Descrizione
DSSO (disuccinimidyl sulfoxide) è un crosslinker MS-clivabile e permeabile alla membrana che contiene un estere N-idrossisuccinimmide (NHS) reattivo all’ammina a ciascuna estremità di un braccio distanziatore a 7 atomi di carbonio. Facilita l’analisi della struttura proteica e delle interazioni complesse utilizzando la spettrometria di massa. DSSO ha una reattività simile a DSS e BS3, ma contiene un linker che può essere scisso nella fase gassosa durante il tandem MS (MS/MS) utilizzando la dissociazione indotta da collisione (CID). La capacità di fendere peptidi reticolati durante MS / MS consente metodi di acquisizione MS3, che facilitano il sequenziamento del peptide utilizzando motori di ricerca di database tradizionali. La scissione del ms di DSSO inoltre genera i doppietti diagnostici dello ion durante MS2, che permette all’identificazione dei peptidi reticolati dalle modifiche e dalla ricerca senza uscita facendo uso dei motori di ricerca novelli della base di dati quale XlinkX.
Caratteristiche di DSSO:
* Gruppi reattivi: estere NHS (entrambe le estremità)
* Reattivo verso: gruppi amminici (ammine primarie)
• Amine-reattiva NHS ester reagisce rapidamente con qualsiasi ammina primaria-contenente la molecola
• Membrana permeabile, consentendo intracellulare di reticolazione
• Alto grado di purezza cristallina reagente può essere utilizzato per creare ad alta purezza coniugati
• MS-fessurabili
• insolubile in Acqua (sciogliere prima in DMF o DMSO)
Molto specifiche:
• Purezza: > 90% mediante NMR quantitativo (il più alto standard nella purezza della reticolazione)
La reticolazione chimica in combinazione con la spettrometria di massa è un metodo potente per determinare le interazioni proteina-proteina. Questo metodo è stato applicato ai complessi proteici ricombinanti e nativi e, più recentemente, ai lisati a cellule intere o agli organismi unicellulari intatti nel tentativo di identificare le interazioni proteina-proteina su scala globale. Sia tradizionale, non fessurabili e MS-fessurabili reticolanti permettono di percepire l’identificazione di interazione della proteina-proteina siti, ma MS-fessurabili reticolanti sono vantaggiose a causa della loro capacità di essere spaccati utilizzando diversi tipi di gas fase di frammentazione metodi (ad esempio, CID, HCD, ETD, e EtHCD) e i livelli di spettrometria di massa tandem (ad esempio, MS2 e MS3) al fine di migliorare l’identificazione di cross-linked peptidi.