분자 표현 현미경 입문서:전문 현미경 기술-형광 디지털 이미지 갤러리-매딘-다비 송곳니 신장 상피 세포)

성인 여성 코커 스패니얼의 신장 조직에서 쉴드매딘과 노비 다비에 의해 유래된 이 세포주는 1958 년 9 월에 유래되었다. 그 이후로,세포는 널리 베타-아밀로이드 전구체 단백질의 처리뿐만 아니라 단백질 분해 제품의 정렬을 조사하기 위해 이용되고있다.

각질층 세포주의 형태는 상피 세포이며,세포는 면역 페 록시 다제 염색에 의해 각질에 양성이다. 바이러스 성 구내염(인디애나 균주),백시 니아,콕 사키 바이러스 비 5,레오 바이러스 2 및 3,아데노 바이러스 4 및 5,돼지의 수포 전염 및 전염성 개 간염을 포함한다. 세포는 콕 사키 바이러스 비 3 과 비 4 뿐만 아니라 폴리오 바이러스 2,역전사 효소에 대한 음성.

상피세포는 상피로 알려진 조직의 유형을 구성하는 상피세포의 일반적인 모델로 일반적으로 사용된다. 주로 신체의 내부 장기와 다른 표면을 덮고 발견,상피는 시트로 구성되어 단단히 포장 된 세포로 구성되어 있습니다. 이 세포는 기저부에 기저층이라고 불리는 세포 외 기질을 분비하여 상피 조직을 인접한 조직에 고정시키는 데 도움이됩니다. 상피 세포는 또한 혈관에 직접 접근 할 수 없으므로 신진 대사 폐기물을 제거해야하는 것과 같은 방식으로 확산을 통해 산소와 영양분을 얻어야합니다. 상피는 보호,흡수,감각 수용 및 분비를 포함한 다양한 메커니즘에서 기능합니다. 신장의 상피 세포는 임시 저장 및 배설 물질의 후속 분비에 중요한 역할을합니다.위의 디지털 이미지에 제시된 매딘 다비 송곳니 신장 세포의 배양은 다피와 알렉사 플루오르 568 이 팔로 이딘에 결합 된 것으로 표시되었다. 또한,세포는 파이프-미토콘드리아(강화 된 노란색 형광 단백질)키메라 플라스미드 세포 하 국소화 벡터로 형질 감염되었다. 이미지 기록되었 흑백으로 QImaging Retiga 빠르-EXi 카메라 시스템을 결합 Olympus BX-51 현미경을 갖추고 있으로 대역 통과 배출 형광 필터 광 블록에 의해 제공되는 오메가 광학적입니다. 처리 단계 동안,개별 이미지 채널은 플루오로 포어 방출 스펙트럼 프로파일의 각각에 대응하는 루비파이 값들과 유사 착색되었다.

미토트래커 레드 씨엑스로스,알렉사 플루오르 488 및 다피-매딘-다비 송곳니 신장 세포의 부착성 배양을 세포내 미토콘드리아 네트워크 및 미토트래커 레드 씨엑스로스 및 알렉사 플루오르 488 을 갖는 사상 액틴에 대해 각각 팔로 이딘에 접합된 표지를 표시하였다. 자외선 흡수 프로브 다피는 유전자에 대항하기 위해 사용되었습니다.

면역형광을 이용한 마딘-다비 신장세포에서 퍼옥시솜과 클라트린 단백질을 표적으로 함-이 절에서는,세포골격망을 표적으로 하기 위해 시아닌 염료 사이 3 에 접합된 염소 안티-클라트린(중쇄)마우스 단클론 항체로 면역형광을 표적으로 한 후,염소 안티-마우스 팹 단편을 표적으로 하였다. 또한,배양에 존재하는 퍼 옥시 좀은 토끼 항-페 옥시 좀 막 단백질 70(퍼 옥시 좀 막 단백질 70)1 차 항체에 대해 지시 된 염소 2 차 항체에 공액 된 세포 2 로 면역 형광 표지되었다. 핵은 헤 크스트 33342 와 반표되었다.

