anteckningar baserade på information i ’Basic practical microbiology’ Brasiliens samhälle för allmän mikrobiologi.
hänvisa till aseptiska tekniker innan du påbörjar detta eller något annat mikrobiologiskt praktiskt arbete.
i en hällplatta tillsätts en liten mängd inokulum från en buljongkultur med pipett till mitten av en petriskål. Kyld, men fortfarande smält, agarmedium i ett provrör eller en flaska hälls sedan i petriskålen. Skålen roteras sedan försiktigt eller flyttas fram och tillbaka (första N-S, sedan NW-SE, sedan NE-SW), för att säkerställa att kulturen och mediet blandas noggrant och mediet täcker plattan jämnt.
Hällplattor tillåter mikroorganismer att växa både på ytan och i mediet. De flesta kolonierna växer inom mediet och är små i storlek och kan vara sammanflytande. De få kolonier som växer på ytan är av samma storlek och utseende som de på en streckplatta.
dessa plattor kan sedan användas för att testa de antimikrobiella effekterna av olika ämnen. För mer information se undersöka antimikrobiell verkan.
annars kan plattor som detta vara en del av undersökningen av bakteriepopulationen i ett prov. Odling av seriella utspädningar på detta sätt möjliggör en beräkning av populationsstorleken för ett bakterieprov. Om utspädningen och volymen av inokulum, vanligtvis 1 cm3, är kända, kan det livskraftiga antalet prov per cm3 bestämmas. Det livskraftiga antalet är antalet bakterier eller klumpar av bakterier per cm3. De valda utspädningarna måste producera mellan 30 och 100 separata talbara kolonier. (Se även standardteknik: Göra seriella utspädningar)
hälsa & säkerhets-och tekniska anmärkningar
1 Använd ett vattenbad vid 50 kcal C för att lagra flaskor smält agar.
2 var noga med att inte förorena den smälta agar i flaskorna med vatten från vattenbadet. För att undvika kontaminering se till:
i att vattnet i vattenbadet är på rätt djup
ii att flaskorna hålls upprätt
iii att utsidan av flaskorna torkas innan de används.
3 i en jämnt fördelad hällplatta måste plattans botten täckas, agar får inte röra plattans lock och ytan måste vara slät utan bubblor.
4 CLEAPSS Laboratory handbook avsnitt 15.2.12 föreslår några alternativa metoder för att göra en hällplatta och anser deras fördelar och nackdelar.
procedur
inokulering använd en Pasteurpipett
håll alltid pipetten så stilla som möjligt.
a lossa locket/ bomullspluggen på flaskan som innehåller inokulatet.
b ta bort den sterila Pasteurpipetten från behållaren, fäst spenen och håll i höger hand.
C lyft flaskan / provröret som innehåller inokulatet med vänster hand.
d ta bort locket/ bomullsull kontakten med lillfingret på din högra hand.
e flamma flaskan / provrörshalsen.
f pressa pipettens napplampa mycket lätt. Sätt pipetten i flaskan/ provröret och dra upp den önskade volymen av kulturen. Pressa inte pipettens napplampa efter att den är i buljongen eftersom det kan orsaka bubblor och eventuellt aerosoler.
g ta bort pipetten och flamma halsen på flaskan / provröret igen. Byt ut locket / bomullsull kontakten.
h placera flaskan / provröret på bänken eller i stället.
inokulera petriskålen
a Lyft locket på petriskålen något med höger hand och sätt in pipetten i petriskålen. Släpp försiktigt den önskade volymen inokulum på mitten av skålen. Sätt tillbaka locket.
b Lägg pipetten i en kassettgryta.
hälla plattan
a samla en flaska steril smält agar från vattenbadet (anmärkning 1 och 2).
b håll flaskan i din högra hand. Ta bort locket med lillfingret på din vänstra hand.
c flamma flaskans hals.
D lyft locket på petriskålen något med vänster hand och häll den sterila smälta agaren i petriskålen. Sätt tillbaka locket.
e flamma flaskans hals och sätt tillbaka locket.
f flytta skålen försiktigt för att blanda kulturen och mediet noggrant och se till att mediet täcker plattan jämnt (anmärkning 3). Antingen flytta skålen i tre riktningar: först N-S, sedan NW-SE, sedan NE-SW, eller rotera den tills mediet och inokulatet är väl blandat och täcka skålens botten.
g låt plattan stelna.
h tejpa plattan stängd och inkubera i ett inverterat läge.
webblänkar
mikrobiologi lärare resurser
samhället för allmän mikrobiologi – källa till grundläggande praktisk mikrobiologi, en utmärkt manual för laboratorietekniker och praktisk mikrobiologi för Gymnasieskolor, ett urval av beprövade praktiker med hjälp av mikroorganismer.
mikrobiologi online
MiSAC (Microbiology in Schools Advisory Committee) stöds av Society for General Microbiology (se ovan) och deras webbplatser innehåller mer säkerhetsinformation och en länk för att be om råd via e-post.
( webbplatser öppnade oktober 2011)