Notes based on information on’ basic practical microbiology ’ © Society for General Microbiology.
Tutustu aseptisiin tekniikoihin ennen tämän tai minkä tahansa muun mikrobiologisen käytännön työn aloittamista.
kaatolautaselle lisätään pipetillä petrimaljan keskelle pieni määrä siirrosainetta liemiviljelmästä. Koeputkessa tai pullossa oleva jäähdytetty mutta silti sula agar-aine kaadetaan sitten petrimaljaan. Tämän jälkeen lautasta pyöritetään varovasti tai liikutellaan edestakaisin (ensin N-S, sitten NW-SE, sitten NE-SW) sen varmistamiseksi, että viljelmä ja väliaine sekoittuvat perusteellisesti ja että väliaine peittää lautasen tasaisesti.
Kaatolevyt mahdollistavat mikro-organismien kasvun sekä pinnalla että väliaineessa. Suurin osa yhdyskunnista kasvaa keskiruumiissa ja ovat kooltaan pieniä ja saattavat olla yhtäpitäviä. Harvat pesäkkeet, jotka kasvavat pinnalla, ovat samankokoisia ja-näköisiä kuin juovalevyllä kasvavat pesäkkeet.
näillä levyillä voitiin sitten testata eri aineiden antimikrobisia vaikutuksia. Lisätietoja on ohjeaiheessa mikrobilääkkeen vaikutuksen tutkiminen.
muuten tämänkaltaiset levyt voisivat olla osa näytteen bakteeripopulaation tutkimista. Viljelemällä sarjalaimennoksia tällä tavalla voidaan laskea bakteerinäytteen populaatiokoko. Jos inokulaatin laimennus ja tilavuus (yleensä 1 cm3) tunnetaan, voidaan määrittää näytteen elinkykyinen määrä cm3: a kohti. Elinkelpoinen luku on bakteerien tai bakteerien möhkäleiden määrä per cm3. Valittujen laimennosten on tuotettava 30-100 erillistä laskettavaa pesäkettä. (Katso myös vakiotekniikka: Sarjalaimennosten tekeminen)
Terveys & turvallisuus-ja tekniset huomautukset
1 Käytä vesihaudetta 50 °C: ssa sulan agar-pullon säilyttämiseen.
2 varo saastuttamasta pulloissa olevaa sulaa agaria vesihauteesta tulevalla vedellä. Kontaminaation välttämiseksi on varmistettava:
i, että vesihauteessa oleva vesi on oikeassa syvyydessä
ii, että pullot pidetään pystyasennossa
iii, että pullojen ulkopinnat pyyhitään ennen käyttöä.
3 tasaisella valolevyllä levyn pohjan on oltava peitetty, agar ei saa koskea levyn kantta ja pinnan on oltava sileä ilman kuplia.
4 CLEAPSS laboratorion käsikirjan kohdassa 15.2.12 ehdotetaan joitakin vaihtoehtoisia menetelmiä kaataa levy, ja tarkastellaan niiden hyviä ja huonoja puolia.
menettely
inokulaatio Pasteur-pipetillä
pidä pipettiä aina paikallaan.
a löysää siirrosaineen sisältävän pullon korkki/ pumpulitulppa.
b ota steriili Pasteur-pipetti säiliöstään, kiinnitä nyytti ja pidä kiinni oikeassa kädessäsi.
c nosta siirrosaineen sisältävää pulloa/ koeputkea vasemmalla kädellä.
d poista korkki / pumpulitulppa oikean käden pikkusormella.
e pullon/ koeputken kaula poltetaan.
f purista pipetin nutturakupua hieman. Laita pipetti pulloon/ koeputkeen ja vedä tarvittava tilavuus viljelyä. Älä purista pipetin nisälamppua sen jälkeen, kun se on liemessä, koska se voi aiheuttaa kuplia ja mahdollisesti aerosoleja.
g pipetti poistetaan ja pullon/ koeputken kaula sytytetään uudelleen. Vaihda korkki/ pumpulitulppa.
h pullo/ koeputki asetetaan penkille tai telineeseen.
Inokuloimalla petrimaljaa
nosta petrimaljan kantta hieman oikealla kädellä ja laita pipetti petrimaljaan. Vapauta tarvittava määrä siirrosainetta varovasti astian keskelle. Vaihda kansi.
b laita pipetti poisheitettävään astiaan.
levyn kaataminen
a steriiliä sulaa agaria sisältävä pullo kerätään vesihauteesta (huom. 1 ja 2).
b pidä pulloa oikeassa kädessäsi. Poista korkki vasemman käden pikkusormella.
c liekki pullon kaula.
d nosta petrimaljan kantta hieman vasemmalla kädellä ja kaada steriili sula agar petrimaljaan. Vaihda kansi.
e pullon kaula sytytetään ja korkki vaihdetaan.
f liikuta astiaa varovasti, jotta viljelyaine ja kasvualusta sekoittuvat perusteellisesti ja jotta väliaine peittää lautasen tasaisesti (Huom.3). Siirrä lautasta joko kolmeen suuntaan: ensin N-S, sitten NW-SE, sitten NE-SW, tai pyöritä sitä, kunnes väliaine ja siirrosaine ovat sekoittuneet hyvin ja peittävät astian pohjan.
g levyn annetaan jähmettyä.
h teippaa levy kiinni ja inkuboi ylösalaisin.
Web links
Society for General Microbiology – source of basic Practical Microbiology, an excellent manual of laboratory techniques and Practical Microbiology for Secondary Schools, a selection of tried and tested practicals using microorganisms.
Microbiology online
Misacin (Microbiology in Schools Advisory Committee) toimintaa tukee Society for General Microbiology (KS.yllä) ja sen verkkosivuilta löytyy lisää turvallisuustietoa ja linkki, josta voi kysyä neuvoa sähköpostitse.
(verkkosivut saatavilla lokakuussa 2011)