inhibarea monoaminooxidazei-a și activitatea antioxidantă asociată în extractele de plante cu potențiale acțiuni antidepresive

rezumat

monoaminooxidaza (MAO) catalizează dezaminarea oxidativă a aminelor și neurotransmițătorilor și este implicată în tulburări de dispoziție, depresie, stres oxidativ și reacții farmacologice adverse. Această lucrare studiază inhibarea MAO-a umană de către Hypericum perforatum, Peganum harmala și Lepidium meyenii, despre care se raportează că îmbunătățesc și afectează starea de spirit și condițiile mentale. Ulterior, activitatea antioxidantă asociată cu inhibarea MAO este determinată pentru prima dată în extractele de plante. H. perforatum a inhibat MAO-A umană, iar extractele din flori au dat cea mai mare inhibiție (IC50 de 63,6 hectogg/mL). Extractele de plante au fost analizate de HPLC-DAD-MS și conțineau pseudohipericină, hipericină, hiperforină, adhiperforină, hiperfirină și flavonoide. Hiperforina nu a inhibat MAO-A uman, iar hipericina a fost un inhibitor slab al acestei izoenzime. Quercetina și flavonoidele au contribuit semnificativ la inhibarea MAO-A. P. extractele de semințe de harmala au inhibat foarte mult MAO-a (IC50 de 49,9%/l), fiind de o mie de ori mai puternice decât extractele de H. perforatum datorită conținutului său de alcaloizi de carbolină (harmalină și harmină). Extractele de rădăcină de L. meyenii (maca) nu au inhibat MAO-A. Aceste plante pot exercita acțiuni protectoare legate de efectele antioxidante. Rezultatele acestei lucrări arată că extractele de P. harmala și H. perforatum prezintă activitate antioxidantă asociată cu inhibarea MAO (adică producția mai mică de H2O2).

1. Introducere

enzima monoaminooxidază (MAO) metabolizează aminele și neurotransmițătorii xenobiotici și endogeni, inclusiv serotonina, dopamina, norepinefrina, tiramina, triptamina și neurotoxina MPTP . Apare ca două izoenzime, MAO-A și MAO-B, care joacă un rol important în sistemul nervos central (SNC) și organele periferice. MAO-B este implicat în boli neurodegenerative și MAO-A în condiții psihiatrice și depresie. Inhibitorii MAO-B sunt utili ca neuroprotectori, în timp ce inhibitorii MAO-A sunt antidepresive eficiente, deși utilizarea lor poate declanșa reacții adverse (de exemplu, criză hipertensivă cu alimente care conțin tiramină) . Pe de altă parte, oxidarea aminelor biogene și a neurotransmițătorilor de către enzimele MAO generează peroxid de hidrogen (H2O2), radicali de oxigen și aldehide, care sunt factori de risc pentru leziunile oxidative celulare. Prin urmare, inhibarea MAO poate duce la protecția împotriva stresului oxidativ și a neurotoxinelor . Investigațiile recente au arătat că extractele de plante și alimente pot inhiba enzimele MAO, rezultând efectele biologice menționate mai sus . Pe de altă parte, ca urmare a inhibării MAO, aceste produse ar putea fi implicate în interacțiuni nedorite cu alte preparate din plante, alimente sau medicamente .

Hypericum perforatum L. (familia Hypericaceae) (sunătoare) este utilizat pe scară largă în scopuri de sănătate, iar produsele lor sunt disponibile în comerț ca ierburi, nutraceutice, ceaiuri, tincturi, sucuri, macerate uleioase, fitofarmaceutice și aditivi alimentari și suplimente . H. perforatum este popular pentru tratamentul depresiei ușoare și moderate . Poate declanșa interacțiuni farmacologice adverse cu alte plante, medicamente sau alimente . Capacitatea sa de a atenua și de a îmbunătăți tulburările de dispoziție și depresia este atribuită compușilor activi care prezintă proprietăți antidepresive . Cel mai acceptat mecanism de acțiune este inhibarea recaptării monoaminei, dar pot fi implicate mecanisme suplimentare, inclusiv inhibarea monoaminooxidazei și efectele sinergice . Peganum harmala (familia Zygophyllaceae) și Lepidium meyenii (familia Brassicaceae) (maca) sunt plante cu efecte asupra SNC și potențiale acțiuni antidepresive . P. harmala, originar din regiunea mediteraneană și Asia și extins în America de Nord zone, este folosit ca un remediu multifuncțional de sănătate, inclusiv tulburări ale SNC. Preparatele acestei plante pot declanșa interacțiuni farmacologice adverse . L. meyenii este o plantă comestibilă din Anzii centrali ale cărei rădăcini sunt folosite ca energizant alimentar și nutraceutic pentru a îmbunătăți condițiile fizice și mentale și fertilitatea . Scopul acestei lucrări a fost de a studia inhibarea MAO-a umană prin extracte de H. perforatum, P. harmala și L. meyenii (maca), precum și prin componentele lor active care au fost identificate și analizate de HPLC-DAD-MS și ulterior să evalueze activitatea antioxidantă care este asociată în mod specific cu inhibarea MAO. Această activitate antioxidantă specifică este determinată pentru prima dată în extractele de plante.

