monoaminoxidas-a-hämning och associerad antioxidantaktivitet i växtextrakt med potentiella antidepressiva åtgärder

Abstrakt

monoaminoxidas (MAO) katalyserar oxidativ deaminering av aminer och neurotransmittorer och är involverad i humörsjukdomar, depression, oxidativ stress och negativa farmakologiska reaktioner. Detta arbete studerar inhiberingen av mänsklig MAO-A av Hypericum perforatum, Peganum harmala och Lepidium meyenii, som rapporteras förbättra och påverka humör och mentala tillstånd. Därefter bestäms antioxidantaktiviteten associerad med inhiberingen av MAO i växtextrakt för första gången. H. perforatum inhiberade mänsklig MAO-A, och extrakt från blommor gav den högsta inhiberingen (IC50 av 63,6 kg/mL). Växtextrakt analyserades av HPLC-DAD-MS och innehöll pseudohypericin, hypericin, hyperforin, adhyperforin, hyperfirin och flavonoider. Hyperforin inhiberade inte humant MAO-A och hypericin var en dålig hämmare av detta isoenzym. Quercetin och flavonoider bidrog väsentligt till MAO-A-hämning. P. harmala fröextrakt starkt inhiberade MAO-A (IC50 av 49,9 occurg/L), som är tusen gånger mer potent än H. perforatum extrakt på grund av dess innehåll av bacill-karbolinalkaloider (harmalin och harmin). L. meyenii root (maca) extrakt inhiberade inte MAO-A. Dessa växter kan utöva skyddsåtgärder relaterade till antioxidanteffekter. Resultat i detta arbete visar att P. harmala och H. perforatum-extrakt uppvisar antioxidantaktivitet associerad med inhiberingen av MAO (dvs lägre produktion av H2O2).

1. Introduktion

enzymet monoaminoxidas (MAO) metaboliserar xenobiotiska och endogena aminer och neurotransmittorer inklusive serotonin, dopamin, noradrenalin, tyramin, tryptamin och neurotoxinet MPTP . Det förekommer som två isoenzymer, MAO-A och MAO-B, som spelar en viktig roll i centrala nervsystemet (CNS) och perifera organ. MAO-B är involverad i neurodegenerativa sjukdomar och MAO-A i psykiatriska tillstånd och depression. Hämmare av MAO-B är användbara som neuroprotektiva medel, medan hämmare av MAO-A är effektiva antidepressiva medel även om deras användning kan utlösa biverkningar (t .ex. hypertensiv kris med livsmedel som innehåller tyramin). Å andra sidan genererar oxidationen av biogena aminer och neurotransmittorer av MAO-enzymer väteperoxid (H2O2), syreradikaler och aldehyder, vilka är riskfaktorer för celloxidativ skada. Därför kan inhiberingen av MAO resultera i skydd mot oxidativ stress och neurotoxiner . Nya undersökningar har påpekat att växt-och livsmedelsextrakt kan hämma MAO-enzymer vilket resulterar i ovan nämnda biologiska effekter . Å andra sidan, som ett resultat av MAO-hämning, kan dessa produkter vara involverade i oönskade interaktioner med andra örtberedningar, livsmedel eller läkemedel .

Hypericum perforatum L. (family Hypericaceae) (St .John ’ s wort) används ofta för hälsoändamål och deras produkter är kommersiellt tillgängliga som örter, nutraceuticals, te, tinkturer, juice, oljiga macerater, phytopharmaceuticals och livsmedelstillsatser och kosttillskott. H. perforatum är populärt för behandling av mild och måttlig depression . Det kan utlösa negativa farmakologiska interaktioner med andra örter, droger eller livsmedel . Dess förmåga att lindra och förbättra humörsjukdomar och depression är hänförlig till aktiva föreningar som uppvisar antidepressiva egenskaper . Den mest accepterade verkningsmekanismen är monoaminåterupptagshämning men ytterligare mekanismer inklusive monoaminoxidashämning och synergistiska effekter kan vara involverade . Peganum harmala (familjen Zygophyllaceae) och Lepidium meyenii (familjen Brassicaceae) (maca) är växter med CNS-effekter och potentiella antidepressiva åtgärder . P. harmala, infödd från Medelhavsområdet och Asien och utvidgad till Nordamerika, används som ett mångsidigt hälsohjälpmedel inklusive CNS-störningar. Preparat av denna växt kan utlösa negativa farmakologiska interaktioner . L. meyenii är en ätbar växt från de centrala Anderna vars rötter används som en matenergizer och nutraceutical för att förbättra fysiska och mentala tillstånd och fertilitet . Syftet med detta arbete var att studera inhiberingen av human MAO-A genom extrakt av H. perforatum, P. harmala och L. meyenii (maca) samt av deras aktiva komponenter som identifierades och analyserades av HPLC-DAD-MS och därefter utvärdera antioxidantaktiviteten som är specifikt associerad med inhiberingen av MAO. Denna specifika antioxidantaktivitet bestäms för första gången i växtextrakt.