미토콘드리아의 향상된 황색 단백질 세포 하 국소화-매딘-다비 송곳니 신장 상피 세포의 배양을 파이프-미토콘드리아(향상된 황색 형광 단백질)키메라 플라스미드 세포 하 국소화 벡터로 형질화 하였다. 세포들은 또한 시톡스 오렌지와 알렉사 플루오르 350 을 팔로 이딘에 공액으로 염색하여 각각 유전자 및 세포 골격 사상 액틴 네트워크를 표적으로 하였다.

송곳니 신장 상피 세포 배양에서 히스톤 및 골지 복합체의 면역 형광 표적화-마딘-다비 송곳니 신장 세포를 파라 포름 알데히드로 고정시키고,투과시키고,토끼(항-자이언트)및 마우스(항-히스톤;팬)1 차 항체의 혼합물로 처리 한 다음,알렉사 플루오르 488 및 텍사스 레드에 각각 접합 된 2 차 항체를 처리 하였다. 이차 항체 칵테일은 또한 필라멘트 액틴 네트워크를 동시에 표적으로하도록 설계된 팔로 이딘에 접합 된 알렉사 플루오르 350 을 함유 하였다.

마딘-다비 송곳니 신장 세포에서 핵 기공 복합 단백질 및 타이트 접합부의 이중 면역 형광-상피 세포 타이트 접합부 및 핵 기공 복합 단백질을 마우스 항-엔피피피 및 토끼 항-조-3 1 차 항체의 칵테일로 동시에 이미지화하였고,이어서 알렉사 플루오르 488 및 알렉사 플루오르 568 에 각각 접합된 염소 항-마우스 및 항-토끼 2 차 항체를 하였다.미토콘드리아 네트워크는 1 차 마우스 항-옥스포스 복합체 브이 억제제 단백질 항체로 면역 형광 표지 된 매딘 다비 개 신장 세포의 부착 단층 배양 물이며,이어서 플루오 레세 인에 공액 된 염소 안티 마우스 팹 단편이 뒤 따랐다. 이 문화는 이후 필라멘트 액틴 네트워크의 세부 사항을 나타 내기 위해 팔로 이딘에 결합 된 알렉사 플루오르 568 과 핵의 유전자에 대한 다피로 염색되었습니다.

밀 배아 아글루티닌-렉틴을 갖는 다당류 세포는 단백질에 부착되거나 세포막에 상주하는 특정 탄수화물 그룹에 결합하는 식물 단백질의 특화된 부류이다. 이 그룹의 저명한 구성원 인 밀 배아 응집소는 종종 형광 라벨링 실험에서 골지 복합체를 국소화하는 데 사용됩니다. 이 섹션에서 설명 된 문화는 텍사스 레드에 결합 된 밀 배아 응집소와 팔로 이딘과 다피에 결합 된 알렉사 플루오르 488 로 표시되었습니다.개 신장세포 배양에서 형광 단백질을 갖는 미토콘드리아를 표적으로 하는 것-인간 시토크롬씨 옥시다아제의 서브 유닛 8 에서 미토콘드리아 표적화 서열로 융합된 강화된 황색 형광 단백질을 위한 코딩 서열을 포함하는 플라스미드 키메라(플라스미드 키메라)의 반합성 배양을 일시적으로 형질화하였다. 고정 및 투과 후,세포를 팔로 이딘에 공액 된 알렉사 플루오르 546 과 함께 필라멘트 액틴에 대해 반착시키고,핵 특이 적 염료 인 다피를 갖는 유전자.

매딘-다비 송곳니 신장 세포 배양에서 꽉 접합-꽉 접합 단백질 배리-3 은 다빈치암 세포의 합류 배양에서 면역 형광법에 의해 가시화되었다. 단백질을 표적으로하는 토끼 항-배리-3 항체는 시아닌 염료에 공액 된 염소-항 토끼 2 차 팹 단편으로 태그되었다. 핵은 유전자 특이 적 플루오로 포어 다피와 반점되었다.