2. Materiale și metode

plantele Hypericum perforatum L. colectate în Ciudad Real (Spania) au fost uscate și separate în părți: flori; porțiuni aeriene superioare ale plantei, inclusiv tulpini și frunze ramificate, dar fără flori; și tulpini principale (centrale și inferioare) și rădăcini. Au fost măcinate și pulberea utilizată pentru prepararea probelor. Ierburi comerciale și suplimente pe bază de plante (capsule și tablete) de H. perforatum au fost, de asemenea, achiziționate în magazinele locale de plante. Peganum harmala L. Planta și semințele au fost colectate în Toledo (Spania). Lepidium meyenii (Maca) atât sub formă de pulbere, cât și tablete comerciale au fost obținute din Peru și din magazinele locale. Hypericin standard (>95% purity by HPLC) from HWI Analytik GMBH pharma solutions, hyperforin dicyclohexylammonium salt, quercetin, harmaline, harmine, catalase, clorgyline, 3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine (TMB), and horseradish peroxidase (HRP) type II were purchased from Sigma-Aldrich.

2.1. Sample Preparation of Plant Extracts

Samples containing H. perforatum (i.e., plant parts, herbal preparation, capsules, or tablets) (500 mg) were homogenized in 10 mL of water/methanol (1 : 1) prin utilizarea unui omogenizator Ultra Turrax, centrifugat la 10000 rpm timp de 10 min, și supernatantul a fost colectat. Procesul a fost repetat de două ori cu reziduul și cele trei fracții supernatante colectate, amestecate și analizate de HPLC așa cum se menționează mai jos. După trei extracții consecutive, recuperările hipericinei și pseudohipericinei au fost mai mari de 97%. Probele de semințe de L. meyenii (maca) (500 mg) și P. harmala (500 mg) au fost omogenizate, respectiv, în 10 mL apă/metanol (1 : 1) sau 10 mL acid percloric 0,6 m : metanol (1 : 1) prin utilizarea unui omogenizator Ultra Turrax, centrifugat la 10000 rpm timp de 10 min, și supernatantul a fost colectat. Acest proces a fost repetat de două ori cu reziduul și supernatanții colectați au fost amestecați și analizați de HPLC așa cum se menționează mai jos.

2.2. Analiza extractelor de plante Rp-HPLC

analiza extractelor de H. perforatum a fost realizată de RP-HPLC cu matrice de diode UV și detectare a fluorescenței folosind un HPLC 1050 (Agilent) cuplat cu un detector de matrice de diode 1100 (DAD) (Agilent) și un detector de fluorescență 1046a. Un act de identitate de 150 3,9 mm. Pentru separare s-a utilizat coloana Nova-pak C18 (ape), 4 int.m., s-a utilizat coloana Nova-pak C18. Condițiile cromatografice au fost tampon fosfat de amoniu de 50 mM (pH 3) (tampon A) și 20% din A în acetonitril (tampon B). Gradientul a fost programat de la 0% (100% A) la 32% B în 8 minute și 100% B la 10 minute. Debitul a fost de 1 mL/min, Temperatura coloanei a fost de 40 int C, iar volumul injecției a fost de 20 int. Detectarea hipericinelor a fost efectuată prin absorbție la 590 nm și fluorescență la 236 nm pentru excitație și 592 nm pentru emisie. Concentrația de hipericină a fost determinată dintr-o curbă de calibrare a răspunsului (absorbanță la 590 nm) comparativ cu concentrația cu soluții realizate în laborator din standardul hipericinei. Același factor de răspuns a fost aplicat pseudohipericinei, protohipericinei și protopseudohipericinei. Flavonoidele și glicozidele flavonoide au fost analizate la 265 nm și 355 nm, iar concentrația quercetinei a fost determinată la 355 nm dintr-o curbă de calibrare a răspunsului față de concentrație. Fracția HPLC corespunzătoare flavonoidelor și glicozidelor flavonoide (7 până la 11 min) a fost colectată prin injecții succesive de extract de H. perforatum (ierburi) și, după evaporare în vid, dizolvată în 30% metanol și utilizată pentru inhibarea MAO-A. Floroglucinolii (hiperforină, adhiperforină, hiperfirină și adiperfirină) au fost analizați la 280 nm utilizând aceeași coloană (Nova-pak C18) și condiții, dar sub eluție izocratică cu 20% tampon fosfat de amoniu de 50 mM, pH 3 și 80% acetonitril. Concentrația acestor compuși a fost determinată dintr-o curbă de calibrare a standardului hiperforinei. Analiza alcaloizilor-carbolină din P. harmala și L. meyenii a fost efectuată așa cum s-a descris anterior .

