Monoamino ossidasi-Un’inibizione e attività antiossidante associata in estratti vegetali con potenziali azioni antidepressive

Abstract

Monoamino ossidasi (MAO) catalizza la deaminazione ossidativa di ammine e neurotrasmettitori ed è coinvolto in disturbi dell’umore, depressione, stress ossidativo e reazioni farmacologiche avverse. Questo lavoro studia l’inibizione della MAO-A umana da Hypericum perforatum, Peganum harmala e Lepidium meyenii, che sono segnalati per migliorare e influenzare l’umore e le condizioni mentali. Successivamente, l’attività antiossidante associata all’inibizione delle MAO viene determinata per la prima volta negli estratti vegetali. H. perforatum ha inibito MAO-A umano e gli estratti dai fiori hanno dato la massima inibizione (IC50 di 63,6 µg / mL). Gli estratti vegetali sono stati analizzati da HPLC-DAD-MS e contenevano pseudoipericina, ipericina, iperforina, adhyperforina, iperfirina e flavonoidi. L’iperforina non ha inibito la MAO-A umana e l’ipericina era un inibitore scarso di questo isoenzima. Quercetina e flavonoidi hanno contribuito in modo significativo all’inibizione di MAO-A. P. estratti di semi di harmala altamente inibiti MAO-A (IC50 di 49,9 µg / L), essendo mille volte più potenti degli estratti di H. perforatum grazie al suo contenuto di alcaloidi β-carboline (harmaline e harmine). Gli estratti della radice di L. meyenii (maca) non hanno inibito MAO-A. Queste piante possono esercitare le azioni protettive relative agli effetti antiossidanti. I risultati in questo lavoro mostrano che gli estratti di P. harmala e H. perforatum mostrano attività antiossidante associata all’inibizione di MAO (cioè, minore produzione di H2O2).

1. Introduzione

L’enzima monoamino ossidasi (MAO) metabolizza ammine xenobiotiche ed endogene e neurotrasmettitori tra cui serotonina, dopamina, noradrenalina, tiramina, triptamina e la neurotossina MPTP . Si presenta come due isoenzimi, MAO-A e MAO-B, che svolgono un ruolo importante nel sistema nervoso centrale (SNC) e negli organi periferici. MAO-B è coinvolto in malattie neurodegenerative e MAO-A in condizioni psichiatriche e depressione. Gli inibitori delle MAO-B sono utili come neuroprotettori, mentre gli inibitori delle MAO-A sono antidepressivi efficaci anche se il loro uso può innescare reazioni avverse (ad esempio, crisi ipertensive con alimenti contenenti tiramina) . D’altra parte, l’ossidazione delle ammine biogeniche e dei neurotrasmettitori da parte degli enzimi MAO genera perossido di idrogeno (H2O2), radicali dell’ossigeno e aldeidi, che sono fattori di rischio per la lesione ossidativa cellulare. Di conseguenza, l’inibizione di MAO può provocare la protezione contro lo sforzo ossidativo e le neurotossine . Recenti indagini hanno sottolineato che gli estratti vegetali e alimentari possono inibire gli enzimi MAO con conseguente effetti biologici di cui sopra . D’altra parte, come risultato dell’inibizione delle MAO, questi prodotti potrebbero essere coinvolti in interazioni indesiderabili con altri preparati a base di erbe, alimenti o farmaci .

Hypericum perforatum L. (famiglia Hypericaceae) (erba di San Giovanni) è ampiamente usato per scopi sanitari e i loro prodotti sono disponibili in commercio come erbe, nutraceutici, tè, tinture, succhi, macerati oleosi, fitofarmaci e additivi alimentari e integratori . H. perforatum è popolare per il trattamento della depressione lieve e moderata . Può innescare interazioni farmacologiche avverse con altre erbe, droghe o alimenti . La sua capacità di alleviare e migliorare i disturbi dell’umore e la depressione è attribuita a composti attivi che presentano proprietà antidepressive . Il meccanismo d’azione più accettato è l’inibizione della ricaptazione della monoamina, ma possono essere coinvolti meccanismi aggiuntivi tra cui l’inibizione della monoamino ossidasi e gli effetti sinergici . Peganum harmala (famiglia Zygophyllaceae) e Lepidium meyenii (famiglia Brassicaceae) (maca) sono piante con effetti sul SNC e potenziali azioni antidepressive . P. harmala, originario della regione mediterranea e dell’Asia ed esteso alle aree del Nord America, è usato come rimedio sanitario multiuso, compresi i disturbi del SNC. I preparati di questa pianta possono innescare interazioni farmacologiche avverse . L. meyenii è una pianta commestibile delle Ande centrali le cui radici sono utilizzate come energizzante alimentare e nutraceutico per migliorare le condizioni fisiche e mentali e la fertilità . Lo scopo di questo lavoro era di studiare l’inibizione di umani MAO-A, da estratti di H. perforatum, P. harmala, e L. meyenii (maca) nonché dai componenti attivi che sono stati identificati e analizzati mediante HPLC-DAD-MS e, successivamente, valutare l’attività antiossidante che è specificamente associata con l’inibizione della MAO. Questa specifica attività antiossidante è determinata per la prima volta negli estratti vegetali.

