notities op basis van informatie in “basic practical microbiology” © Society for General Microbiology.
Raadpleeg aseptische technieken voordat u begint met dit of met enig ander praktisch microbiologisch werk.
in een gietplaat wordt met pipet een kleine hoeveelheid entmateriaal uit een bouilloncultuur aan het midden van een petrischaaltje toegevoegd. Afgekoeld, maar nog steeds gesmolten, agar medium in een reageerbuis of fles wordt dan gegoten in de petrischaal. De schaal wordt dan voorzichtig gedraaid of heen en weer bewogen (eerst N-S, dan NW-SE, dan NE-SW), om ervoor te zorgen dat de cultuur en het medium grondig worden gemengd en het medium de plaat gelijkmatig bedekt.
met Gietplaten kunnen micro-organismen zowel aan het oppervlak als in het medium groeien. De meeste kolonies groeien in het medium en zijn klein van grootte en kunnen samenvloeien. De paar kolonies die aan het oppervlak groeien zijn van dezelfde grootte en uiterlijk als die op een streepplaat.
deze platen zouden dan kunnen worden gebruikt om de antimicrobiële effecten van verschillende stoffen te testen. Zie onderzoek naar antimicrobiële werking voor meer informatie.
anders zouden platen zoals deze deel kunnen uitmaken van het onderzoek van de bacteriepopulatie in een monster. Het kweken van seriële verdunningen op deze manier maakt een berekening van de populatiegrootte van een bacterieel Monster mogelijk. Indien de verdunning en het volume van het entmateriaal, gewoonlijk 1 cm3, bekend zijn, kan de levensvatbare telling van het monster per cm3 worden bepaald. De levensvatbare telling is het aantal bacteriën of klontjes bacteriën per cm3. De gekozen verdunningen moeten tussen de 30 en 100 afzonderlijke aftelbare kolonies produceren. (Zie ook standaard techniek: Seriële verdunningen)
gezondheid & veiligheid en technische notities
1 bewaar flessen gesmolten agar in een waterbad bij 50 °C.
2 Zorg ervoor dat de gesmolten agar in de flessen niet verontreinigd wordt met water uit het waterbad. Om verontreiniging te voorkomen:
I dat het water in het waterbad op de juiste diepte
ii dat de flessen rechtop worden gehouden
iii dat de buitenkant van de flessen wordt afgeveegd voordat ze worden gebruikt.
3 in een gelijkmatig verdeelde gietplaat moet de bodem van de plaat bedekt zijn, mag de agar het deksel van de plaat niet raken en moet het oppervlak glad zijn zonder luchtbelletjes.
4 CLEAPSS Laboratory handbook paragraaf 15.2.12 stelt een aantal alternatieve methoden voor het maken van een gietplaat voor en bekijkt de voor-en nadelen ervan.
procedure
inoculatie met een pasteurpipet
te allen tijde de pipet zo stil mogelijk houden.
a maak de dop/ wattenplug van de fles met het entmateriaal Los.
b verwijder de steriele pasteurpipet uit de verpakking, bevestig de speen en houd deze in uw rechterhand.
c til de fles/ reageerbuis met het entmateriaal met uw linkerhand op.
d Verwijder het kapje/ wattenstaafje met de pink van uw rechterhand.
e vlam de fles/ reageerbuishals.
f knijp het speenbolletje van de pipet heel licht in. Doe de pipet in de fles/ reageerbuis en trek het benodigde volume van de cultuur op. Knijp niet in de speenbol van de pipet nadat deze in de bouillon zit, omdat dit bellen en mogelijk aerosolen kan veroorzaken.
g verwijder de pipet en vuur de hals van de fles/ reageerbuis opnieuw aan. Vervang de dop/ wattenplug.
h plaats de fles/ reageerbuis op de bank of in het rek.
Ent het petrischaaltje
A til het deksel van het petrischaaltje iets op met uw rechterhand en steek de pipet in het petrischaaltje. Laat het benodigde volume entmateriaal voorzichtig los op het midden van de schotel. Deksel vervangen.
B doe de pipet in een weggooien pot.
gieten van de plaat
a Verzamel een fles steriele gesmolten agar uit het waterbad (noot 1 en 2).
b Houd de fles in uw rechterhand. Verwijder de dop met de pink van uw linkerhand.
c vlam de hals van de fles.
d Til met de linkerhand het deksel van de petrischaal lichtjes op en giet de steriele gesmolten agar in de petrischaal. Deksel vervangen.
e vuur de hals van de fles aan en plaats de dop weer terug.
f beweeg de schaal voorzichtig om de cultuur en het medium grondig te mengen en ervoor te zorgen dat het medium de plaat gelijkmatig bedekt (Noot 3). Verplaats de schotel in drie richtingen: eerst N-S, dan NW-SE, dan NE-SW, of draai hem totdat het medium en entmateriaal goed gemengd zijn en de basis van de schotel bedekken.
g laat de plaat stollen.
h plak de plaat dicht en incubeer in omgekeerde positie.
weblinks
hulpmiddelen voor docenten Microbiologie
Society for General Microbiology – source of Basic Practical Microbiology, an excellent manual of laboratory techniques and Practical Microbiology for Secondary Schools, a selection of tried and tested practicals using micro-organisms.
Online Microbiologie
MiSAC (Microbiology in Schools Advisory Committee) wordt ondersteund door de Society for General Microbiology (zie hierboven) en hun websites bevatten meer veiligheidsinformatie en een link om advies te vragen per e-mail.
(websites geraadpleegd in oktober 2011)