notatki oparte na informacjach w „Basic practical microbiology” © Society for General Microbiology.
zapoznaj się z technikami aseptycznymi przed rozpoczęciem tej lub innej praktycznej pracy z mikrobiologią.
w płytce wlewowej niewielką ilość inokulum z hodowli bulionu dodaje się pipetą do środka szalki Petriego. Schłodzone, ale wciąż stopione podłoże agarowe w probówce lub butelce wlewa się do szalki Petriego. Następnie naczynie obraca się delikatnie lub przesuwa się tam iz powrotem (najpierw N-S, następnie NW-SE, następnie NE-SW), aby upewnić się, że kultura i pożywka są dokładnie wymieszane i pożywka równomiernie pokrywa talerz.
płytki wylewne pozwalają mikroorganizmom rosnąć zarówno na powierzchni, jak i wewnątrz podłoża. Większość Kolonii rośnie w średniej wielkości i ma niewielkie rozmiary i może być zbiegiem. Nieliczne kolonie, które rosną na powierzchni są tej samej wielkości i wyglądu, co te na płytce Smugowej.
płytki te można następnie wykorzystać do badania działania antybakteryjnego różnych substancji. Aby uzyskać więcej informacji, patrz badanie działania przeciwdrobnoustrojowego.
w przeciwnym razie takie płytki mogłyby być częścią badania populacji bakterii w próbce. Hodowanie seryjnych rozcieńczeń w ten sposób pozwala na obliczenie wielkości populacji próbki bakterii. Jeżeli znane jest rozcieńczenie i objętość inokulum, zwykle 1 cm3, można określić żywotną liczbę próbki na cm3. Liczba żywotna to liczba bakterii lub grudek bakterii na cm3. Wybrane rozcieńczenia muszą wytworzyć od 30 do 100 oddzielnych policzalnych Kolonii. (Patrz również technika Standardowa: Dokonywanie seryjnych rozcieńczeń)
Zdrowie & Bezpieczeństwo i uwagi techniczne
1 Użyj łaźni wodnej w temperaturze 50 °C do przechowywania butelek ze stopionym agarem.
2 uważaj, aby nie zanieczyścić stopionego agaru w butelkach wodą z łaźni wodnej. Aby uniknąć zanieczyszczenia upewnij się, że:
i że woda w łaźni wodnej znajduje się na właściwej głębokości
ii że butelki są utrzymywane w pozycji pionowej
iii że zewnętrzne części butelek są wycierane przed ich użyciem.
3 w równomiernie rozłożonej płycie wlewowej podstawa płyty musi być pokryta, agar nie może dotykać pokrywy płyty, a powierzchnia musi być gładka bez pęcherzyków.
4 Podręcznik laboratorium CLEAPSS sekcja 15.2.12 sugeruje alternatywne metody wytwarzania płytki przelewowej i rozważa ich zalety i wady.
procedura
szczepienie za pomocą pipety Pasteura
przez cały czas trzymaj pipetę tak nieruchomo, jak to możliwe.
poluzować zakrętkę/ korek z waty butelki zawierającej inokulum.
B wyjąć sterylną pipetę Pasteura z pojemnika, założyć Smoczek i trzymać w prawej ręce.
C lewą ręką podnieść butelkę/ probówkę zawierającą inokulum.
D zdjąć nasadkę/ zatyczkę z waty małym palcem prawej ręki.
e Płomień szyjki butelki / probówki.
F bardzo lekko ściśnij bańkę strzykową pipety. Umieścić pipetę w butelce / probówce i pobrać wymaganą objętość Kultury. Nie należy ściskać bańki strzykowej pipety po tym, jak znajduje się ona w bulionie, ponieważ może to spowodować pęcherzyki i ewentualnie aerozole.
G Wyjąć pipetę i ponownie spalić szyjkę butelki / probówki. Wymień zatyczkę z wacikiem.
H umieść butelkę / probówkę na ławce lub w stojaku.
zaszczepienie płytki Petriego
A lekko podnieść pokrywkę płytki Petriego prawą ręką i włożyć pipetę do płytki Petriego. Delikatnie uwolnij wymaganą objętość inokulum na środek naczynia. Wymień pokrywę.
B umieścić pipetę w pojemniku na odpady.
wylanie płytki
a zebrać butelkę sterylnego stopionego agaru z łaźni wodnej (Uwaga 1 i 2).
B trzymaj butelkę w prawej ręce. Zdjąć nasadkę małym palcem lewej ręki.
C Płomień szyjki butelki.
D lekko podnieść pokrywę szalki Petriego lewą ręką i wlać sterylny stopiony agar do szalki Petriego. Wymień pokrywę.
e wypalić szyjkę butelki i założyć nakrętkę.
f delikatnie przesunąć naczynie, aby dokładnie wymieszać kulturę z pożywką i upewnić się, że pożywka równomiernie pokrywa talerz (Uwaga 3). Albo przesuń naczynie w trzech kierunkach: najpierw N-S, potem NW-SE, potem NE-SW, albo obracaj, aż pożywka i inokulum zostaną dobrze wymieszane i przykryją podstawę naczynia.
G pozwól, aby Płyta się zestaliła.
H Taśma Płyta zamknięta i inkubować w pozycji odwróconej.
Web links
Microbiology teacher resources
Society for General Microbiology-source of Basic Practical Microbiology, Doskonały podręcznik technik laboratoryjnych i Mikrobiologii praktycznej dla szkół średnich, wybór sprawdzonych i przetestowanych ćwiczeń z wykorzystaniem mikroorganizmów.
Microbiology online
MiSAC (Microbiology in Schools Advisory Committee) jest wspierany przez Society for General Microbiology (patrz wyżej), a ich strony internetowe zawierają więcej informacji na temat bezpieczeństwa i link do poproszenia o poradę przez e-mail.