2. Material och metoder

Hypericum perforatum L. växter samlade i Ciudad Real (Spanien) torkades och separerades i delar: blommor; övre luftdelar av växten inklusive grenade stjälkar och löv men inga blommor; och huvudstammar (centrala och nedre) och rötter. De maldes och pulvret användes för provberedning. Kommersiella örter och växtbaserade kosttillskott (kapslar och tabletter) av H. perforatum köptes också i lokala växtbaserade butiker. Peganum harmala L. växt och frön samlades i Toledo (Spanien). Lepidium meyenii (maca) både som pulver och kommersiella tabletter erhölls från Peru och lokala butiker. Hypericin standard (>95% purity by HPLC) from HWI Analytik GMBH pharma solutions, hyperforin dicyclohexylammonium salt, quercetin, harmaline, harmine, catalase, clorgyline, 3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine (TMB), and horseradish peroxidase (HRP) type II were purchased from Sigma-Aldrich.

2.1. Sample Preparation of Plant Extracts

Samples containing H. perforatum (i.e., plant parts, herbal preparation, capsules, or tablets) (500 mg) were homogenized in 10 mL of water/methanol (1 : 1) genom att använda en Ultra Turrax homogenisator, centrifugeras vid 10000 rpm för 10 min, och supernatanten uppsamlades. Processen upprepades två gånger med återstoden och de tre supernatantfraktionerna uppsamlades, blandades och analyserades med HPLC som nämnts nedan. Efter tre på varandra följande extraktioner var återvinningarna av hypericin och pseudohypericin högre än 97%. Prover av L. meyenii (maca) (500 mg) och P. harmala frön (500 mg) homogeniserades i 10 mL vatten/metanol (1 : 1) eller 10 mL 0,6 M perklorsyra : metanol (1 : 1) genom att använda en Ultra Turrax homogenisator, centrifugeras vid 10000 rpm för 10 min, och supernatanten uppsamlades. Denna process upprepades två gånger med återstoden och de uppsamlade supernatanterna blandades och analyserades med HPLC som nämnts nedan.

2.2. RP-HPLC analys av växtextrakt

analysen av H. perforatum extrakt utfördes av RP-HPLC med UV-diod array och fluorescensdetektering med användning av en HPLC 1050 (Agilent) i kombination med en 1100 diod array detektor (DAD) (Agilent) och en 1046a-fluorescensdetektor. En 150 3,9 mm i. d., 4 msk, Nova-pak C18 kolonn (vatten) användes för separation. Kromatografiska förhållanden var 50 mM ammoniumfosfatbuffert (pH 3) (buffert a) och 20% av A i acetonitril (buffert B). Gradienten programmerades från 0% (100% A) till 32% B på 8 min och 100% B vid 10 min. Flödeshastigheten var 1 mL/min, kolonntemperaturen var 40 kg C och injektionsvolymen var 20 kg. Detektion av hypericiner utfördes genom absorbans vid 590 nm och fluorescens vid 236 nm för excitation och 592 nm för emission. Koncentrationen av hypericin bestämdes från en kalibreringskurva för svar (absorbans vid 590 nm) kontra koncentration med lösningar gjorda i laboratoriet från hypericinstandard. Samma svarsfaktor applicerades på pseudohypericin, protohypericin och protopseudohypericin. Flavonoider och flavonoidglykosider analyserades vid 265 nm och 355 nm och koncentrationen av quercetin bestämdes vid 355 nm från en kalibreringskurva för respons kontra koncentration. HPLC-fraktionen motsvarande flavonoider och flavonoidglykosider (7 till 11 min) uppsamlades genom successiva injektioner av H. perforatum-extrakt (örter) och löstes efter indunstning i vakuum i 30% metanol och användes för MAO-A-hämning. Phloroglucinolerna (hyperforin, adhyperforin, hyperfirin och adhyperfirin) analyserades vid 280 nm med användning av samma kolonn (Nova-pak C18) och betingelser men under isokratisk eluering med 20% av 50 mM ammoniumfosfatbuffert, pH 3 och 80% av acetonitril. Koncentrationen av dessa föreningar bestämdes från en kalibreringskurva av hyperforin standard. Analysen av alkaloider i P. harmala och L. meyenii utfördes som tidigare beskrivits .