2.3. Identificarea prin spectrometrie de masă HPLC-ESI

identificarea compușilor din extractele de H. perforatum s-a făcut prin HPLC-MS (modul Ion electrospray-negativ) prin utilizarea unui HPLC-DAD din seria 1200 cuplat la un quadrupol-MS 6110 (Agilent). Separarea cromatografică s-a realizat pe o coloană de 150 2,1 mm i.d. Zorbax SB-C18 (5 MMC) (Agilent Technologies). Condițiile cromatografice au fost eluentul A: acid formic (0,1%); B: acid formic (0,1%) în acetonitril; gradient: 0% până la 70% B în 8 min și 100% B la 10 min, Debit: 0,3 mL/min; : 40 ct; interval de masă: 50-700 u și tensiune conică: 150 V. pentru identificarea floroglucinolilor (de exemplu, hiperforină), separarea s-a făcut coloana C18 (4 MMC) cu aceiași eluenți și eluție izocratică (Eluentul a, 20% și eluentul B, 80%) la un debit de 0,7 ml/min și spectrele de masă înregistrate în ionizare negativă și pozitivă. Identificarea compușilor s-a făcut pe baza spectrelor de masă, a spectrelor UV-vis (DAD) ale vârfurilor cromatografice și a coeluției cu standarde. așa cum s-a descris anterior, au fost identificate în P. harmala și L. meyenii-Carboline .

2.4. Testele de inhibare a monoaminooxidazei (MAO-A)

testele MAO au fost efectuate ca în altă parte . Pe scurt, fracțiunile proteice membranare care conțin MAO-A (bd-Gentest) au fost diluate la concentrațiile dorite în tampon fosfat de potasiu de 100 mM (pH 7,4). Un amestec de reacție de 0,2 mL conținând 0,01 mg / mL proteină și 0.Kynuramina de 25 mM în fosfat de potasiu de 100 mM (pH 7,4) a fost incubată la 37 CTC timp de 40 min. După incubare, reacția a fost oprită prin adăugarea a 2 N NaOH (75 unktil), urmată de adăugarea a 70% HClO4 (25 unktil), iar proba a fost centrifugată (10000) timp de 10 min. Supernatantul (20 xqql) a fost injectat în HPLC și produsul de dezaminare al kynuraminei (adică 4-hidroxichinolină) format în timpul reacției enzimatice determinată prin detectarea matricei de diode RP-HPLC la 320 nm. O curbă de răspuns a ariei versus concentrație a fost construită pentru a calcula concentrația de 4-hidroxichinolină. Pentru a efectua teste de inhibare a MAO, au fost diluate în mod convenabil alicote de extracte din plante sau preparate comerciale sau, în schimb, compuși puri și adăugate la amestecurile de reacție care conțin kynuramină (0,25 mM) și MAO-a (0,01 mg/ml proteină) în tampon fosfat de potasiu de 100 mM (pH 7,4), cu reacția și analiza enzimatică efectuate ca mai sus și comparate cu controalele corespunzătoare care conțin solvent. Inhibitorul standard clorgyline a fost utilizat ca martor pozitiv pentru inhibare (inhibare>90% la 2, 5 MMC). Incubațiile au fost efectuate cel puțin în dublu exemplar din diferite experimente, iar valorile IC50 au fost calculate folosind GraphPad Prism 4.0.

