noter baseret på information i ‘grundlæggende praktisk mikrobiologi’.
se aseptiske teknikker, inden du starter dette eller ethvert andet mikrobiologisk praktisk arbejde.
i en hældeplade tilsættes en lille mængde inokulum fra en bouillonkultur med pipette til midten af en petriskål. Afkølet, men stadig smeltet, agarmedium i et reagensglas eller en flaske hældes derefter i petriskålen. Skålen drejes derefter forsigtigt eller flyttes frem og tilbage (først N-s, derefter n-SE, derefter NE-SV) for at sikre, at kulturen og mediet blandes grundigt, og mediet dækker pladen jævnt.
Hældeplader tillader mikroorganismer at vokse både på overfladen og i mediet. De fleste af kolonierne vokser inden for mediet og er små i størrelse og kan være sammenflydende. De få kolonier, der vokser på overfladen, har samme størrelse og udseende som dem på en stribeplade.
disse plader kunne derefter bruges til at teste de antimikrobielle virkninger af forskellige stoffer. For mere information se undersøgelse af antimikrobiel virkning.
ellers kunne plader som dette være en del af undersøgelsen af bakteriepopulationen i en prøve. Dyrkning af serielle fortyndinger på denne måde tillader en beregning af populationsstørrelsen af en bakterieprøve. Hvis fortyndingen og volumenet af inokulum, normalt 1 cm3, er kendt, kan det levedygtige antal af prøven pr.cm3 bestemmes. Det levedygtige antal er antallet af bakterier eller klumper af bakterier pr.cm3. De valgte fortyndinger skal producere mellem 30 og 100 separate tællelige kolonier. (Se også standardteknik: Gør serielle fortyndinger)
sundhed & sikkerheds-og tekniske bemærkninger
1 Brug et vandbad ved 50 liter C til at opbevare flasker smeltet agar.
2 Pas på ikke at forurene den smeltede agar i flaskerne med vand fra vandbadet. For at undgå forurening skal du sikre dig:
i, at vandet i vandbadet er i den rigtige dybde
ii, at flaskerne holdes oprejst
iii, at flaskerne tørres af, før de bruges.
3 i en jævnt fordelt hældeplade skal pladens bund være dækket, agar må ikke røre låget på pladen, og overfladen skal være glat uden bobler.
4 CLEAPSS Laboratory handbook afsnit 15.2.12 foreslår nogle alternative metoder til fremstilling af en hældeplade og overvejer deres fordele og ulemper.
Procedure
inokulation ved hjælp af en Pasteur-pipette
hold altid pipetten så stille som muligt.
a Løsn hætten/ vatproppen på flasken, der indeholder inokulumet.
B tag den sterile Pasteur-pipette ud af beholderen, fastgør Patten og hold den i højre hånd.
C løft flasken/ reagensglasset med inokulumet med din venstre hånd.
d Fjern hætten/ bomuldsuldstikket med lillefingeren på din højre hånd.
e flammer flasken/ reagensglashalsen.
f klem pipettens pattepære meget let. Sæt pipetten i flasken / reagensglasset, og træk det krævede volumen af kulturen op. Klem ikke pipettens pattepære, når den er i bouillon, da dette kan forårsage bobler og muligvis aerosoler.
g Fjern pipetten, og flammer flasken/ reagensglassets hals igen. Sæt hætten/ vatproppen på igen.
h anbring flasken / reagensglasset på bænken eller i stativet.
podning af petriskålen
a løft låget på petriskålen lidt med højre hånd, og indsæt pipetten i petriskålen. Slip forsigtigt den nødvendige mængde inokulum på midten af skålen. Sæt låget på igen.
B læg pipetten i en kasseringskande.
hældning af pladen
a Opsaml en flaske sterilt smeltet agar fra vandbadet (note 1 og 2).
B Hold flasken i din højre hånd. Fjern hætten med lillefingeren på din venstre hånd.
C flammer flaskens hals.
d løft låget på petriskålen lidt med venstre hånd, og hæld den sterile smeltede agar i petriskålen. Sæt låget på igen.
e flammer flaskens hals og sæt hætten på igen.
f Flyt skålen forsigtigt for at blande kulturen og mediet grundigt og for at sikre, at mediet dækker pladen jævnt (note 3). Flyt enten skålen i tre retninger: først N-s, derefter NV-se, derefter NE-SV, eller drej den, indtil mediet og inokulumet er godt blandet og dækker bunden af skålen.
g lad pladen størkne.
h Tape pladen lukket og inkuber i en omvendt position.
links
Mikrobiologilærerressourcer
Society for General Microbiology – kilde til grundlæggende praktisk Mikrobiologi, en fremragende manual til laboratorieteknikker og praktisk Mikrobiologi til gymnasier, et udvalg af afprøvede praktik ved hjælp af mikroorganismer.
Microbiology online
MiSAC (Microbiology in Schools Advisory Committee) støttes af Society for General Microbiology (se ovenfor), og deres hjemmesider indeholder flere sikkerhedsoplysninger og et link til at bede om rådgivning via e-mail.
(hjemmesider adgang til oktober 2011)