megjegyzések az ‘alapvető gyakorlati mikrobiológia’ (basic practical microbiology) általános Mikrobiológiai Társaság (Society for General Microbiology) adatai alapján.
Mielőtt elkezdené ezt vagy bármely más mikrobiológiai gyakorlati munkát, olvassa el az aszeptikus technikákat.
egy öntőlemezen pipettával kis mennyiségű táptalajból származó inokulumot adnak a Petri-csésze közepéhez. Ezután a kémcsőben vagy palackban lehűtött, de még mindig olvadt agar közeget öntünk a Petri-csészébe. Az edényt ezután óvatosan elforgatjuk, vagy oda-vissza mozgatjuk (először N-S, majd NW-SE, majd NE-SW), hogy biztosítsuk, hogy a tenyészet és a táptalaj alaposan összekeveredjen, és a táptalaj egyenletesen lefedje a lemezt.
Öntőlapok lehetővé teszik a mikroorganizmusok növekedését mind a felszínen, mind a táptalajon belül. A legtöbb kolónia a közegben növekszik, kis méretűek és összefolyhatnak. Az a néhány kolónia, amely a felszínen nő, ugyanolyan méretű és megjelenésű, mint a csíklemezen.
ezeket a lemezeket fel lehet használni különböző anyagok antimikrobiális hatásainak tesztelésére. További információ: az antimikrobiális hatás vizsgálata.
ellenkező esetben az ilyen lemezek részét képezhetik a mintában lévő baktériumok populációjának vizsgálatának. A Soros hígítások ilyen módon történő tenyésztése lehetővé teszi a baktériumminta populációméretének kiszámítását. Ha ismert az inokulum hígítása és térfogata, általában 1 cm3, meg lehet határozni a minta életképes számát cm3-enként. Az életképes szám a baktériumok vagy baktériumcsomók száma cm3-enként. A kiválasztott hígításoknak 30-100 különálló megszámlálható kolóniát kell létrehozniuk. (Lásd még Standard technika:
Egészség & biztonsági és műszaki megjegyzések
1 az olvadt agar palackjainak tárolásához vízfürdőt kell használni 50 Kb C hőmérsékleten.
2 ügyeljen arra, hogy a palackokban lévő olvadt agart ne szennyezze a vízfürdőből származó vízzel. A szennyeződés elkerülése érdekében ellenőrizze:
i hogy a víz a vízfürdőben a megfelelő mélységben legyen
ii hogy a palackokat függőlegesen tartsa
iii hogy a palackok külső oldalát használat előtt törölje le.
3 egyenletesen elosztott öntőlemezben a lemez alját le kell fedni, az agar nem érintheti a lemez fedelét, a felületnek simának kell lennie, buborékok nélkül.
4 CLEAPSS laboratóriumi kézikönyv a 15.2.12.szakasz néhány alternatív módszert javasol az öntőlemez készítéséhez, és figyelembe veszi azok előnyeit és hátrányait.
eljárás
beoltás Pasteur pipettával
a pipettát mindig tartsa mozdulatlanul.
a lazítsa meg az oltóanyagot tartalmazó palack kupakját/ vattadugóját.
b vegye ki a steril Pasteur pipettát a tartályából, rögzítse a cumit és tartsa a jobb kezében.
C bal kezével emelje fel az inokulumot tartalmazó palackot/ kémcsövet.
d távolítsa el a kupakot/ vattadugót a jobb keze kisujjával.
e láng a palack / kémcső nyakát.
f nagyon nyomja meg a pipetta bimbóhagymáját. Tegye a pipettát a palackba/ kémcsőbe, és vegye fel a tenyészet szükséges térfogatát. Ne nyomja össze a pipetta bimbóhagymáját, miután az a húslevesbe került, mert ez buborékokat, esetleg aeroszolokat okozhat.
G távolítsa el a pipettát, és ismét lángra lobbantsa a palack/ kémcső nyakát. Helyezze vissza a kupakot/ vattadugót.
h helyezze a palackot/ kémcsövet a padra vagy annak állványára.
a Petri-csésze beoltása
a jobb kezével emelje fel kissé a Petri-csésze fedelét, majd helyezze a pipettát a Petri-csészébe. Óvatosan engedje fel a szükséges mennyiségű inokulumot az edény közepére. Helyezze vissza a fedelet.
b tegye a pipettát egy eldobott edénybe.
a lemez öntése
a Gyűjtsön össze egy üveg steril olvadt agart a vízfürdőből (1.és 2. megjegyzés).
b tartsa az üveget a jobb kezében. Távolítsa el a kupakot a bal keze kis ujjával.
C lángolja fel a palack nyakát.
d Bal kézzel emelje fel kissé a Petri-csésze fedelét, és öntse a steril olvadt agart a Petri-csészébe. Helyezze vissza a fedelet.
e lángolja fel a palack nyakát, és tegye vissza a kupakot.
f óvatosan mozgassa az edényt, hogy a tenyészetet és a táptalajt alaposan összekeverje, és biztosítsa, hogy a táptalaj egyenletesen fedje le a lemezt (3.megjegyzés). Vagy mozgassa az edényt három irányba: először N-S, majd NW-SE, majd NE-SW, vagy forgassa addig, amíg a táptalaj és az inokulum jól össze nem keveredik, és fedje le az edény alapját.
G hagyjuk a lemezt megszilárdulni.
H ragasszuk le a lemezt, és inkubáljuk fordított helyzetben.
weblinkek
mikrobiológiai tanári források
Általános Mikrobiológiai Társaság – az alapvető gyakorlati mikrobiológia forrása, kiváló laboratóriumi technikák és gyakorlati mikrobiológia kézikönyve középiskolák számára, válogatott bevált gyakorlatok mikroorganizmusokkal.
Microbiology online
a MiSAC (Microbiology in Schools Advisory Committee) az Általános Mikrobiológiai Társaság (lásd fent) támogatásával működik, weboldalaik pedig további biztonsági információkat és e-mailben tanácsot kérő linket tartalmaznak.
(2011. október)