Monoaminooxidasa: Inhibición A y Actividad Antioxidante Asociada en Extractos de Plantas con Posibles Acciones Antidepresivas

Resumen

La monoaminooxidasa (MAO) cataliza la desaminación oxidativa de aminas y neurotransmisores y está involucrada en trastornos del estado de ánimo, depresión, estrés oxidativo y reacciones farmacológicas adversas. Este trabajo estudia la inhibición de la MAO-A humana por Hypericum perforatum, Peganum harmala y Lepidium meyenii, que, según se informa, mejoran y afectan el estado de ánimo y las condiciones mentales. Posteriormente, la actividad antioxidante asociada con la inhibición de la MAO se determina en extractos de plantas por primera vez. H. perforatum inhibió la MAO-A humana, y los extractos de flores dieron la inhibición más alta (CI50 de 63,6 µg/mL). Los extractos de plantas se analizaron por HPLC-DAD-MS y contenían pseudohipericina, hipericina, hiperforina, adhiperforina, hiperfirina y flavonoides. La hiperforina no inhibió la MAO-A humana y la hipericina fue un inhibidor pobre de esta isoenzima. La quercetina y los flavonoides contribuyeron significativamente a la inhibición de la MAO-A. P. extractos de semillas de harmala MAO-A altamente inhibido (IC50 de 49,9 µg / L), siendo mil veces más potente que los extractos de H. perforatum debido a su contenido en alcaloides β-carbolínicos (harmalina y harmina). Los extractos de raíz de L. meyenii (maca) no inhibieron la MAO-A. Estas plantas pueden ejercer acciones protectoras relacionadas con los efectos antioxidantes. Los resultados de este trabajo muestran que los extractos de P. harmala y H. perforatum exhiben actividad antioxidante asociada con la inhibición de la MAO (es decir, menor producción de H2O2).

1. Introducción

La enzima monoaminooxidasa (MAO) metaboliza aminas y neurotransmisores xenobióticos y endógenos, incluidos la serotonina, la dopamina, la norepinefrina, la tiramina, la triptamina y la neurotoxina MPTP . Se presenta como dos isoenzimas, MAO – A y MAO-B, que desempeñan un papel importante en el sistema nervioso central (SNC) y los órganos periféricos. MAO-B está involucrado en enfermedades neurodegenerativas y MAO-A en condiciones psiquiátricas y depresión. Los inhibidores de la MAO-B son útiles como neuroprotectores, mientras que los inhibidores de la MAO-A son antidepresivos eficaces, aunque su uso puede desencadenar reacciones adversas (por ejemplo, crisis hipertensivas con alimentos que contienen tiramina) . Por otro lado, la oxidación de aminas biogénicas y neurotransmisores por enzimas MAO genera peróxido de hidrógeno (H2O2), radicales de oxígeno y aldehídos, que son factores de riesgo para lesiones oxidativas celulares. Por lo tanto, la inhibición de la MAO puede resultar en protección contra el estrés oxidativo y las neurotoxinas . Investigaciones recientes han señalado que los extractos de plantas y alimentos pueden inhibir las enzimas MAO, lo que resulta en los efectos biológicos mencionados anteriormente . Por otro lado, como resultado de la inhibición de la MAO, esos productos podrían estar involucrados en interacciones indeseables con otras preparaciones herbales, alimentos o medicamentos .

Hypericum perforatum L. (familia Hypericaceae) (hierba de San Juan) se usa ampliamente para fines de salud y sus productos están disponibles comercialmente como hierbas, nutracéuticos, tés, tinturas, jugos, macerados oleosos, fitofármacos y aditivos y suplementos alimenticios . H. perforatum es popular para el tratamiento de la depresión leve y moderada . Puede desencadenar interacciones farmacológicas adversas con otras hierbas, medicamentos o alimentos . Su capacidad para aliviar y mejorar los trastornos del estado de ánimo y la depresión se atribuye a compuestos activos que exhiben propiedades antidepresivas . El mecanismo de acción más aceptado es la inhibición de la recaptación de monoamina, pero pueden estar involucrados mecanismos adicionales que incluyen la inhibición de la monoaminoxidasa y efectos sinérgicos . Peganum harmala (familia Zygophyllaceae) y Lepidium meyenii (familia Brassicaceae) (maca) son plantas con efectos sobre el SNC y posibles acciones antidepresivas . P. harmala, originaria de la región mediterránea y Asia y extendida a las áreas de América del Norte, se utiliza como un remedio de salud multipropósito, incluidos los trastornos del SNC. Las preparaciones de esta planta pueden desencadenar interacciones farmacológicas adversas . L. meyenii es una planta comestible de los Andes centrales cuyas raíces se utilizan como energizante alimentario y nutracéutico para mejorar las condiciones físicas y mentales y la fertilidad . El propósito de este trabajo fue estudiar la inhibición de la MAO-A humana por extractos de H. perforatum, P. harmala y L. meyenii (maca), así como por sus componentes activos que fueron identificados y analizados por HPLC-DAD-MS y posteriormente evaluar la actividad antioxidante que está específicamente asociada con la inhibición de la MAO. Esta actividad antioxidante específica se determina por primera vez en extractos de plantas.

