Note sulla base di informazioni in ‘microbiologia pratica di base’ © Society for General Microbiology.
Fare riferimento alle tecniche asettiche prima di iniziare questo o qualsiasi altro lavoro pratico di microbiologia.
In una piastra di versamento, una piccola quantità di inoculo da una coltura di brodo viene aggiunta mediante pipetta al centro di una capsula di Petri. Raffreddato, ma ancora fuso, agar medio in una provetta o bottiglia viene poi versato nella capsula di Petri. Il piatto viene quindi ruotato delicatamente o spostato avanti e indietro (prima N-S, poi NW-SE, quindi NE-SW), per garantire che la coltura e il terreno siano accuratamente miscelati e il mezzo copra uniformemente la piastra.
Le piastre di versamento consentono ai microrganismi di crescere sia in superficie che all’interno del mezzo. La maggior parte delle colonie crescono all’interno del mezzo e sono di piccole dimensioni e possono essere confluenti. Le poche colonie che crescono sulla superficie sono delle stesse dimensioni e l’aspetto di quelli su una piastra striscia.
Queste piastre potrebbero quindi essere utilizzate per testare gli effetti antimicrobici di varie sostanze. Per ulteriori informazioni vedere Investigare l’azione antimicrobica.
Altrimenti, lastre come questa potrebbero far parte dell’indagine sulla popolazione di batteri in un campione. La coltura di diluizioni seriali in questo modo consente di calcolare la dimensione della popolazione di un campione batterico. Se la diluizione e il volume dell’inoculo, di solito 1 cm3, sono noti, è possibile determinare il conteggio vitale del campione per cm3. Il conteggio vitale è il numero di batteri o ciuffi di batteri per cm3. Le diluizioni scelte devono produrre tra 30 e 100 colonie numerabili separate. (Vedi anche tecnica standard: Fare diluizioni seriali)
Salute&Sicurezza e note tecniche
1 Utilizzare un bagno d’acqua a 50 °C per conservare le bottiglie di agar fuso.
2 Fare attenzione a non contaminare l’agar fuso nelle bottiglie con acqua proveniente dal bagno d’acqua. Per evitare la contaminazione assicurarsi:
i che l’acqua nel bagno d’acqua sia alla giusta profondità
ii che le bottiglie siano mantenute in posizione verticale
iii che le parti esterne delle bottiglie siano pulite prima di essere utilizzate.
3 In una diffusione uniforme versare piatto, la base della piastra deve essere coperto, agar non deve toccare il coperchio della piastra e la superficie deve essere liscia senza bolle.
4 CLEAPSS Laboratory handbook sezione 15.2.12 suggerisce alcuni metodi alternativi di fare un piatto versare, e considera i loro pro e contro.
Procedura
Inoculazione utilizzando una pipetta Pasteur
Tenere sempre ferma la pipetta.
a Allentare il tappo / il tappo di cotone idrofilo del flacone contenente l’inoculo.
b Rimuovere la pipetta Pasteur sterile dal contenitore, fissare la tettarella e tenerla nella mano destra.
c Sollevare il flacone / provetta contenente l’inoculo con la mano sinistra.
d Rimuovere il tappo / tappo di cotone idrofilo con il mignolo della mano destra.
e Fiamma il collo della bottiglia / provetta.
f Spremere leggermente la tettarella della pipetta. Mettere la pipetta nella bottiglia/ provetta e prelevare il volume richiesto della coltura. Non spremere il bulbo della tettarella della pipetta dopo che è nel brodo in quanto ciò potrebbe causare bolle e possibilmente aerosol.
g Rimuovere la pipetta e infiammare nuovamente il collo del flacone/ provetta. Sostituire il tappo / tappo di lana di cotone.
h Posizionare la bottiglia / provetta sul banco o nel suo rack.
Inoculare la capsula di Petri
a Sollevare leggermente il coperchio della capsula di Petri con la mano destra e inserire la pipetta nella capsula di Petri. Rilasciare delicatamente il volume di inoculo richiesto al centro del piatto. Sostituire il coperchio.
b Mettere la pipetta in un vaso di scarto.
Versare la piastra
a Raccogliere una bottiglia di agar fuso sterile dal bagno d’acqua (nota 1 e 2).
b Tenere la bottiglia nella mano destra. Rimuovere il cappuccio con il mignolo della mano sinistra.
c Fiamma il collo della bottiglia.
d Sollevare leggermente il coperchio della capsula di Petri con la mano sinistra e versare l’agar fuso sterile nella capsula di Petri. Sostituire il coperchio.
e Accendere il collo del flacone e sostituire il tappo.
f Spostare delicatamente il piatto per mescolare accuratamente la coltura e il mezzo e per assicurarsi che il mezzo copra uniformemente il piatto (nota 3). O spostare il piatto in tre direzioni: prima N-S, poi NW-SE, quindi NE-SW, o ruotarlo fino a quando il mezzo e l’inoculo sono ben miscelati e coprono la base del piatto.
g Lasciare solidificare la piastra.
h Fissare la piastra chiusa e incubare in posizione invertita.
Web links
Microbiologia teacher resources
Society for General Microbiology – source of Basic Practical Microbiology, un eccellente manuale di tecniche di laboratorio e Microbiologia pratica per le scuole secondarie, una selezione di pratiche collaudate che utilizzano microrganismi.
Microbiologia online
MiSAC (Microbiology in Schools Advisory Committee) è supportato dalla Society for General Microbiology (vedi sopra) e i loro siti web includono ulteriori informazioni sulla sicurezza e un link per chiedere consigli via e-mail.
(Siti Web consultati ottobre 2011)