Descripción
El DSSO (disuccinimidil sulfóxido) es un reticulador permeable a la membrana y es hendible por MS que contiene un éster de N-hidroxisuccinimida (NHS) reactivo a la amina en cada extremo de un brazo espaciador de 7 carbonos. Facilita el análisis de la estructura de las proteínas y las interacciones complejas mediante espectrometría de masas. DSSO tiene una reactividad similar a DSS y BS3, pero contiene un enlazador que puede ser escindido en la fase gaseosa durante MS en tándem (MS/MS) usando disociación inducida por colisión (CID). La capacidad de escindir péptidos reticulados durante MS/MS permite métodos de adquisición de MS3, que facilitan la secuenciación de péptidos utilizando motores de búsqueda de bases de datos tradicionales. La hendidura MS de DSSO también genera dobletes de iones de diagnóstico durante MS2, lo que permite la identificación de péptidos reticulados a partir de modificaciones sin salida y la búsqueda mediante nuevos motores de búsqueda de bases de datos como XlinkX.
Características de DSSO:
* Grupos reactivos: Éster NHS (ambos extremos)
* Reactivo hacia: grupos aminos (aminas primarias) * Permeable a la membrana, lo que permite el reticulado intracelular
* El reactivo cristalino de alta pureza se puede usar para crear conjugados de alta pureza
• escindible en MS
• Insoluble en agua (disolver primero en DMF o DMSO)
: > 90% por RMN cuantitativa (el estándar más alto en pureza de reticulación)
La reticulación química en combinación con espectrometría de masas es un método poderoso para determinar las interacciones proteína-proteína. Este método se ha aplicado a complejos de proteínas recombinantes y nativas, y más recientemente, a lisados de células enteras u organismos unicelulares intactos en esfuerzos por identificar interacciones proteína-proteína a escala global. Los reticuladores tradicionales no disociables y disociables por MS proporcionan información sobre la identificación de sitios de interacción proteína-proteína, pero los reticuladores disociables por MS son ventajosos debido a su capacidad de ser escindidos utilizando diferentes tipos de métodos de fragmentación en fase gaseosa (por ejemplo, CID, HCD, ETD y ETCD) y niveles de espectrometría de masas en tándem (por ejemplo, MS2 y MS3) para mejorar la identificación de péptidos reticulados.