2. Materiales y Métodos

Las plantas de Hypericum perforatum L. recolectadas en Ciudad Real (España) se secaron y separaron en partes: flores; partes aéreas superiores de la planta, incluyendo tallos y hojas ramificados, pero sin flores; y tallos principales (centrales e inferiores) y raíces. Se molieron y el polvo se utilizó para la preparación de la muestra. También se compraron hierbas comerciales y suplementos de hierbas (cápsulas y tabletas) de H. perforatum en tiendas de hierbas locales. La planta y las semillas de Peganum harmala L. se recolectaron en Toledo (España). Lepidium meyenii (maca) tanto en polvo como en tabletas comerciales se obtuvieron de Perú y tiendas locales. Hypericin standard (>95% purity by HPLC) from HWI Analytik GMBH pharma solutions, hyperforin dicyclohexylammonium salt, quercetin, harmaline, harmine, catalase, clorgyline, 3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine (TMB), and horseradish peroxidase (HRP) type II were purchased from Sigma-Aldrich.

2.1. Sample Preparation of Plant Extracts

Samples containing H. perforatum (i.e., plant parts, herbal preparation, capsules, or tablets) (500 mg) were homogenized in 10 mL of water/methanol (1 : 1) utilizando un homogeneizador Ultra Turrax, centrifugado a 10000 rpm durante 10 min, y se recogió el sobrenadante. El proceso se repitió dos veces con el residuo y las tres fracciones sobrenadantes recogidas, mezcladas y analizadas por HPLC como se menciona a continuación. Después de tres extracciones consecutivas, las recuperaciones de hipericina y pseudohipericina fueron superiores al 97%. Muestras de semillas de L. meyenii (maca) (500 mg) y P. harmala (500 mg) se homogeneizaron, respectivamente, en 10 mL de agua/metanol (1 : 1) o 10 mL de ácido perclórico de 0,6 M : metanol (1 : 1) utilizando un homogeneizador Ultra Turrax, centrifugado a 10000 rpm durante 10 min, y se recogió el sobrenadante. Este proceso se repitió dos veces con el residuo y los sobrenadantes recogidos se mezclaron y analizaron por HPLC como se menciona a continuación.

2.2. Análisis RP-HPLC de extractos de plantas

El análisis de extractos de H. perforatum se realizó mediante RP-HPLC con matriz de diodos UV y detección de fluorescencia utilizando un HPLC 1050 (Agilent) junto con un detector de matriz de diodos 1100 (DAD) (Agilent) y un detector de fluorescencia 1046A. A 150 3,9 mm de identificación, 4 µm, se utilizó la columna Nova-pak C18 (Aguas) para la separación. Las condiciones cromatográficas fueron tampón de fosfato de amonio de 50 mM (pH 3) (tampón A) y 20% de A en acetonitrilo (tampón B). El gradiente se programó de 0% (100% A) a 32% B en 8 min y 100% B en 10 min. El caudal fue de 1 mL / min, la temperatura de la columna fue de 40 ° C y el volumen de inyección fue de 20 µL. La detección de hipericinas se realizó por absorbancia a 590 nm y fluorescencia a 236 nm para excitación y 592 nm para emisión. La concentración de hipericina se determinó a partir de una curva de calibración de respuesta (absorbancia a 590 nm) frente a la concentración con soluciones elaboradas en el laboratorio a partir del estándar de hipericina. El mismo factor de respuesta se aplicó a la pseudohipericina, la protohipericina y la protopseudohipericina. Se analizaron flavonoides y glucósidos flavonoides a 265 nm y 355 nm y se determinó la concentración de quercetina a 355 nm a partir de una curva de calibración de respuesta versus concentración. La fracción de HPLC correspondiente a flavonoides y glucósidos flavonoides (7 a 11 min) se recolectó mediante inyecciones sucesivas de extracto de H. perforatum (hierbas) y, después de la evaporación en vacío, se disolvió en metanol al 30% y se utilizó para inhibir la MAO-A. Los floroglucinoles (hiperforina, adhiperforina, hiperfirina y adhiperfirina) se analizaron a 280 nm utilizando la misma columna (Nova-pak C18) y condiciones, pero bajo elución isocrática con 20% de tampón de fosfato de amonio de 50 mM, pH 3 y 80% de acetonitrilo. La concentración de estos compuestos se determinó a partir de una curva de calibración estándar de hiperforina. El análisis de alcaloides β-carbolínicos en P. harmala y L. meyenii se realizó como se describió anteriormente .