2.5. Determinarea activității antioxidante asociate cu inhibarea monoaminooxidazei(MAO)

testele (0,2 mL) de amestecuri de reacție în tampon fosfat de potasiu de 70 mM (pH 7,4), conținând 0,025 mg/mL proteină MAO-A și 0,25 mm kynuramină, au fost incubate la 37 CTC timp de 40 min în absența (teste de control) sau în prezența extractelor de plante. Testele MAO s-au efectuat, de asemenea, în prezența clorgilinei (25 MMCT), a unui inhibitor clasic al MAO-A (controlul pozitiv al inhibării) sau a enzimei catalazei (100 MMCT/mL). După perioada de incubație, amestecul de reacție a fost adăugat cu cărbune activ (3,5 mg), amestecat și filtrat (0,45 MMC). Soluția a fost adăugată cu 20 ilqtl de tetrametilbenzidină de 10 mM (TMB) în 40% DMSO și 20 ilqtl de peroxidază de hrean (HRP) tip II (1 mg/mL), păstrată 5 min și adăugată cu 0,3 mL de soluție H2SO4 de 0,5 m. Absorbanța la 450 nm a fost măsurată pentru a determina diimina TMB, un produs galben rezultat din oxidarea TMB de către HRP și H2O2 generat în dezaminarea oxidativă catalizată de MAO. Oxidarea TMB în prezența inhibitorilor MAO a fost comparată cu controalele corespunzătoare fără inhibitori și semifabricatele corespunzătoare au arătat absența interferențelor.

3. Rezultate și discuții

preparate comerciale de H. perforatum inhibat MAO-a uman cu potență similară: valori IC50 de 142,3 Oct 30.6% / ml (preparat pe bază de plante), 193% 61%/ml (capsule) și 173% 29%/mL (tablete) [Figura 1% (a)]. În ceea ce privește plantele, extractele de H. perforatum din flori au avut cea mai mare inhibiție (IC50 de 63,6% 9,4%/mL), urmate de tulpinile și frunzele aeriene (IC50 143,6% 16,5%/mL) și cea mai mică în extractele de rădăcini (Figura 1 litera(b)). Extrasele din părțile aeriene ale H. perforatum au fost analizate prin HPLC-DAD-ESI (ionizare electrospray-negativă). Ei au arătat prezența a două naftodiantrone majore identificate ca pseudohipericină și hipericină (Figura 2(a) și Tabelul 1). Extractele de flori au avut doi compuși suplimentari identificați ca protopseudohipericină și protohipericină. Fenolicii și flavonoidele abundă în extractele de H. perforatum (Figura 2 (b)). Acidul clorogenic și glicozidele quercetin rutină, hiperozidă, izocercitrină, miquelianină, hiperozidă acetil și quercitrină, precum și quercetină liberă și biapigenină, au fost identificate prin HPLC-DAD (ionizare negativă ESI) și DAD (Tabelul 1). Pe de altă parte, extractele de flori conțineau patru floroglucinoli (Figura 2(c)) care au fost identificați prin HPLC-DAD-MS (ionizare negativă și pozitivă ESI) și DAD ca hiperforină, adhiperforină, hiperfirină și adhiperfirină (Tabelul 1). Prezența acestor compuși (Figura 3) în plantă este de acord cu alte rezultate . Conținutul componentelor principale a fost determinat de HPLC (Tabelul 2). Concentrația pseudohipericinei a fost mai mare decât hipericina, în timp ce protopseudohipericina și protohipericina au fost compuși minori (0,4 hectogg/mg protopseudohipericină și 0.În flori s-au detectat 17%/mg protohipericină). În plantă, cel mai mare conținut de hipericine a fost găsit în flori cu niveluri semnificativ scăzute detectate în tulpini și absență în rădăcini. Hiperforina a fost extrem de abundentă în flori (27,2%/mg), în timp ce concentrația în preparatele comerciale a variat între 0,36 și 2,4%/mg. În flori, adhyperforin (1.4 ± 0.07 µg/mg), hyperfirin (4.2 ± 0.02 µg/mg), și adhyperfirin (0.46 ± 0.02 µg/mg), de asemenea, a apărut. Flavonoidele abundă în H. perforatum și majoritatea au fost glicozide quercetin(Figura 2 (b)) a căror prezență a fost semnificativ mai mare în flori decât în alte părți ale plantei. Conținutul de quercetină liberă în flori a fost de 2,0% / mg, în timp ce un conținut de 6,7%/mg a fost determinat în preparatele comerciale.