MDCK 부착한 세포 배양과 텍사스 레,Alexa Fluor488,Alexa Fluor350-에서 더블 면역 labeling 실험,문화의 MDCK 세포 치료의 칵테일을 마우스 anti-히스톤(pan)토끼고 반대로 PMP70(솜과 퍼옥시솜 막 단백질)기본체입니다. 표적 단백질은 이후 텍사스 레드 및 알렉사 플루오르 488 에 각각 접합 된 염소 항 마우스 및 항 토끼 2 차 항체로 시각화되었다. 필라멘트 액틴 세포 골격 네트워크는 팔로 이딘에 접합 된 알렉사 플루오르 350 과 반대되었다.개 신장 상피 세포의 고전적인 염색 패턴-현재 전통적이고 대중적인 미토트래커 레드 씨엑스로스,알렉사 플루오르 488 이 팔로 이딘에 결합되었으며,회스트 33342 는 다형성 암세포의 부착 배양을 삼중 라벨링하는데 사용되었다. 특이한 사상 액틴 네트워크 및 이들 세포의 핵을 둘러싼 많은 미토콘드리아를 주목하십시오.

미토콘드리아의 세포 하 국소화-고정 및 투과 후,이 섹션에 제시된 미토콘드리아 세포의 배양은 프로피듐 요오드화물 및 알렉사 플루오르 350 을 팔로 이딘에 공액으로 표시 하였다. 또한,세포 먼저 파이프-미토콘드리아 플라스미드 세포 지역화 벡터,따라서 세포내 미토콘드리아 네트워크에 노란색 형광 단백질 태그를 지역화 형질 했다.

마딘-다비 송곳니 신장 상피 세포-미세 소관에서 광범위한 튜 불린 네트워크를 마우스-안티-알파-튜 불린 1 차 항체로 닥스 다르 세포의 고정 및 침투 배양을 처리하여 면역 형광법을 사용하여 염색 한 다음 알렉사 플루오르 568 에 접합 된 염소 항 마우스 항체를 사용 하였다. 핵은 시톡스 녹색으로 반표되었다. 이 섹션에서 이미지화되지는 않았지만,문화는 또한 팔로 이딘에 결합 된 알렉사 플루오르 350 으로 분류되었다.

세포 골격망을 표적으로 하기 위해 시아닌 염료 사이 3 에 접합된 염소 항 마우스 팹 단편이 뒤따른 1 차 항 클라트린(중쇄)마우스 단클론 항체로 면역 형광 표지되었다. 또한,배양에 존재하는 퍼 옥시 좀은 토끼 항-페 옥시 좀 막 단백질 70(퍼 옥시 좀 막 단백질 70)1 차 항체에 대해 지시 된 염소 2 차 항체에 공액 된 세포 2 로 면역 형광 표지되었다. 핵은 헤 크스트 33342 와 반표되었다.

송곳니 신장 상피 세포에서 사이토 케라틴 중간 필라멘트 네트워크-사이토 케라틴은 상피 세포에서 중간 필라멘트 네트워크의 공통적이고 풍부한 구성 요소입니다. 이 섹션의 부착 배양은 마우스 항-사이토 케라틴(팬)1 차 항체로 면역 형광으로 표지 된 후 마리나 블루에 접합 된 염소 항 마우스 2 차 항체가 뒤 따랐다. 미토콘드리아는 미토트래커 레드 씨엑스로스로 시각화되었고,핵은 시톡스 그린으로 염색되었다.

Madin-Darby 개 신장으로 세포 Alexa Fluor488,Alexa Fluor568,and Hoechst33258-동시 지역화의 긴밀한 접합과 핵 공 복잡한 단백질(NPCP)는 수행과 이중 면역 형광 실험 MDCK 셀 마우스를 사용하여 anti-NPCP 고 토끼 anti-ZO-3 는 기본체입니다. 세포 하 표적은 각각 알렉사 플루오르 488 및 알렉사 플루오르 568 에 접합 된 염소 항 마우스 및 항 토끼 2 차 항체를 사용하여 시각화되었다. 핵의 유전자는 회스트 33258 을 사용하여 반착되었다.미토콘드리아 네트워크의 면역 형광 라벨링-마딘-다비 송곳니 신장 세포를 1 차 마우스 항 옥스 포스 복합체 억제제 단백질 항체로 면역 형광 표지 한 다음 플루오 레세 인에 접합 된 염소 안티 마우스 팹 단편을 하였다. 이 문화는 이후 필라멘트 액틴 네트워크의 세부 사항을 나타 내기 위해 팔로 이딘에 결합 된 알렉사 플루오르 568 과 핵의 유전자에 대한 다피로 염색되었습니다.1 차 마우스 항-사이토케라틴 항체로 면역 형광 표지된 마딘-다비 송곳니 신장 세포의 고정되고 침투된 부착 배양을 한 후,시아닌 염료,사이토 2 에 접합된 염소 항-마우스 팹 단편을 하였다. 고정 전에,배양액을 미토트래커 레드 씨엠엑스로스로 1 시간 동안 처리하였고,항체 처리 후,핵을 회스트 33258 로 반착시켰다.

