Poznámky na základě informace v Základní praktická mikrobiologie‘ © Společnost pro Obecné Mikrobiologie.
před zahájením této nebo jakékoli jiné mikrobiologické praktické práce se podívejte na aseptické techniky.
v nalévací desce se pipetou přidá malé množství inokula z bujónové kultury do středu Petriho misky. Chlazené, ale stále roztavené agarové médium ve zkumavce nebo láhvi se pak nalije do Petriho misky. Miska se pak jemně otáčí nebo se pohybuje tam a zpět (nejprve N-S, pak NW-SE, pak NE-SW), aby se zajistilo, že kultura a médium jsou důkladně promíchány a médium rovnoměrně zakrývá desku.
nalévací desky umožňují růst mikroorganismů jak na povrchu, tak uvnitř média. Většina kolonií roste uvnitř média a má malou velikost a může být konfluentní. Několik kolonií, které rostou na povrchu, má stejnou velikost a vzhled jako kolonie na pruhované desce.
tyto desky by pak mohly být použity k testování antimikrobiálních účinků různých látek. Další informace naleznete v části vyšetřování antimikrobiálního účinku.
jinak by takové desky mohly být součástí vyšetřování populace bakterií ve vzorku. Kultivace sériových ředění tímto způsobem umožňuje výpočet velikosti populace bakteriálního vzorku. Pokud je známo ředění a objem inokula, obvykle 1 cm3, lze stanovit životaschopný počet vzorku na cm3. Životaschopný počet je počet bakterií nebo shluků bakterií na cm3. Zvolená ředění musí produkovat mezi 30 a 100 samostatnými počitatelnými koloniemi. (Viz také standardní technika: Takže sériové ředění)
Zdraví & Bezpečnostní a Technické poznámky
1 Použití vodní lázni na 50 °C pro uložení lahví tekutého agaru.
2 dbejte na to, aby se roztavený agar v lahvích nekontaminoval vodou z vodní lázně. Aby se zabránilo kontaminaci zajistit:
myslím, že vody ve vodní lázni je ve správné hloubce
ii, že lahve jsou udržovány ve vzpřímené poloze
iii, které exteriérů lahve jsou vymazán dříve, než jsou použity.
3 V rovnoměrně rozloženy nalít desky, základní desky musí být pokryta, agar nesmí dotýkat víka z plechu a povrch musí být hladký bez bublin.
4 CLEAPSS Laboratory handbook oddíl 15.2.12 navrhuje některé alternativní metody výroby nalévací desky a zvažuje jejich výhody a nevýhody.
postup
očkování pasteurovou pipetou
vždy Držte pipetu co nejlehčí.
a uvolněte uzávěr / zátku z vaty lahvičky obsahující inokulum.
B vyjměte sterilní pipetu Pasteur z obalu, nasaďte struk a držte jej v pravé ruce.
c levou rukou zvedněte lahvičku/ zkumavku obsahující inokulum.
d malíčkem pravé ruky sejměte uzávěr/ zátku z vaty.
e plamen hrdlo láhve / zkumavky.
f stlačte strukovou baňku pipety velmi mírně. Vložte pipetu do láhve/ zkumavky a nakreslete požadovaný objem kultury. Nemačkejte prsu žárovka pipety poté, co je ve vývaru, protože to by mohlo způsobit bubliny a případně aerosoly.
g pipetu vyjměte a hrdlo lahvičky/ zkumavky znovu zapálte. Vyměňte uzávěr / zátku z bavlněné vlny.
h umístěte lahvičku / zkumavku na lavici nebo do stojanu.
naočkujte Petriho misku
a pravou rukou lehce zvedněte víko Petriho misky a pipetu vložte do Petriho misky. Jemně uvolněte požadovaný objem inokula na střed misky. Vyměňte víko.
b vložte pipetu do odhazovací nádoby.
Nalití desky
Sbírat láhve sterilní roztaveného agaru z vodní lázně (poznámka 1 a 2).
b držte lahvičku v pravé ruce. Odstraňte víčko malým prstem levé ruky.
c plamen hrdlo láhve.
d levou rukou mírně zvedněte víko Petriho misky a nalijte sterilní roztavený agar do Petriho misky. Vyměňte víko.
e zapálte hrdlo láhve a vyměňte uzávěr.
f Přesuňte pokrm jemně míchat kultury a médium důkladně a aby bylo zajištěno, že médium se vztahuje na desku rovnoměrně (poznámka 3). Buď přesunout misky ve třech směrech: první N-S, pak NW-SE, pak NE-SW, nebo otočte jej, dokud médium a inokulum jsou dobře-smíšené a pokrývají spodní části misky.
g nechte desku ztuhnout.
h pásku destičku uzavřete a inkubujte v obrácené poloze.
odkazy
Mikrobiologie učitel zdroje
Společnost pro Obecné Mikrobiologie – zdroj Základní Praktické Mikrobiologie, vynikající příručka laboratorní techniky a Praktické Mikrobiologie pro Střední Školy, výběr testovaných cvičení pomocí mikroorganismů.
Mikrobiologie on-line
MiSAC (Mikrobiologie ve Školách Poradní Výbor) je podporován Společností pro Obecné Mikrobiologie (viz výše), a jejich webové stránky zahrnují další bezpečnostní informace a odkaz požádat o radu e-mailem.
(webové stránky přístupné v říjnu 2011)