note bazate pe informațiile din ‘microbiologie practică de bază’ Societatea pentru Microbiologie generală a societății pentru Microbiologie generală.
consultați tehnicile aseptice înainte de a începe această lucrare practică sau orice altă lucrare practică de Microbiologie.
într-o placă de turnare, o cantitate mică de inocul dintr-o cultură de bulion este adăugată prin pipetă în centrul unui vas Petri. Mediul de agar răcit, dar încă topit, într-o eprubetă sau sticlă este apoi turnat în vasul Petri. Vasul este apoi rotit ușor sau mutat înainte și înapoi (mai întâi N-S, apoi NW-se, apoi NE-SW), pentru a se asigura că cultura și mediul sunt bine amestecate și mediul acoperă uniform placa.
plăcile de turnare permit microorganismelor să crească atât la suprafață, cât și în mediu. Majoritatea coloniilor cresc în mediu și sunt de dimensiuni mici și pot fi confluente. Puținele colonii care cresc la suprafață au aceeași dimensiune și aspect ca cele de pe o placă cu dungi.
aceste plăci ar putea fi apoi utilizate pentru a testa efectele antimicrobiene ale diferitelor substanțe. Pentru mai multe informații, consultați investigarea acțiunii antimicrobiene.
în caz contrar, plăci precum aceasta ar putea face parte din investigarea populației de bacterii dintr-o probă. Cultivarea diluțiilor seriale în acest mod permite un calcul al dimensiunii populației unei probe bacteriene. Dacă se cunoaște diluția și volumul inoculului, de obicei 1 cm3, se poate determina numărul viabil al probei pe cm3. Numărul viabil este numărul de bacterii sau aglomerări de bacterii pe cm3. Diluțiile alese trebuie să producă între 30 și 100 de colonii separate numărabile. (Vezi și tehnica Standard: Efectuarea de diluții în serie)
sănătate& siguranță și note tehnice
1 utilizați o baie de apă la 50 CTC pentru a depozita sticle de agar topit.
2 aveți grijă să nu contaminați agarul topit din sticle cu apă din Baia de apă. Pentru a evita contaminarea, asigurați-vă:
i că apa din Baia de apă este la adâncimea potrivită
ii că sticlele sunt ținute în poziție verticală
iii că părțile exterioare ale sticlelor sunt șterse înainte de a fi utilizate.
3 într-o placă de turnare distribuită uniform, baza plăcii trebuie acoperită, agarul nu trebuie să atingă capacul plăcii și suprafața trebuie să fie netedă, fără bule.
4 manualul de laborator CLEAPSS secțiunea 15.2.12 sugerează câteva metode alternative de realizare a unei plăci de turnare și ia în considerare avantajele și dezavantajele acestora.
procedură
inoculare folosind o pipetă Pasteur
țineți pipeta cât mai nemișcată posibil.
a slăbiți capacul/ dopul de vată al flaconului care conține inoculul.
B scoateți pipeta Pasteur sterilă din recipient, atașați tetina și țineți-o în mâna dreaptă.
c ridicați flaconul/ eprubeta care conține inoculul cu mâna stângă.
d scoateți capacul/ dopul de vată cu degetul mic al mâinii drepte.
e Flacați gâtul flaconului/ eprubetei.
f strângeți foarte ușor becul tetinei pipetei. Puneți pipeta în sticlă/ eprubetă și trageți volumul necesar al culturii. Nu strângeți becul tetinei pipetei după ce se află în bulion, deoarece acest lucru ar putea provoca bule și, eventual, aerosoli.
g scoateți pipeta și aprindeți din nou gâtul flaconului/ eprubetei. Înlocuiți capacul / dopul de vată.
h așezați flaconul/ eprubeta pe bancă sau în suportul acesteia.
inocularea vasului Petri
a ridicați ușor capacul vasului Petri cu mâna dreaptă și introduceți pipeta în vasul Petri. Eliberați ușor volumul necesar de inocul pe centrul vasului. Puneți la loc capacul.
b puneți pipeta într-un vas aruncat.
turnarea plăcii
a se colectează o sticlă de agar topit steril din Baia de apă (nota 1 și 2).
b țineți flaconul în mâna dreaptă. Scoateți capacul cu degetul mic al mâinii stângi.
c Flacați gâtul flaconului.
D ridicați ușor capacul vasului Petri cu mâna stângă și turnați agarul topit steril în vasul Petri. Puneți la loc capacul.
e Flacați gâtul flaconului și puneți la loc capacul.
f deplasați ușor vasul pentru a amesteca bine cultura și mediul și pentru a vă asigura că mediul acoperă uniform placa (Nota 3). Fie mutați vasul în trei direcții: mai întâi N-S, apoi NW-SE, apoi NE-SW, fie rotiți-l până când mediul și inoculul sunt bine amestecate și acoperă baza vasului.
G lăsați placa să se solidifice.
h bandați placa închisă și incubați-o într-o poziție inversată.
link – uri web
resurse pentru profesori de Microbiologie
Societatea pentru Microbiologie generală-sursă de Microbiologie practică de bază, un manual excelent de tehnici de laborator și Microbiologie practică pentru școlile secundare, o selecție de practici încercate și testate folosind microorganisme.
Microbiologie online
MiSAC (Comitetul Consultativ pentru microbiologie în școli) este susținut de Societatea pentru Microbiologie generală (a se vedea mai sus), iar site-urile lor web includ mai multe informații privind siguranța și un link pentru a solicita sfaturi prin e-mail.
(site-uri accesate în octombrie 2011)