2. Materiali e metodi

Hypericum perforatum L. le piante raccolte a Ciudad Real (Spagna) sono state essiccate e separate in parti: fiori; top porzioni aeree della pianta compresi ramificati steli e foglie, ma senza fiori; e steli principali (centrale e inferiore) e radici. Sono stati macinati e la polvere utilizzata per la preparazione del campione. Erbe commerciali e integratori a base di erbe (capsule e compresse) di H. perforatum sono stati acquistati anche nelle erboristerie locali. Peganum harmala L. pianta e semi sono stati raccolti a Toledo (Spagna). Lepidium meyenii (maca) sia come polvere che come compresse commerciali sono state ottenute dal Perù e dai negozi locali. Hypericin standard (>95% purity by HPLC) from HWI Analytik GMBH pharma solutions, hyperforin dicyclohexylammonium salt, quercetin, harmaline, harmine, catalase, clorgyline, 3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine (TMB), and horseradish peroxidase (HRP) type II were purchased from Sigma-Aldrich.

2.1. Sample Preparation of Plant Extracts

Samples containing H. perforatum (i.e., plant parts, herbal preparation, capsules, or tablets) (500 mg) were homogenized in 10 mL of water/methanol (1 : 1) utilizzando un omogeneizzatore Ultra Turrax, centrifugato a 10000 giri / min per 10 min, e il surnatante è stato raccolto. Il processo è stato ripetuto due volte con il residuo e le tre frazioni surnatanti raccolte, mescolate e analizzate da HPLC come indicato di seguito. Dopo tre estrazioni consecutive, i recuperi di ipericina e pseudoipericina erano superiori al 97%. Campioni di semi di L. meyenii (maca) (500 mg) e P. harmala (500 mg) sono stati omogeneizzati, rispettivamente, in 10 ml di acqua / metanolo (1 : 1) o 10 ml di acido perclorico 0,6 M : metanolo (1 : 1) utilizzando un omogeneizzatore Ultra Turrax, centrifugato a 10000 giri / min per 10 min, e il surnatante è stato raccolto. Questo processo è stato ripetuto due volte con il residuo e i supernatanti raccolti sono stati miscelati e analizzati da HPLC come indicato di seguito.

2.2. RP-HPLC Analisi di estratti vegetali

L’analisi di estratti di H. perforatum è stata eseguita da RP-HPLC con array di diodi UV e rilevamento di fluorescenza utilizzando un HPLC 1050 (Agilent) accoppiato con un rilevatore di array di diodi 1100 (DAD) (Agilent) e un rilevatore di fluorescenza 1046A. Un 150 3.9 mm id., 4 µm, la colonna Nova-pak C18 (Acque) è stata utilizzata per la separazione. Le condizioni cromatografiche erano 50 mm di tampone di fosfato di ammonio (pH 3) (tampone A) e 20% di A in acetonitrile (tampone B). Il gradiente è stato programmato da 0% (100% A) a 32% B in 8 min e 100% B a 10 min. La portata era di 1 mL / min, la temperatura della colonna era di 40°C e il volume di iniezione era di 20 µL. Il rilevamento delle ipericine è stato effettuato mediante assorbanza a 590 nm e fluorescenza a 236 nm per l’eccitazione e 592 nm per l’emissione. La concentrazione di ipericina è stata determinata da una curva di risposta di calibrazione (assorbanza a 590 nm) rispetto alla concentrazione con soluzioni prodotte in laboratorio da ipericina standard. Lo stesso fattore di risposta è stato applicato a pseudoipericina, protoipericina e protopseudoipericina. I flavonoidi e i glicosidi flavonoidi sono stati analizzati a 265 nm e 355 nm e la concentrazione di quercetina è stata determinata a 355 nm da una curva di calibrazione della risposta rispetto alla concentrazione. La frazione HPLC corrispondente a flavonoidi e glicosidi flavonoidi (da 7 a 11 min) è stata raccolta mediante iniezioni successive di estratto di H. perforatum (erbe) e, dopo evaporazione sotto vuoto, disciolta in metanolo al 30% e utilizzata per l’inibizione delle MAO-A. I phloroglucinols (hyperforin, adhyperforin, hyperfirin e adhyperfirin) sono stati analizzati a 280 nanometro usando la stessa colonna (Nova-pak C18) e le circostanze ma nell’eluizione isocratica con 20% del tampone del fosfato di ammonio di 50 millimetri, pH 3 e 80% di acetonitrile. La concentrazione di questi composti è stata determinata da una curva di calibrazione dello standard hyperforin. L’analisi degli alcaloidi β-carboline in P. harmala e L. meyenii è stata effettuata come descritto in precedenza .