(a)

(b)

(a)
(b)

Figura 1

inhibarea monoaminooxidazei – a Umane (MAO-A) prin extracte din preparate comerciale de H. perforatum (a) (capsule, inks; tablete, inks; plante aromatice, sec. (ii), precum și extracte din diferite părți ale plantei (b) (flori, sec. (ii), sec. (ii), sec. (ii), sec. (ii), sec. (ii), sec. (ii), sec. (ii), sec. (ii), sec. (ii). Diferențe semnificative () între extracte la o concentrație selectată sunt indicate cu litere diferite.

(a) nm

(b) nm

(c) nm

(a) nm
(b) nm
(c) nm

Figure 2

HPLC chromatograms of extracts from H. perforatum flowers. (a) Detection of hypericins at 590 nm. 1: protopseudohypericin; 2: pseudohypericin; 3: protohypericin; and 4: hypericin. (b) Detection of phenols and flavonoids at 265 nm. 1: chlorogenic acid; 2: rutin; 3: hyperoside; 4: izocercitrină; 5: miquelianină; 6: hiperozidă acetil; 7: quercitrină; 8: quercetină; și 9: biapigenină. (c) detectarea floroglucinolilor la 280 nm. 1: hiperfirină, 2: adhiperfirină; 3: hiperforină; și 4: adhiperforină.

Figura 3

structuri ale compușilor identificați în H. perforatum: hipericine, quercetină și quercetină flavonoide și floroglucinoli (hiperforină, adhiperforină, hiperfirină și adhiperfirină).

inhibarea lui MAO-a de către H. extractele perforatum indică apariția inhibitorilor. Hipericinele, hiperforina și flavonoidele sunt posibile contributoare la această inhibare și au fost evaluate ca inhibitori (Figura 4). Hipericina a inhibat MAO-A (IC50 de 35,5 int 2,1 int sau 17,9 int/mL) (Figura 4 a)). Din concentrația din tabelul 2, hipericina contribuie slab la inhibarea MAO în extractele de H. perforatum. Într-adevăr, conținutul calculat de hipericină la valoarea IC50 în testele extractului de flori (adică 63,6%/ml) a fost de 0,1%/mL, ceea ce este scăzut în comparație cu IC50 % (17,9%/mL). Hiperforina nu a inhibat MAO-A (Figura 4(b)). Quercetina a inhibat MAO-a umană (Figura 4 (b)) cu o valoare IC50 de 11,1 0,8 0,8 0,36 / ml). Apoi, quercetina a fost un inhibitor mai bun decât hipericina, deși potența sa era încă scăzută pentru a explica întreaga inhibare a extractelor. Astfel, conținutul calculat de quercetină la IC50 în testele extractului de flori a fost de 0,13 hectog / mL, care este mai mic decât IC50 de quercetină (3,4 octogon/mL). Când fracția corespunzătoare glicozidelor quercetin și flavonoidelor (7-11 min, Figura 2 (b)) a fost colectată de RP-HPLC, aceasta a inhibat MAO-a (inhibare 90% la 700 extract de hectogg/mL) indicând o contribuție a acestor compuși la inhibarea MAO în H. perforatum, probabil prin efecte aditive. Apoi, inhibarea MAO-A ar putea apărea din componente precum quercetina și flavonoidele conexe (adică glicozidele quercetinei) care sunt abundente în plantă. În plus, compușii minori care nu au fost identificați aici ar putea contribui, de asemenea, la inhibarea MAO, deoarece compușii majori din tabelul 2 nu explică inhibarea integrală.

(a)

(b)

(a)
(b)

Figura 4

inhibarea monoaminooxidazei-a Umane (MAO-A) de către componentele active ale H. perforatum: hipericina (a) și quercetina (inqu) și hiperforina (inqu) (b).