2.3. Identifiering med HPLC-ESI-masspektrometri

identifiering av föreningar i H. perforatum-extrakt gjordes med HPLC-MS (elektrospray-negativ jonläge) med användning av en 1200-serie HPLC-DAD kopplad till en 6110 quadrupol-MS (Agilent). Kromatografisk separation utfördes på en kolonn på 150 2,1 mm i.D. Zorbax SB-C18 (5 kg) (Agilent Technologies). De kromatografiska betingelserna var eluent A: myrsyra (0,1%); B: myrsyra (0,1%) i acetonitril; gradient: 0% till 70% B på 8 min och 100% B vid 10 min, flödeshastighet: 0,3 mL/min; : 40 kcal C; massområde: 50-700 u och konspänning: 150 V. för identifiering av floroglucinoler (t.ex. hyperforin), separerades med användning av en Nova-pak C18 (4 kg) kolonn med samma eluenter och isokratisk eluering (eluent a, 20% och eluent B, 80%) vid en flödeshastighet av 0,7 ml/min och masspektra registrerade i negativ och positiv jonisering. Identifiering av föreningar gjordes på grundval av masspektra, UV-VIS-spektra (DAD) av kromatografiska toppar och coelution med standarder. i P. harmala och L. meyenii identifierades som tidigare beskrivits .

2.4. Monoaminoxidas (MAO-A) Inhiberingsanalyser

MAO-analyser utfördes som på andra håll . I korthet späddes membranproteinfraktioner innehållande MAO-A (BD-Gentest) till de önskade koncentrationerna i 100 mM kaliumfosfatbuffert (pH 7,4). En 0,2 mL reaktionsblandning innehållande 0,01 mg/mL protein och 0.25 mM kynuramin i 100 mM kaliumfosfat (pH 7,4) inkuberades vid 37 kcal C under 40 min. Efter inkubation stoppades reaktionen genom tillsats av 2 N NaOH (75 occl), följt av tillsats av 70% HClO4 (25 occl), och provet centrifugerades (10000) under 10 min. Supernatanten (20 occl) injicerades i HPLC och deamineringsprodukten av kynuramin (dvs 4-hydroxikinolin) bildades under enzymatisk reaktion bestämd av RP-HPLC-diodmatrisdetektering vid 320 nm. En svarskurva för area kontra koncentration konstruerades för att beräkna koncentrationen av 4-hydroxikinolin. För att utföra analyser av MAO-hämning späddes alikvoter av extrakt från växter eller kommersiella preparat eller istället rena föreningar bekvämt och tillsattes till reaktionsblandningar innehållande kynuramin (0,25 mM) och MAO-A (0,01 mg/mL protein) i 100 mM kaliumfosfatbuffert (pH 7,4), med enzymatisk reaktion och analys utförd som ovan, och jämfördes med motsvarande kontroller innehållande lösningsmedel. Standardhämmaren clorgylin användes som en positiv kontroll för inhibering (>90% inhibering vid 2,5 kg). Inkubationer utfördes åtminstone i duplikat från olika experiment och IC50-värdena beräknades med användning av GraphPad Prism 4.0.