2.3. Identificazione mediante spettrometria di massa HPLC-ESI

L’identificazione dei composti negli estratti di H. perforatum è stata effettuata mediante HPLC-MS (electrospray-negative ion mode) utilizzando un HPLC-DAD della serie 1200 accoppiato a un quadrupolo-MS 6110 (Agilent). La separazione cromatografica è stata eseguita su una colonna Zorbax SB-C18 (5 µm) da 150 mm i.d. (Agilent Technologies). Le condizioni cromatografiche sono state eluente A: acido formico (0.1%); B: acido formico (0.1%) in acetonitrile; pendenza: 0% a 70% B in 8 min e 100% B a 10 min, portata: 0.3 mL/min : 40°C, intervallo di massa: 50-700 u, e cono di tensione: 150 V. Per l’identificazione di phloroglucinols (ad esempio, iperforina), la separazione è stato fatto utilizzando una Nova-pak C18 (4 µm) colonna con lo stesso eluents e eluizione isocratica (eluente A, del 20% e l’eluente B, l ‘ 80%) con una portata di 0,7 mL/min e spettri di massa registrata in negativo e in positivo di ionizzazione. L’identificazione dei composti è stata effettuata sulla base di spettri di massa, spettri UV-vis (DAD) di picchi cromatografici e coeluzione con gli standard. le β-carboline in P. harmala e L. meyenii sono state identificate come precedentemente descritto .

2.4. I saggi di inibizione della monoamino ossidasi (MAO-A)

sono stati eseguiti come altrove . In breve, le frazioni proteiche di membrana contenenti MAO-A (BD-Gentest) sono state diluite alle concentrazioni desiderate in tampone fosfato di potassio da 100 mm (pH 7,4). Una miscela di reazione da 0,2 ml contenente 0,01 mg/ml di proteine e 0.25 mm di chinuramina in 100 mm di fosfato di potassio (pH 7,4) sono stati incubati a 37°C per 40 min. Dopo l’incubazione, la reazione è stata interrotta dall’aggiunta di 2 N NaOH (75 µL), seguita dall’aggiunta del 70% di HClO4 (25 µL) e il campione è stato centrifugato (10000) per 10 min. Il surnatante (20 µL) è stato iniettato nell’HPLC e nel prodotto di deaminazione della chinuramina (cioè 4-idrossichinolina) formato durante la reazione enzimatica determinata dal rilevamento dell’array di diodi RP-HPLC a 320 nm. È stata costruita una curva di risposta dell’area rispetto alla concentrazione per calcolare la concentrazione di 4-idrossichinolina. Per eseguire saggi di inibizione MAO, le aliquote di estratti di piante o preparazioni commerciali o invece composti puri sono convenientemente diluito e aggiunto alla miscela di reazione contenente kynuramine (0,25 mM) e MAO-A (0,01 mg/mL di proteina) in 100 mM di potassio tampone fosfato (pH 7,4), con reazione enzimatica e analisi effettuata come sopra, e confrontati con i corrispondenti controlli contenenti solventi. L’inibitore standard clorgyline è stato utilizzato come controllo positivo per l’inibizione (inibizione>90% a 2,5 µM). Le incubazioni sono state effettuate almeno in duplicato da diversi esperimenti e i valori di IC50 sono stati calcolati utilizzando GraphPad Prism 4.0.