상피세포 배양에서 골지체 복합체에 대한 렉틴의 결합-렉틴이 골지체 복합체에 결합하는 것을 시각화하기 위해,밀배아 응집체를 오레곤 그린에 접합된 밀배아 응집체로 처리하였다. 그 후 알렉사 플루오르 568 이 팔로 이딘에 접합되어 필라멘트 액틴 네트워크를 국소화하고,핵산은 다피를 염색하여 핵에 유전자를 표시했다.2013 년 12 월 15 일,2013 년 12 월 15 일,2013 년 12 월 15 일,2013 년 12 월 15 일,2013 년 12 월 15 일,2013 년 12 월 15 일,2013 년 12 월 15 일,2013 년 12 월 15 일,2013 년 12 월 15 일,2013 년 12 월 15 일,2013 년 12 월 15 일,2013 년 12 월 15 일,2013 년 12 월 15 일,2013 년 12 월 15 일,2013 년 면역 형광 반응 후,세포를 헤 크스트 33342 와 반착시켜 핵의 위치를 나타냈다.

미토트래커 레드 씨엑스로스,알렉사 플루오르 488,그리고 다피-내부 세포 세부사항을 시각화하는 데 가장 유용한 플루오로포어 조합 중 하나는 미토트래커 레드 씨엑스로스를 표적으로 하는 미토트래커 레드 씨엑스로스,알렉사 플루오르 488 이 필라멘트 액틴 네트워크를 위한 팔로 이딘에 결합된,그리고 핵을 국소화하는 다피를 포함한다.

미세소관 및 액틴 세포골격망 시각화-액틴 및 튜 불린 네트워크를 동시에 시각화하기 위해 액틴 및 튜 불린 세포에서 고정 및 투과 배양을 마우스 항 알파-튜 불린 1 차 항체로 처리 한 다음 알렉사 플루오르 568 에 접합 된 염소 항 마우스 2 차 항체의 칵테일을 팔로 이딘에 접합 된 알렉사 플루오르 350 과 함께 혼합 하였다. 핵은 시톡스 녹색으로 반표되었다.

마딘-다비 송곳니 신장 세포에서 핵 기공 복합 단백질 및 타이트 접합부의 이중 면역 형광-상피 세포 타이트 접합부와 핵 기공 복합 단백질을 마우스 항-엔피피피 및 토끼 항-조-3 1 차 항체의 칵테일과 함께 동시에 이미지화하였고,이어서 알렉사 플루오르 568 및 알렉사 플루오르 488 에 각각 접합된 염소 항-마우스 및 항-토끼 2 차 항체를 하였다. 핵은 헤 크스트 33258 에 반표되었다.

단층 세포 배양에서 핵과 골지 복합체의 근접성-마딘 다비 송곳니 신장 세포에서 골지 복합체와 핵 사이의 근접성은 마우스 항-핵 공극 복합 단백질(핵 기공 복합 단백질)과 토끼 항-자이언트(골지 복합체)1 차 항체를 이용한 이중 면역 형광 실험에서 조사되었다. 항체 표적을 각각 알렉사 플루오르 568 및 알렉사 플루오르 488 에 공액된 염소 2 차 항체로 시각화한 반면,액틴 세포 골격 틀은 팔로 이딘에 공액된 알렉사 플루오르 350 으로 표지되었다.