2.5. Bestämning av antioxidantaktivitet associerad med monoaminoxidas (MAO)-hämning

analyser (0,2 mL) av reaktionsblandningar i 70 mM kaliumfosfatbuffert (pH 7,4), innehållande 0,025 mg/mL MAO-A-protein och 0,25 mM kynuramin, inkuberades vid 37 kcal C för 40 min i frånvaro (kontrollanalyser) eller i närvaro av växtekstrakter. MAO-analyser utfördes också i närvaro av clorgylin (25 kg), en klassisk hämmare av MAO-A (positiv kontroll av hämning) eller katalasenzym (100 kg/mL). Efter inkubationsperioden tillsattes reaktionsblandningen med aktivt kol (3,5 mg), blandades och filtrerades (0,45 kcal). Lösningen tillsattes med 20 oC 10 mm tetrametylbensidin (TMB) i 40% DMSO och 20 oC pepparrot peroxidas (HRP) typ II (1 mg/mL), hölls 5 min och tillsattes med 0,3 mL 0,5 m H2SO4-lösning. Absorbansen vid 450 nm mättes för att bestämma TMB-diimin, en gul produkt som härrör från oxidationen av TMB av HRP och H2O2 genererad i oxidativ deaminering katalyserad av MAO. Oxidationen av TMB i närvaro av MAO-hämmare jämfördes med motsvarande kontroller utan hämmare och lämpliga ämnen visade frånvaro av störningar.

3. Resultat och diskussion

kommersiella preparat av H. perforatum inhiberade humant MAO-A med liknande styrka: IC50-värden på 142,3 30.6 kg / mL (örtberedning), 193 kg 61 kg/mL (kapslar) och 173 kg 29 kg/mL (tabletter) (Figur 1 a)). Om växter, H. perforatum extrakt från blommor ges högsta hämning (IC50 63,6 ± 9.4 µg/mL) följt av antenn stjälkar och blad (IC50 143.6 ± 16.5 µg/mL), och den lägsta i root extrakt (Figur 1(b)). Extrakt från antenndelarna av H. perforatum analyserades med HPLC-DAD-ESI (elektrospray-negativ jonisering). De visade närvaron av två huvudnafthodiantroner identifierade som pseudohypericin och hypericin (Figur 2(A) och Tabell 1). Blommaxtrakt hade ytterligare två föreningar identifierade som protopseudohypericin och protohypericin. Fenoler och flavonoider flödade i H. perforatum extrakt (Figur 2(b)). Klorogen syra och quercetin glykosider rutin, hyperosid, isoquercitrin, miquelianin, acetyl hyperosid och quercitrin, liksom fri quercetin och biapigenin, identifierades av HPLC-DAD (ESI negativ jonisering) och DAD (Tabell 1). Å andra sidan innehöll blommaxtrakt fyra floroglucinoler (Figur 2(c)) som identifierades av HPLC-DAD-MS (ESI-negativ och positiv jonisering) och DAD som hyperforin, adhyperforin, hyperfirin och adhyperfirin (Tabell 1). Närvaron av dessa föreningar (Figur 3) i växten överensstämmer med andra resultat . Innehållet i huvudkomponenterna bestämdes av HPLC (Tabell 2). Koncentrationen av pseudohypericin var högre än hypericin, medan protopseudohypericin och protohypericin var mindre föreningar (0,4 kg/mg protopseudohypericin och 0.17 occurg/mg protohypericin detekterades i blommor). I växten hittades det högsta innehållet av hypericiner i blommor med signifikant låga nivåer detekterade i stjälkar och frånvaro i rötter. Hyperforin var mycket rikligt i blommor (27,2 kg/mg), medan koncentrationen i kommersiella preparat varierade från 0,36 till 2,4 kg/mg. I blommor, adhyperforin (1.4 ± 0.07 µg/mg), hyperfirin (4.2 ± 0.02 µg/mg), och adhyperfirin (0.46 ± 0.02 µg/mg) dök också upp. Flavonoider flödade i H. perforatum och de flesta av dem var quercetin glykosider (Figur 2(B)) vars närvaro var signifikant högre i blommor än i andra delar av växten. Innehållet av fri quercetin i blommor var 2,0 kg/mg, medan ett innehåll av 6,7 kg/mg bestämdes i kommersiella preparat.