2.5. Determinazione dell’attività antiossidante associata all’inibizione della monoamino ossidasi (MAO)

Saggi (0,2 mL) di miscele di reazione in tampone fosfato di potassio da 70 mm (pH 7,4), contenenti 0,025 mg/mL di proteina MAO-A e 0,25 mM di chinuramina, sono stati incubati a 37°C per 40 min in assenza (saggi di controllo) o in presenza di estratti vegetali. I saggi MAO sono stati eseguiti anche in presenza di clorgilina (25 µM), un inibitore classico di MAO-A (controllo positivo dell’inibizione) o enzima catalasi (100 µg/mL). Dopo il periodo di incubazione, la miscela di reazione è stata aggiunta con carbone attivo (3,5 mg), miscelata e filtrata (0,45 µm). La soluzione è stata aggiunta con 20 µL di tetrametilbenzidina (TMB) da 10 mm in DMSO al 40% e 20 µL di perossidasi di rafano (HRP) di tipo II (1 mg/mL), mantenuta per 5 min e aggiunta con 0,3 mL di soluzione H2SO4 da 0,5 M. L’assorbanza a 450 nm è stata misurata per determinare la diimina TMB, un prodotto giallo risultante dall’ossidazione del TMB da parte di HRP e dell’H2O2 generato nella deaminazione ossidativa catalizzata da MAO. L’ossidazione di TMB alla presenza di inibitori di MAO è stata confrontata con i controlli corrispondenti senza inibitori e gli spazi vuoti appropriati hanno mostrato l’assenza di interferenze.

3. Risultati e discussione

Le preparazioni commerciali di H. perforatum hanno inibito MAO-A umano con potenza simile: valori IC50 di 142,3 ± 30.6 µg / mL (preparazione a base di erbe), 193 ± 61 µg / mL (capsule) e 173 ± 29 µg / mL (compresse) (Figura 1 (a)). Per quanto riguarda le piante, gli estratti di H. perforatum dai fiori hanno offerto la più alta inibizione (IC50 di 63,6 ± 9,4 µg / mL) seguita da steli e foglie aeree (IC50 143,6 ± 16,5 µg/mL) e il più basso negli estratti di radice (Figura 1(b)). Estratti dalle parti aeree di H. perforatum sono stati analizzati da HPLC-DAD-ESI (elettrospray-ionizzazione negativa). Hanno mostrato la presenza di due naftodiantroni principali identificati come pseudoipericina e ipericina(Figura 2 (a) e Tabella 1). Gli estratti di fiori avevano due composti aggiuntivi identificati come protopseudoipericina e protoipericina. Fenolici e flavonoidi abbondavano negli estratti di H. perforatum(Figura 2 (b)). L’acido clorogenico e i glicosidi di quercetina rutina, iperoside, isoquercitrina, miquelianina, acetil iperoside e quercitrina, così come la quercetina libera e la biapigenina, sono stati identificati da HPLC-DAD (ESI ionizzazione negativa) e DAD (Tabella 1). D’altra parte, gli estratti di fiori contenevano quattro floroglucinoli (Figura 2(c)) che sono stati identificati da HPLC-DAD-MS (ESI negative and positive ionization) e DAD come hyperforin, adhyperforin, hyperfirin e adhyperfirin (Tabella 1). La presenza di questi composti (Figura 3) nella pianta concorda con altri risultati . Il contenuto dei componenti principali è stato determinato dall’HPLC (Tabella 2). La concentrazione di pseudoipericina era superiore all’ipericina, mentre protopseudoipericina e protoipericina erano composti minori (0,4 µg/mg di protopseudoipericina e 0.17 µg/mg di protoipericina sono stati rilevati nei fiori). Nella pianta, il più alto contenuto di ipericine è stato trovato nei fiori con livelli significativamente bassi rilevati negli steli e assenza nelle radici. L’iperforina era molto abbondante nei fiori (27,2 µg/mg), mentre la concentrazione nelle preparazioni commerciali variava da 0,36 a 2,4 µg/mg. Nei fiori apparivano anche adhyperforin (1,4 ± 0,07 µg/mg), iperfirina (4,2 ± 0,02 µg/mg) e adhyperfirin (0,46 ± 0,02 µg/mg). I flavonoidi abbondavano in H. perforatum e la maggior parte di loro erano glicosidi di quercetina (Figura 2(b)) la cui presenza era significativamente più alta nei fiori che in altre parti della pianta. Il contenuto di quercetina libera nei fiori era di 2,0 µg / mg, mentre un contenuto di 6,7 µg / mg è stato determinato in preparazioni commerciali.