extractele din semințe de P. harmala au inhibat puternic MAO-A uman(figura 5 (A)), oferind o valoare IC50 de 49,9, 5,6, 5,6, / L. Analiza cromatografică a indicat faptul că inhibarea s-a datorat prezenței alcaloizilor-carbolină, harmalină și harmină, care au fost identificați prin HPLC-DAD-MS (Figura 5(c)). Conținutul acestor alcaloizi determinați în semințe a fost de 48,5 mg/g pentru harmalină și 40,0 mg/g pentru harmină (aceasta înseamnă 2,4 ng/mL și 2,0 ng/mL, resp., în teste la IC50). Prin urmare, potența de inhibare a MAO-A de către semințele P. harmala a fost de 1274 ori mai puternică decât cea a florilor H. perforatum. Așa cum se arată în Figura 5(b), extractele de rădăcină de Lepidium meyenii nu au inhibat MAO-A. L. uman. meyenii (maca) este o plantă populară din Munții Anzi ale cărei rădăcini sunt din ce în ce mai utilizate pentru proprietățile sale nutritive și medicinale ca energizante și pentru a îmbunătăți starea de spirit și performanța sexuală . Rapoartele anterioare au indicat faptul că acestea conțin alcaloizi, inclusiv carboline-carboline care ar putea inhiba MAO. Analiza extractelor de β-livrat alcaloizi dat 25 µg/g (maca pulbere) și 11.7 µg/g (capsule) de 1-metil-1,2,3,4-tetrahidro-β-livrat-3-carboxilic acid ca un important compus. Acest specific-carbolină nu este un inhibitor al MAO-A .

(a)

(b)

(c)

(a)
(b)
(c)

Figura 5

inhibarea monoaminooxidazei-a Umane (MAO-A) de către extractele (B) de semințe de P. harmala (a) și rădăcină de L. meyenii (maca) (Capsule, inox și pulbere, inox). (c) cromatograma HPLC a extractului de semințe de P. harmala care a inhibat puternic detectarea absorbanței umane MAO-A. la 254 nm. Compușii identificați sunt harmalina (m/z la 215 (m + H)+, la 375 nm) și harmina (m/z la 213 (M + H)+, la 245 și 322 nm).

MAO generează peroxid de hidrogen (H2O2) care este implicat în deteriorarea celulelor oxidative și în condițiile patologice . Apoi, inhibarea MAO poate duce la acțiuni antioxidante specifice . Pentru a studia activitatea antioxidantă asociată cu inhibarea MAO, au fost concepute experimente în această cercetare care au legat activitatea MAO-A de oxidarea tetrametilbenzidinei (TMB) de peroxidază de hrean (HRP) și H2O2 produs în timpul dezaminării oxidative catalizate de MAO (Figura 6). Extractele H. perforatum și P. harmala care au inhibat MAO-A așa cum se arată mai sus au scăzut foarte mult oxidarea TMB. În schimb, extractele de rădăcină de L. meyenii (maca) care nu au inhibat MAO au avut o activitate antioxidantă scăzută în acest test. Clorgyline, care este un inhibitor puternic al MAO-A a scăzut foarte mult oxidarea TMB atunci când este utilizat ca control. La fel s-a întâmplat și cu prezența catalazei în mediul care elimină H2O2 generat de MAO-A. Prin urmare, aceste rezultate indică faptul că extractele H. perforatum și P. harmala au oferit acțiuni antioxidante specifice asociate cu o producție mai mică de H2O2 prin inhibarea MAO.

Figura 6

activitate antioxidantă asociată cu inhibarea MAO în activitatea de cuplare a testelor MAO-A cu oxidarea ulterioară a tetrametilbenzidinei (TMB) în prezența H2O2 generată în reacția MAO și a peroxidazei de hrean (HRP). Graficul prezintă oxidarea TMB la diimină (absorbanță la 450 nm) în testele de control (100%) și în prezența H. perforatum (extracte de plante și flori, 800 hectog/mL), extracte de semințe de P. harmala (0,8 hectog/mL), L. extracte din radacina de meyenii (Maca) (800 de grame/mL), clorgyline (un inhibitor standard al MAO-A) (25 de grame) si catalaza (100 de grame/mL). diferențe () în comparație cu controalele.