(a)

(b)

(a)
(b)

Figur 1

hämning av humant monoaminoxidas-A (MAO-A) genom extrakt av kommersiella preparat av H. perforatum (a) (kapslar, sackaros; tabletter, sackaros; från olika delar av växten (b) (blommor, Brasilien; övre stjälkar, Brasilien; huvudstammar (central), Brasilien; rötter, Brasilien). Signifikanta skillnader () mellan extrakt vid en vald koncentration anges med olika bokstäver.

(a) nm

(b) nm

(c) nm

(a) nm
(b) nm
(c) nm

Figure 2

HPLC chromatograms of extracts from H. perforatum flowers. (a) Detection of hypericins at 590 nm. 1: protopseudohypericin; 2: pseudohypericin; 3: protohypericin; and 4: hypericin. (b) Detection of phenols and flavonoids at 265 nm. 1: chlorogenic acid; 2: rutin; 3: hyperoside; 4: isoquercitrin; 5: miquelianin; 6: acetyl hyperosid; 7: quercitrin; 8: quercetin; och 9: biapigenin. C) påvisande av kloroglucinoler vid 280 nm. 1: hyperfirin, 2: adhyperfirin; 3: hyperforin; och 4: adhyperforin.

Figur 3

strukturer av föreningar identifierade i H. perforatum: hypericiner, quercetin och quercetin flavonoider och phloroglucinoler (hyperforin, adhyperforin, hyperfirin och adhyperfirin).

hämningen av MAO-A av H. perforatum extrakt indikerar förekomst av hämmare. Hypericiner, hyperforin och flavonoider är möjliga bidragsgivare till denna hämning och utvärderades som hämmare (Figur 4). Hypericin hämmade MAO-A (IC50 på 35,5 2,1 2,1 eller 17,9 2,1 ml) (Figur 4 (a)). Från koncentrationen i Tabell 2 är hypericin en svag bidragsgivare till MAO-hämning i H. perforatum-extrakt. Faktum är att det beräknade innehållet av hypericin vid IC50-värde i analyser av blommextrakt (dvs. 63,6 kg/mL) var 0,1 kg/mL vilket är lågt jämfört med IC50 av hypericin (17,9 kg/mL). Hyperforin inhiberade inte MAO-A (Figur 4 (b)). Quercetin inhiberade humant MAO-A (Figur 4(b)) med ett IC50-värde på 11,1 2,8 0,8 (dvs. 3,36/mL). Sedan var quercetin en bättre hämmare än hypericin även om dess styrka fortfarande var låg för att förklara hela hämningen av extrakt. Således var det beräknade innehållet av quercetin vid IC50 i analyser av blommextrakt 0,13 kg / mL vilket är lägre än IC50 av quercetin (3,4 kg/mL). När fraktionen motsvarande quercetinglykosider och flavonoider (7-11 min, figur 2(b)) uppsamlades med RP-HPLC, inhiberade den MAO-a (90% inhibering vid 700 kg/mL extrakt) vilket indikerar ett bidrag av dessa föreningar till MAO-hämning i H. perforatum, troligen genom additiva effekter. Då kan hämning av MAO-A uppstå från komponenter som quercetin och relaterade flavonoider (dvs quercetin glykosider) som är rikliga i växten. Dessutom kan mindre föreningar som inte identifieras här också bidra till MAO-hämning eftersom huvudföreningar i Tabell 2 inte förklarar hel hämning.

(a)

(b)

(a)
(b)

Figur 4

inhibering av humant monoaminoxidas-A (MAO-A) av aktiva komponenter i H. perforatum: hypericin (a) och quercetin (pankreas) och hyperforin (pankreas) (b).