(a)

(b)

(a)
(b)

Figura 1

Inibizione dell’umano monoamino ossidasi A (MAO-A) da estratti di preparazioni commerciali di H. perforatum (a) (capsule, ■; compresse, ▲; erbe,▼), ed estratti da diverse parti della pianta (b) (fiori,∆; top steli,◊; principale steli (centrale),×; radici,○). Le differenze significative () tra gli estratti a una concentrazione selezionata sono indicate con lettere diverse.

(a) nm

(b) nm

(c) nm

(a) nm
(b) nm
(c) nm

Figure 2

HPLC chromatograms of extracts from H. perforatum flowers. (a) Detection of hypericins at 590 nm. 1: protopseudohypericin; 2: pseudohypericin; 3: protohypericin; and 4: hypericin. (b) Detection of phenols and flavonoids at 265 nm. 1: chlorogenic acid; 2: rutin; 3: hyperoside; 4: isoquercitrin; 5: miquelianin; 6: acetil hyperoside; 7: quercitrin; 8: quercetina; e 9: biapigenin. c) Individuazione dei floroglucinoli a 280 nm. 1: hyperfirin, 2: adhyperfirin; 3: hyperforin; e 4: adhyperforin.

Figura 3

Strutture di composti identificati in H. perforatum: ipericine, quercetina e quercetina flavonoidi e floroglucinoli (iperforina, adhyperforina, iperfirina e adhyperfirina).

L’inibizione di MAO-A da parte di H. gli estratti di perforatum indicano l’insorgenza di inibitori. Ipericine, iperforine e flavonoidi sono possibili contributori a questa inibizione e sono stati valutati come inibitori (Figura 4). L’ipericina ha inibito MAO – A (IC50 di 35,5 ± 2,1 µM o 17,9 µg/mL) (Figura 4 (a)). Dalla concentrazione nella Tabella 2, l’ipericina è un debole contributore all’inibizione delle MAO negli estratti di H. perforatum. Infatti, il contenuto calcolato di ipericina al valore IC50 nei saggi di estratto di fiori (cioè 63,6 µg/mL) era 0,1 µg/mL che è basso rispetto a IC50 di ipericina (17,9 µg/mL). L’iperforina non ha inibito MAO-A (Figura 4(b)). La quercetina ha inibito MAO-A umano (Figura 4(b)) con un valore IC50 di 11,1 ± 0,8 µM (cioè 3,36 µg/mL). Quindi, la quercetina era un inibitore migliore dell’ipericina anche se la sua potenza era ancora bassa per spiegare l’intera inibizione degli estratti. Pertanto, il contenuto calcolato di quercetina a IC50 nei saggi di estratto di fiori era 0,13 µg/mL che è inferiore all’IC50 di quercetina (3,4 µg/mL). Quando la frazione corrispondente ai glicosidi e ai flavonoidi della quercetina (7-11 min, Figura 2(b)) è stata raccolta da RP-HPLC, ha inibito MAO-A (inibizione del 90% a 700 µg/ml di estratto) indicando un contributo di questi composti all’inibizione delle MAO in H. perforatum, probabilmente per effetto additivo. Quindi, l’inibizione di MAO-A potrebbe derivare da componenti come quercetina e flavonoidi correlati (cioè glicosidi di quercetina) che sono abbondanti nella pianta. Inoltre, i composti minori non identificati qui potrebbero anche contribuire all’inibizione delle MAO poiché i composti principali nella Tabella 2 non spiegano l’intera inibizione.

(a)

(b)

(a)
(b)

Figura 4

Inibizione dell’umano monoamino ossidasi A (MAO-A) dai componenti attivi di H. perforatum: ipericina (a) e quercetina (■) e iperforina (▲) (b).

