Agarosegelelektroforese af RNA

abstrakt

gelelektroforese er en af de vigtigste teknikker, der i øjeblikket er tilgængelige til fraktionering af RNA. Den eksperimentelle procedure er relativt enkel, men opnår ikke desto mindre meget reproducerbare resultater og høj opløsning. RNA er en polyanion og vil derfor migrere mod den positive elektrode i et elektrisk felt. Hvis migrationen sker gennem en gelmatrice med omhyggeligt valgt porestørrelse, mobiliteten af RNA-molekylerne er relateret til logaritmen af molekylvægten: de mindste molekyler bevæger den største afstand. Egnede gelmatricer til elektroforese af RNA er polyacrylamid eller agarose i form af stænger eller plader. Agarose foretrækkes generelt frem for acrylamid på grund af dets lette håndtering og lavere toksicitet, skønt acrylamid giver bedre opløsning af RNA med lille molekylvægt. Plader har en række fordele i forhold til stanggeler: de gør det muligt at fraktionere mange prøver under identiske betingelser, de kan let farves og fotograferes, og efter elektroforese kan nukleinsyrerne overføres til cellulosenitratpapir (Northern blotting) til hybridiseringsforsøg ved en procedure svarende til den, der er beskrevet i kapitel 5 (1).

You might also like

Skriv et svar

Din e-mailadresse vil ikke blive publiceret.