extrakt från P. harmala frön mycket inhiberade mänskliga MAO-A(Figur 5 (A)) ger en IC50 värde av 49,9 2,6 5,6 xnumx xnumx. Kromatografisk analys indikerade att inhibering berodde på närvaron av de sackarios-karbolinalkaloider, harmalin och harmin, som identifierades av HPLC-DAD-MS (Figur 5(c)). Innehållet av dessa alkaloider bestämda i frön var 48,5 mg/g för harmalin och 40,0 mg/g för harmin (detta betyder 2,4 ng/mL och 2,0 ng/mL, resp., i analyser vid IC50). Därför var hämningsstyrkan hos MAO – A av P. harmala frön 1274 gånger mer potent än den för H. perforatumblommor. Som visas i Figur 5 (b) inhiberade Lepidium meyenii-rotextrakt inte mänsklig MAO-A. L. meyenii (maca) är en populär växt från Andes höglandet vars rötter alltmer används för dess näringsmässiga och medicinska egenskaper som energigivande och för att förbättra humör och sexuell prestanda . Tidigare rapporter har visat att de innehåller alkaloider, inklusive karboliner som kan hämma MAO. Analys av extrakt för alkaloider i karbolin gav 25 CZ/g (maca-pulver) och 11,7 CZ/g (kapslar) 1-metyl-1,2,3,4-tetrahydro-CZ-karbolin-3-karboxylsyra som en huvudförening. Denna specifika karbolin är inte en MAO-A-hämmare .

(a)

(b)

(c)

(a)
(b)
(c)

Figur 5

hämning av humant monoaminoxidas-A (MAO-A) av P. harmala-frö (a) och L. meyenii-rot (maca) extrakt (b) (kapslar, kakao och pulver, kakao). (c) HPLC-kromatogram av P. harmala-fröextrakt som kraftigt hämmade humant Mao-A. Absorbansdetektering vid 254 nm. Föreningar identifierade är harmalin (m/z vid 215 (m + H)+, vid 375 nm) och harmin (m/z vid 213 (M + H)+, vid 245 och 322 nm).

MAO genererar väteperoxid (H2O2) som är involverad i oxidativ cellskada och patologiska tillstånd . Då kan inhiberingen av MAO resultera i specifika antioxidantåtgärder . För att studera antioxidantaktiviteten associerad med MAO-hämning utformades experiment i denna forskning som kopplade aktiviteten av MAO-A med oxidationen av tetrametylbensidin (TMB) av pepparrotperoxidas (HRP) och H2O2 producerad under oxidativ deaminering katalyserad av MAO (Figur 6). H. perforatum och P. harmala extrakt som hämmade MAO-A som visas ovan mycket minskad oxidation av TMB. Däremot hade L. meyenii root (maca) extrakt som inte inhiberade MAO en låg antioxidantaktivitet i denna analys. Clorgyline som är en potent hämmare av MAO-A minskade kraftigt oxidationen av TMB när den användes som kontroll. Detsamma hände med närvaron av katalas i media som avlägsnar H2O2 genererad av MAO-A. Därför indikerar dessa resultat att H. perforatum och P. harmala-extrakt gav specifika antioxidantåtgärder associerade med en lägre produktion av H2O2 genom hämning av MAO.

Figur 6

antioxidantaktivitet associerad med MAO-hämning i analyser kopplingsaktivitet av MAO-A med den efterföljande oxidationen av tetrametylbensidin (TMB) i närvaro H2O2 genereras i reaktionen av MAO, och pepparrot peroxidas (HRP). Grafen visar oxidationen av TMB till diimin (absorbans vid 450 nm) i kontrollanalyser (100%), och i närvaro av H. perforatum (örter och blommextrakt, 800 kg/mL), P. harmala fröextrakt (0,8 kg/mL), L. meyenii rot (maca) extrakt (800 oc/mL), clorgyline (en standard hämmare av MAO-A) (25 oC), och katalas (100 oc/mL). skillnader () jämfört med kontroller.