Estratti da semi di P. harmala altamente inibiti umani MAO-A(Figura 5 (a)) che offrono un valore IC50 di 49,9 ± 5,6 µg/L. L’analisi cromatografica ha indicato che l’inibizione era dovuta alla presenza degli alcaloidi β-carboline, harmaline e harmine, che sono stati identificati da HPLC-DAD-MS (Figura 5(c)). Il contenuto di questi alcaloidi determinati nei semi era 48,5 mg / g per harmaline e 40,0 mg/g per harmine (questo significa 2,4 ng/mL e 2,0 ng/mL, risp., in saggi all’IC50). Pertanto, la potenza di inibizione di MAO-A da parte dei semi di P. harmala era 1274 volte più potente di quella dei fiori di H. perforatum. Come mostrato nella Figura 5 (b), gli estratti di radice di Lepidium meyenii non inibiscono le MAO-A. L. umane. meyenii (maca) è una pianta popolare degli altopiani delle Ande le cui radici sono sempre più utilizzate per le sue proprietà nutrizionali e medicinali come energizzanti e per migliorare l’umore e le prestazioni sessuali . Rapporti precedenti hanno indicato che contengono alcaloidi tra cui β-carboline che potrebbero inibire MAO. L’analisi degli estratti per alcaloidi β-carboline ha dato 25 µg/g (polvere di maca) e 11,7 µg / g (capsule) di acido 1-metil-1,2,3,4-tetraidro-β-carboline-3-carbossilico come composto principale. Questa specifica β-carbolina non è un inibitore di MAO-A .

(a)

(b)

(c)

(a)
(b)
(c)

Figura 5

Inibizione dell’umano monoamino ossidasi A (MAO-A) da P. harmala seme (a) e L. meyenii (radice di maca) estratti (b) (capsule, ▼ e polvere, ■). (c) Cromatogramma di HPLC dell’estratto del seme di P. harmala che potentemente ha inibito la rilevazione umana di MAO-A. Absorbance a 254 nanometro. I composti identificati sono harmaline (m/z a 215 (M + H)+, a 375 nm) e harmine (m / z a 213 (M + H)+, a 245 e 322 nm).

MAO genera perossido di idrogeno (H2O2) che è coinvolto nel danno ossidativo cellulare e condizioni patologiche . Poi, l’inibizione di MAO può provocare le azioni antiossidanti specifiche . Al fine di studiare l’attività antiossidante associata all’inibizione delle MAO, sono stati progettati esperimenti in questa ricerca che collegavano l’attività delle MAO-A con l’ossidazione della tetrametilbenzidina (TMB) da parte della perossidasi di rafano (HRP) e dell’H2O2 prodotto durante la deaminazione ossidativa catalizzata dalle MAO (Figura 6). Gli estratti di H. perforatum e P. harmala che hanno inibito MAO-A come indicato sopra altamente hanno diminuito l’ossidazione di TMB. Al contrario, gli estratti di radice di L. meyenii (maca) che non inibivano MAO avevano una bassa attività antiossidante in questo test. Clorgyline che è un inibitore potente di MAO-A altamente ha diminuito l’ossidazione di TMB una volta usato come controllo. Lo stesso è accaduto con la presenza di catalasi nei media che rimuove H2O2 generato da MAO-A. Pertanto, questi risultati indicano che gli estratti di H. perforatum e P. harmala hanno permesso azioni antiossidanti specifiche associate a una minore produzione di H2O2 mediante inibizione di MAO.

Figura 6

attività Antiossidante associato con l’inibizione MAO in dosaggi di accoppiamento attività delle MAO-A, con la successiva ossidazione di tetrametilbenzidina (TMB) in presenza di H2O2 generato la reazione di MAO, e perossidasi di rafano (HRP). Il grafico mostra l’ossidazione del TMB a diimina (assorbanza a 450 nm) nei test di controllo (100%) e in presenza di H. perforatum (estratti di erbe e fiori, 800 µg / mL), estratti di semi di P. harmala (0,8 µg/mL), L. estratti di radice di meyenii (maca) (800 µg/mL), clorgilina (un inibitore standard di MAO-A) (25 µM) e catalasi (100 µg/mL). differenze () rispetto ai controlli.

