej 30 minut w nawilżonej atmosferze (do 4 godzin, w zależności od rodzaju i gęstości komórki) i zmierz absorbancję. Kolorowy produkt jest generowany w sposób ciągły, dzięki czemu można monitorować postępy eksperymentu w czasie, wielokrotnie czytając płytkę i zwracając ją do inkubatora w celu dalszego rozwoju. Eliminuje to zgadywanie i zapewnia, że optymalny punkt końcowy testu nie jest pomijany.
stabilne odczynniki
w przeciwieństwie do tradycyjnych odczynników testowych WST-1, które mogą być przechowywane tylko przez trzy dni w temperaturze 4°C lub jeden miesiąc w temperaturze -20°C, wstępnie zmieszany odczynnik proliferacji komórek WST-1 został opracowany w celu zwiększenia stabilności: może być przechowywany przez dwa tygodnie w temperaturze 4°C lub jeden rok w temperaturze -20°C. jest dostarczany jako gotowy do użycia roztwór zawierający WST-1 i odczynnik sprzęgający elektron, rozcieńczony w sterylnym fosforanie.-buforowana sól fizjologiczna.
Nieradioaktywny test kolorymetryczny
wiele testów proliferacji komórek opiera się na pomiarach wychwytu radioaktywnie znakowanego nukleozydu podczas syntezy DNA. Wstępnie zmieszany test odczynnika proliferacji komórek WST – 1 jest nieradioaktywny, co zwiększa wygodę i bezpieczeństwo laboratoryjne. Ponadto, wstępnie zmieszany odczynnik proliferacji komórek WST – 1 jest wysoce rozpuszczalny w wodzie w porównaniu z innymi solami tetrazolium stosowanymi w podobnych testach, które mogą wymagać środków powierzchniowo czynnych lub rozpuszczalników organicznych do rozpuszczania.
wstępnie zmieszany odczynnik proliferacji komórek WST – 1 uprości i usprawni testy proliferacji komórek. Prosty, jednoprocesorowy protokół oszczędza czas i jest łatwy w użyciu w formacie 96-studzienkowym. Płytki można odczytać i zwrócić do inkubatora w celu dalszego rozwoju, aby uprościć eksperymenty w czasie.