H. perforatum förbättrar humörsjukdomar och depression . Som visas här innehåller den föreningar som hyperforin, hypericiner och flavonoider som är ansvariga för antidepressiva effekter (Figur 2 och Tabell 2). Den specifika mekanismen för antidepressiv verkan är emellertid inte fullständigt förstådd. Den mest accepterade mekanismen är hämning av monoaminåterupptagning . Vissa studier tyder dock på en kombination av mekanismer och synergistiska effekter . P. harmala utövar många biologiska och farmakologiska åtgärder. Deras frön används alltmer för rekreationsändamål på grund av deras psykoaktiva och neuroaktiva effekter . Inhiberingen av human MAO-A är en etablerad mekanism för antidepressiv verkan . Både irreversibla och reversibla hämmare av MAO-A (t ex fenelzin och moklobemid) används framgångsrikt som antidepressiva medel. I denna studie hämmade H. perforatum-extrakt humant MAO-A. denna hämning var emellertid måttlig. Det var mer än tusen gånger lägre än för P. harmala frö extrakt. Sacher et al. har rapporterat att beläggningen av MAO – A-platser i den mänskliga hjärnan bestämd genom PET-avbildning med 11C-harminbindning (dvs. samma kazakkarbolin som ansvarar för MAO-hämning i P. harmala) var hög för en reversibel hämmare av MAO såsom moklobemid men låg för H. perforatum-extrakt (Johannesört) . Detta innebär att MAO-A-hämmarna i H. perforatum inte binder effektivt till aktiva platser av MAO-A i hjärnan i motsats till chorizo-karbolinharmin. Hämmare av MAO-A i H. perforatum är flavonoider som quercetin och deras glykosider och nivåerna av dessa föreningar som når hjärnan kanske inte räcker för att uppta platserna för MAO-A i hjärnan och hämma enzymet . I kontrast, inhibitorerna av P. harmala är bacill-karbolinalkaloider inklusive harmin och harmalin som har en mycket bra hjärnpenetration, binder med hög affinitet till MAO-platser, och uppvisar antidepressiva effekter . Därför kunde P. harmala ha råd med antidepressiva effekter genom MAO-hämning. I detta avseende kan det vara av intresse att undersöka de antidepressiva effekterna av H. perforatum och P. harmala ensam och i kombination eftersom de har olika verkningsmekanismer.

hämningen av MAO-A av H. perforatum och P. harmala-extrakt kan bidra till andra biologiska effekter av dessa växter, såsom antioxidantverkan och negativa farmakologiska reaktioner. Extrakt av dessa växter utövar neuroprotektiva och antiinflammatoriska effekter som har varit relaterade till antioxidantaktivitet . I detta avseende genom att använda ett nytt förfarande, resultaten i detta arbete har visat att H. perforatum och P. harmala-extrakt visar antioxidantaktivitet associerad med inhiberingen av MAO (lägre produktion av H2O2). Å andra sidan är en av de stora begränsningarna för användningen av dessa växter deras potential för att producera negativa interaktioner med andra örter, livsmedel och droger . Hämningen av MAO-A kan utlösa negativa effekter under vissa omständigheter .

4. Slutsatser

extrakt från H. perforatum hämmade humant MAO-A, och extrakt från blommor var de mest potenta hämmarna. De studerades av HPLC-DAD-MS och innehöll pseudohypericin, hypericin, hyperforin, adhyperforin, hyperfirin och flavonoider. Det högsta innehållet av dessa föreningar uppträdde i blommor. Hypericin var en svag hämmare av MAO-A; hyperforin inhiberade inte enzymet och quercetin var en måttlig hämmare. Fraktionen av quercetin glykosider och flavonoider bidrog till MAO-hämning. P. harmala-fröextrakt inhiberade starkt MAO-A och dess inhiberingsförmåga var mer än tusen gånger högre än H. perforatum-extrakt på grund av dess innehåll i harmalin-och harminalkaloider. L. meyenii root (maca) extrakt inhiberade inte MAO-A. inhiberingen av MAO-A kanske inte förklarar hela CNS-effekterna som tillskrivs H. perforatum men det förväntas bidra till dessa åtgärder i P. harmala. Dessa växter utövar antioxidanteffekter. Genom att använda en ny metod har detta arbete visat att P. harmala och H. perforatum-extrakt uppvisar antioxidantaktivitet associerad med inhiberingen av MAO.

intressekonflikter

författarna förklarar inget konkurrerande ekonomiskt intresse.

bekräftelser

författarna är tacksamma för MINECO-FEDER (SAF2015-66690-R och SAF2015-68580-C2-R) och CSIC (Spanien) (projekt 200470e658) för att stödja detta arbete. Författarna är också tacksamma för Marta Aguilar Preiss för tekniskt bistånd och till Dr.V. ar Actubn för att hjälpa till med anläggningsidentifiering och urval.