H. perforatum migliora i disturbi dell’umore e la depressione . Come mostrato qui, contiene composti come iperforina, ipericine e flavonoidi responsabili degli effetti antidepressivi (Figura 2 e Tabella 2). Tuttavia, il meccanismo specifico per l’azione antidepressiva non è completamente compreso. Il meccanismo più accettato è l’inibizione della ricaptazione della monoammina . Tuttavia, alcuni studi suggeriscono una combinazione di meccanismi ed effetti sinergici . P. harmala esercita numerose azioni biologiche e farmacologiche. I loro semi sono sempre più utilizzati per scopi ricreativi a causa dei loro effetti psicoattivi e neuroattivi . L’inibizione della MAO-A umana è un meccanismo stabilito per l’azione antidepressiva . Entrambi gli inibitori irreversibili e reversibili di MAO-A (ad esempio, fenelzina e moclobemide) sono usati con successo come antidepressivi. In questo studio, gli estratti di H. perforatum hanno inibito l’uomo MAO-A. Tuttavia, questa inibizione è stata moderata. Era più di mille volte inferiore a quello degli estratti di semi di P. harmala. Sacher et al. hanno riferito che l’occupazione dei siti MAO-A nel cervello umano determinata dall’imaging PET con legame 11C-harmina (cioè la stessa β-carbolina responsabile dell’inibizione MAO in P. harmala) era elevata per un inibitore reversibile di MAO come moclobemide ma bassa per l’estratto di H. perforatum (erba di San Giovanni) . Ciò significa che gli inibitori di MAO-A in H. perforatum non legano efficientemente ai siti attivi di MAO-A nel cervello contrariamente all’harmina della β-carbolina. Gli inibitori di MAO – A in H. i perforatum sono flavonoidi come la quercetina e i loro glicosidi e i livelli di questi composti che raggiungono il cervello potrebbero non essere sufficienti per occupare i siti di MAO-A nel cervello e inibire l’enzima . Al contrario, gli inibitori di P. harmala sono alcaloidi β-carboline tra cui harmine e harmaline che hanno un’ottima penetrazione del cervello, si legano con elevata affinità ai siti MAO e presentano effetti antidepressivi . Pertanto, P. harmala potrebbe permettersi effetti antidepressivi mediante inibizione MAO. A questo proposito, potrebbe essere interessante studiare gli effetti antidepressivi di H. perforatum e P. harmala da soli e in combinazione in quanto hanno diversi meccanismi d’azione.

L’inibizione di MAO-A da parte degli estratti di H. perforatum e P. harmala può contribuire ad altri effetti biologici di queste piante come azioni antiossidanti e reazioni farmacologiche avverse. Gli estratti di queste piante esercitano effetti neuroprotettivi e antinfiammatori che sono stati correlati all’attività antiossidante . A questo proposito, utilizzando una nuova procedura, risultati in questo lavoro hanno evidenziato che H. perforatum e P. gli estratti di harmala mostrano attività antiossidante associata all’inibizione di MAO (produzione inferiore di H2O2). D’altra parte, una delle principali limitazioni all’uso di queste piante è il loro potenziale per la produzione di interazioni avverse con altre erbe, alimenti e farmaci . L’inibizione di MAO-A può innescare effetti avversi in determinate circostanze .

4. Conclusioni

Gli estratti da H. perforatum inibivano le MAO-A umane e gli estratti dai fiori erano gli inibitori più potenti. Sono stati studiati da HPLC-DAD-MS e contenevano pseudoipericina, ipericina, iperforina, adhyperforina, iperfirina e flavonoidi. Il più alto contenuto di questi composti è apparso nei fiori. L’ipericina era un debole inibitore delle MAO-A; l’iperforina non inibiva l’enzima e la quercetina era un inibitore moderato. La frazione di glicosidi e flavonoidi della quercetina ha contribuito all’inibizione delle MAO. Estratti di semi di P. harmala altamente inibiti MAO-A e la sua potenza di inibizione era più di mille volte superiore agli estratti di H. perforatum grazie al suo contenuto in alcaloidi harmaline e harmine. L. gli estratti della radice di meyenii (maca) non hanno inibito MAO-A. L’inibizione di MAO-A non può spiegare gli effetti interi del SNC attribuiti a H. perforatum ma si pensa che contribuisca a queste azioni in P. harmala. Queste piante esercitano effetti antiossidanti. Utilizzando un nuovo metodo questo lavoro ha evidenziato che gli estratti di P. harmala e H. perforatum presentano attività antiossidante associata all’inibizione delle MAO.

Conflitti di interesse

Gli autori non dichiarano alcun interesse finanziario concorrente.

Ringraziamenti

Gli autori sono grati a MINECO-FEDER (SAF2015-66690-R e SAF2015-68580-C2-R) e CSIC (Spagna) (Progetto 200470E658) per aver sostenuto questo lavoro. Gli autori sono grati anche a Marta Aguilar Preiss per l’assistenza tecnica e al Dr. V. Arán per aver aiutato con l’identificazione e la selezione delle piante.