H. perforatum îmbunătățește tulburările de dispoziție și depresia . După cum se arată aici, conține compuși precum hiperforina, hipericinele și flavonoidele responsabile de efectele antidepresive (Figura 2 și Tabelul 2). Cu toate acestea, mecanismul specific pentru acțiunea antidepresivă nu este complet înțeles. Cel mai acceptat mecanism este inhibarea recaptării monoaminei . Cu toate acestea, unele studii sugerează o combinație de mecanisme și efecte sinergice . P. harmala exercită numeroase acțiuni biologice și farmacologice. Semințele lor sunt din ce în ce mai utilizate în scopuri recreative datorită efectelor lor psihoactive și neuroactive . Inhibarea MAO-a umană este un mecanism stabilit pentru acțiunea antidepresivă . Atât inhibitorii ireversibili, cât și reversibili ai MAO-A (de exemplu, fenelzina și moclobemida) sunt utilizați cu succes ca antidepresive. În acest studiu, extractele de H. perforatum au inhibat MAO-A uman. cu toate acestea, această inhibare a fost moderată. A fost de peste o mie de ori mai mică decât cea a extractelor de semințe de P. harmala. Sacher și colab. au raportat că ocuparea situsurilor MAO-A în creierul uman determinată prin imagistica PET cu legare de 11C-harmină (adică, aceeași carbolină-urc responsabilă de inhibarea MAO în P. harmala) a fost ridicată pentru un inhibitor reversibil al MAO, cum ar fi moclobemida, dar scăzută pentru extractul de H. perforatum (sunătoare) . Aceasta înseamnă că inhibitorii MAO-A din H. perforatum nu se leagă eficient de situsurile active ale MAO-A din creier, spre deosebire de harmina de la carbolină. Inhibitorii MAO-A În H. perforatum sunt flavonoide, cum ar fi quercetina și glicozidele lor, iar nivelurile acestor compuși care ajung la creier ar putea să nu fie suficiente pentru a ocupa locurile MAO-A din creier și pentru a inhiba enzima . În schimb, inhibitorii P. harmala sunt alcaloizi din carbolină, inclusiv harmină și harmalină, care au o penetrare foarte bună a creierului, se leagă cu afinitate ridicată de site-urile MAO și prezintă efecte antidepresive . Prin urmare, P. harmala și-ar putea permite efecte antidepresive prin inhibarea MAO. În acest sens, ar putea fi interesant să se investigheze efectele antidepresive ale H. perforatum și P. harmala singuri și în combinație, deoarece au mecanisme diferite de acțiune.

inhibarea MAO-A de către extractele H. perforatum și P. harmala poate contribui la alte efecte biologice ale acestor plante, cum ar fi acțiunile antioxidante și reacțiile farmacologice adverse. Extractele acestor plante exercită efecte neuroprotectoare și antiinflamatorii care au fost legate de activitatea antioxidantă . În acest sens, prin utilizarea unei noi proceduri, rezultatele în această lucrare au evidențiat faptul că H. perforatum și P. extractele harmala prezintă activitate antioxidantă asociată cu inhibarea MAO (producție mai mică de H2O2). Pe de altă parte, una dintre limitările majore ale utilizării acestor plante este potențialul lor de a produce interacțiuni adverse cu alte plante, alimente și medicamente . Inhibarea MAO-A poate declanșa efecte adverse în anumite circumstanțe .

4. Concluzii

extractele din H. perforatum au inhibat MAO-A uman, iar extractele din flori au fost cei mai puternici inhibitori. Acestea au fost studiate de HPLC-DAD-MS și conțineau pseudohipericină, hipericină, hiperforină, adhiperforină, hiperfirină și flavonoide. Cel mai mare conținut al acestor compuși a apărut în flori. Hipericina a fost un inhibitor slab al MAO-A; hiperforina nu a inhibat enzima, iar quercetina a fost un inhibitor moderat. Fracțiunea de glicozide quercetin și flavonoide a contribuit la inhibarea MAO. Extractele de semințe de P. harmala au inhibat puternic MAO-A, iar potența sa de inhibare a fost de peste o mie de ori mai mare decât extractele de H. perforatum datorită conținutului său în alcaloizi harmalină și harmină. L. extractele de rădăcină de meyenii (maca) nu au inhibat MAO-A. inhibarea MAO-A poate să nu explice toate efectele SNC atribuite H. perforatum, dar este de așteptat să contribuie la aceste acțiuni în P. harmala. Aceste plante exercită efecte antioxidante. Prin utilizarea unei noi metode, această lucrare a evidențiat faptul că extractele P. harmala și H. perforatum prezintă activitate antioxidantă asociată cu inhibarea MAO.

conflicte de interese

autorii declară că nu există interese financiare concurente.

mulțumiri

autorii sunt recunoscători MINECO-FEDER (SAF2015-66690-R și SAF2015-68580-C2-R) și CSIC (Spania) (proiect 200470e658) pentru susținerea acestei lucrări. Autorii sunt recunoscători, De asemenea, Marta Aguilar Preiss pentru asistență tehnică și Dr .. V. Ar pentru a ajuta la identificarea și selectarea plantelor.