M13 Phagen Bibliothek Bau Service

Als unangefochtener Vorreiter und innovativer Entdecker auf dem Gebiet der Antikörperentwicklung und -herstellung hat Creative Biolabs eine breite Palette professioneller Dienstleistungen auf der Grundlage unserer exklusiven Phagen-Display-Technologien etabliert. Unter ihnen ist Creative Biolabs stolz auf unseren hervorragenden M13 Phage Library Construction Service, der qualitativ hochwertige Bibliotheken für unsere Kunden auf der ganzen Welt erstellen kann.

Phage Display wurde 1985 entwickelt und ist eine schnelle, zuverlässige und bequeme Methode zum Aufbau großer Peptidbibliotheken und bietet einen unkomplizierten Ansatz zur Isolierung und Vermehrung einzigartiger Klone mit gewünschten Eigenschaften durch hocheffizientes Biopanning. Diese Technologie trägt zu verschiedenen Forschungs-, medizinischen und industriellen Anwendungen bei, wie z. B. der Entdeckung und Entwicklung von Antikörpern, der Epitopkartierung, der Arzneimittelentwicklung, dem Impfstoffdesign und so weiter. Im Gegensatz zur herkömmlichen Hybridommethode hat die Phagenanzeige ihre außergewöhnliche Attraktivität auf dem Gebiet der Entdeckung monoklonaler Antikörper aufgrund der Eigenschaften einfacher Handhabung, hoher Effizienz, vielfältiger Auswahl an Wirtstieren und Unabhängigkeit von der Immunogenität unter Beweis gestellt.

Unter vielen Phagenfahrzeugen, die derzeit im Einsatz sind, war M13 filamentous Phage immer die beliebteste Option und wurde in verschiedenen Arten von Forschung eingesetzt. M13 ist einer der Bakteriophagen von E. coli mit einem typischen langen Stab Aussehen mit einem Einzelstrang DNA (6407 bp) Genom. Die Virushülle besteht aus fünf verschiedenen Kapsidproteinen, dem Hauptkapsid pVIII (2700 Kopien) und vier Nebenkapsiden (pIII und pVI an einem Ende, pVII und pIX am anderen Ende). Im Gegensatz zu T4 und T7 ist M13 ein lysogener Phage, der im Periplasma zusammengebaut und aus der Bakterienmembran ausgeschieden wird, ohne eine Wirtslyse zu verursachen.

Die multiplen Kapsidproteine von M13 bieten umfassende Anzeigemöglichkeiten, die zur Anzeige einer Vielzahl von Peptiden und Proteinen mit unterschiedlichen Eigenschaften verwendet werden können. Alle fünf Kapsiden haben erfolgreich ausländische Domänenbibliotheken ausgestellt, von denen jede einen eindeutigen Vektor für verschiedene Funktionen darstellt. In den meisten Fällen sind pIII und pVIII jedoch die bevorzugte Wahl für die M13-Phagenanzeige.

• pVIII-Fusionsanzeige: Als Hauptkapsid mit 2700 Kopien pro Phage umhüllt pVIII das Viruspartikel als stachelige Vorsprünge. N-terminale Fusionen zu pVIII ermöglichen die Anzeige kurzer Peptide mit hoher Dichte von weniger als 9 Aminosäuren, da große Insertionen die Phagenanordnung unterbrechen können. Die pVIII-Anzeige wird empfohlen, wenn massive Anzeigekopien erforderlich sind, z. B. Aviditätsbewertung, Protein-Protein-Wechselwirkungen und immunologische Assays.
• pIII-Fusionsanzeige: pIII befindet sich an einem Ende des Virions mit 4-5 Kopien und ist während der Infektion am Wirtsbindungsprozess beteiligt. pIII kann große Peptid- und Proteininsertionen ertragen, aber normalerweise mit niedriger Expressionsrate. Daher ist die Verwendung der pIII-Anzeige am besten für die Auswahl mit hoher Affinität während des Schwenkvorgangs geeignet. Große native Antikörperbibliotheken, die auf pIII präsentiert werden, haben sich als leistungsstarker Ansatz zur Erzeugung hochspezifischer und affiner Antikörperkandidaten erwiesen, die auf eine Vielzahl von Antigenen abzielen.
• Andere Anzeigevektoren: Mit Ausnahme von pVIII und pIII können alternativ auch andere Kapside ausgenutzt werden. Minor Capsid pVI ist in der Lage, Fusionsproteine an seinem C-Terminus zu zeigen, was es für die Anzeige von cDNA-Bibliotheken zugänglich macht. pXI und pVII erweisen sich auch als vielversprechende Fahrzeuge für ihre Signalsequenzunabhängigkeit, hohe Rückgewinnungsrate sowie hohe Selektionseffizienz, was auf ein großes Potenzial für die Dual-Site-Anzeige hindeutet.

Mit jahrelanger Hingabe und Akkumulation in diesem speziellen Bereich hat Creative Biolabs ständig Spitzentechnologien für die Phagenanzeige entwickelt und verbessert und unseren weltweiten Kunden qualitativ hochwertigen technischen Support geboten. Basierend auf unseren Patentplattformen und präzisen Protokollen haben Forscher in Creative Biolabs erfolgreich makellose Phagen-Display-Bibliotheken verschiedener Typen (einschließlich Antikörper, Peptid, cDNA, Proteingerüst usw.) aufgebaut.) und isolierte spezifische Klone mit adäquaten Eigenschaften. Wir freuen uns, diese integrierten Dienste von M13-Phagen-Display-Bibliotheken sowie Dutzenden vorgefertigter Antikörperbibliotheken anbieten zu können, um die Forschungsprojekte unserer Kunden bestmöglich zu erleichtern.

Abb. 1. Der Lebenszyklus von filamentösen Phagen. (Huang, Bishop-Hurley und Cooper 2012)

Referenz

1. Huang, JX, Bishop-Hurley, SL und Cooper, MA (2012) ‚Entwicklung von Antiinfektiva mit Phagen-Display: biologische Wirkstoffe gegen Bakterien, Viren und Parasiten‘, Antimikrobielle Mittel und Chemotherapie, 56 (9), 4569-4582.

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