Merknader basert på informasjon i ‘Grunnleggende praktisk mikrobiologi’ © Samfunn For Generell Mikrobiologi.
Se Aseptiske teknikker før du starter dette eller andre mikrobiologiske praktiske arbeid.
i en helleplate tilsettes en liten mengde inokulum fra en kjøttkultur med pipette til Midten av En Petriskål. Kjølt, men fortsatt smeltet, agarmedium i et reagensrør eller en flaske helles deretter I Petriskålen. Skålen roteres deretter forsiktig, eller flyttes frem og tilbake (først N-S, deretter NW-SE, deretter NE-SW), for å sikre at kulturen og mediet blandes grundig og mediet dekker platen jevnt.
Helleplater tillater mikroorganismer å vokse både på overflaten og i mediet. De fleste koloniene vokser innenfor mediet og er små i størrelse og kan være sammenflettede. De få koloniene som vokser på overflaten er av samme størrelse og utseende som de på en strekplate.
disse platene kan da brukes til å teste de antimikrobielle effektene av forskjellige stoffer. For mer informasjon Se Undersøke antimikrobiell virkning.
ellers kan plater som dette være en del av undersøkelsen av bakteriepopulasjonen i en prøve. Dyrking av serielle fortynninger på denne måten tillater en beregning av populasjonsstørrelsen til en bakterieprøve. Hvis fortynning og volum av inokulum, vanligvis 1 cm3, er kjent, kan det levedyktige antallet av prøven per cm3 bestemmes. Den levedyktige tellingen er antall bakterier eller klumper av bakterier per cm3. Fortynninger valgt må produsere mellom 30 og 100 separate tellbare kolonier. (Se Også Standard teknikk: Gjør serielle fortynninger)
Helse & sikkerhets-og Tekniske merknader
1 Bruk et vannbad ved 50 °C for å lagre flasker smeltet agar.
2 Pass på at du ikke forurenser smeltet agar i flasker med vann fra vannbadet. For å unngå kontaminering:
i at vannet i vannbadet er på riktig dybde
ii at flaskene holdes oppreist
iii at utsiden av flaskene tørkes før de brukes.
3 i en jevnt fordelt pour plate, må bunnen av platen være dekket, agar må ikke berøre lokket på platen og overflaten må være glatt uten bobler.
4 CLEAPSS Laboratory handbook section 15.2.12 foreslår noen alternative metoder for å lage en pour plate, og vurderer deres fordeler og ulemper.
Prosedyre
Inokulering Med En Pasteur-pipette
hold pipetten så stille som mulig Til enhver tid.
A Løsne hetten / bomullsullpluggen på flasken som inneholder inokulumet.
B Fjern den sterile Pasteur-pipetten fra beholderen, fest smokken og hold den i høyre hånd.
C Løft flasken / reagensrøret som inneholder inokulumet med venstre hånd.
D Fjern hetten / bomullsullpluggen med pekefingeren på høyre hånd.
E Flamme flasken / reagensrøret halsen.
F Klem smokkpæren på pipetten svært lett. Sett pipetten i flasken / reagensrøret og trekk opp det nødvendige volumet av kulturen. Ikke klem smokkpæren på pipetten etter at den er i suppen, da dette kan forårsake bobler og eventuelt aerosoler.
G Fjern pipetten og flamme halsen på flasken/ reagensrøret igjen. Sett på hetten / bomullsullpluggen.
H Plasser flasken / reagensrøret på benken eller i stativet.
Inokulering Av Petriskålen
A Løft lokket på Petriskålen litt med høyre hånd og sett pipetten inn I Petriskålen. Slipp forsiktig det nødvendige volumet av inokulum på midten av fatet. Sett på lokket igjen.
B Sett pipetten i en kastekanne.
Helling av platen
A Samle en flaske steril smeltet agar fra vannbadet (note 1 og 2).
B Hold flasken i høyre hånd. Fjern hetten med fingeren på venstre hånd.
c Flamme halsen på flasken.
D Løft lokket på Petriskålen litt med venstre hånd og hell den sterile smeltede agaren i Petriskålen. Sett på lokket igjen.
E Flammer flaskehalsen og setter korken på igjen.
f Flytt fatet forsiktig for å blande kulturen og mediet grundig og for å sikre at mediet dekker platen jevnt (note 3). Flytt fatet i tre retninger: først N-S, DERETTER NW-SE, deretter NE-SW, eller roter det til mediet og inokulumet er godt blandet og dekk bunnen av fatet.
g La platen stivne.
H Tape platen lukket og ruge i en omvendt posisjon.
web links
Mikrobiologi lærerressurser
Society For General Microbiology-kilde Til Grunnleggende Praktisk Mikrobiologi, en utmerket manual for laboratorieteknikker og Praktisk Mikrobiologi For Videregående Skoler, et utvalg av utprøvde og testede praksiser ved hjelp av mikroorganismer.
Microbiology online
MiSAC (Microbiology in Schools Advisory Committee) støttes av Society For General Microbiology (se ovenfor) og deres nettsteder inkluderer mer sikkerhetsinformasjon og en lenke for å be om råd via e-post.
(Nettsteder åpnet oktober 2011)