Electroforesis en gel de agarosa de ARN

Resumen

La electroforesis en gel es una de las técnicas más importantes actualmente disponibles para el fraccionamiento de ARN. El procedimiento experimental es relativamente simple, pero sin embargo logra resultados muy reproducibles y de alta resolución. El ARN es un polianión y, por lo tanto, migrará hacia el electrodo positivo en un campo eléctrico. Si la migración se produce a través de una matriz de gel de tamaño de poro cuidadosamente elegido, la movilidad de las moléculas de ARN está relacionada con el logaritmo de los pesos moleculares: las moléculas más pequeñas se mueven a mayor distancia. Las matrices de gel adecuadas para la electroforesis de ARN son poliacrilamida o agarosa en forma de barras o losas. La agarosa se prefiere generalmente a la acrilamida debido a su facilidad de manejo y menor toxicidad, aunque la acrilamida da una mejor resolución del ARN de pequeño peso molecular. Las losas tienen una serie de ventajas sobre los geles de varilla: permiten fraccionar muchas muestras en condiciones idénticas, se pueden teñir y fotografiar fácilmente y, tras la electroforesis, los ácidos nucleicos pueden transferirse al papel de nitrato de celulosa (Northern blotting) para experimentos de hibridación mediante un procedimiento similar al descrito en el capítulo 5 (1).

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