2.3. Identificación por espectrometría de masas HPLC-ESI

La identificación de compuestos en extractos de H. perforatum se realizó por HPLC-MS (modo de iones negativos electrospray) mediante el uso de un DAD de HPLC de la serie 1200 acoplado a un MS cuadrupolar 6110 (Agilent). La separación cromatográfica se realizó en una columna Zorbax SB-C18 (5 µm) de 150 2,1 mm de diámetro interior (Agilent Technologies). Las condiciones cromatográficas fueron eluyentes A: ácido fórmico (0,1%); B: ácido fórmico (0,1%) en acetonitrilo; gradiente: 0% a 70% B en 8 min y 100% B a 10 min, caudal: 0,3 mL/min; 40°C; rango de masa : 50-700 u, y voltaje de cono: 150 V. Para la identificación de floroglucinoles (por ejemplo, hiperforina), la separación se realizó utilizando un Nova-pak Columna de C18 (4 µm) con los mismos eluentes y elución isocrática (eluyente A, 20% y eluyente B, 80%) a un caudal de 0,7 ml/min y espectros de masa registrados en ionización negativa y positiva. La identificación de compuestos se realizó sobre la base de espectros de masa, espectros UV-vis (DAD) de picos cromatográficos y coelución con estándares. las β-carbolinas en P. harmala y L. meyenii se identificaron como se describió anteriormente .

2.4. Ensayos de inhibición de la monoaminoxidasa (MAO-A)

Los ensayos de MAO se realizaron como en otros lugares . Brevemente, las fracciones de proteínas de membrana que contenían MAO-A (BD-Gentest) se diluyeron a las concentraciones deseadas en tampón de fosfato de potasio de 100 mM (pH 7,4). Mezcla de reacción de 0,2 ml que contiene 0,01 mg/ml de proteína y 0.Se incubó quinuramina de 25 mM en fosfato potásico de 100 mM (pH 7,4) a 37°C durante 40 min. Después de la incubación, la reacción se detuvo mediante la adición de 2 N NaOH (75 µL), seguido de la adición de 70% de HClO4 (25 µL), y la muestra se centrifugó (10000) durante 10 min. El sobrenadante (20 µL) se inyectó en la HPLC y el producto de desaminación de quinuramina (es decir, 4-hidroxiquinolina) se formó durante la reacción enzimática determinada por detección de matriz de diodos RP-HPLC a 320 nm. Se construyó una curva de respuesta de área versus concentración para calcular la concentración de 4-hidroxiquinolina. Para realizar ensayos de inhibición de la MAO, se diluyeron convenientemente alícuotas de extractos de plantas o preparados comerciales o, en su lugar, compuestos puros, y se añadieron a mezclas de reacción que contenían quinuramina (0,25 mm) y MAO-A (0,01 mg/ml de proteína) en tampón de fosfato de potasio de 100 mM (pH 7,4), con reacción enzimática y análisis realizados como se indica anteriormente, y se compararon con los controles correspondientes que contenían disolvente. El inhibidor estándar, la clorgilina, se utilizó como control positivo de la inhibición (>90% de inhibición a 2,5 µM). Las incubaciones se realizaron al menos por duplicado a partir de diferentes experimentos y los valores de IC50 se calcularon utilizando GraphPad Prism 4.0.

2.5. Determinación de la Actividad Antioxidante Asociada a la Inhibición de la Monoaminooxidasa (MAO)

Los ensayos (0,2 mL) de mezclas de reacción en tampón de fosfato de potasio de 70 mM (pH 7,4), que contenían 0,025 mg/ml de proteína MAO-A y 0,25 mm de quinuramina, se incubaron a 37°C durante 40 minutos en ausencia (ensayos de control) o en presencia de extractos de plantas. Los ensayos de MAO también se realizaron en presencia de clorgilina (25 µM), un inhibidor clásico de MAO-A (control positivo de la inhibición), o enzima catalasa (100 µg/mL). Después del período de incubación, la mezcla de reacción se añadió con carbón activado (3,5 mg), se mezcló y se filtró (0,45 µm). La solución se añadió con 20 µL de tetrametilbencidina (TMB) de 10 mM en DMSO al 40% y 20 µL de peroxidasa de rábano picante (HRP) tipo II (1 mg/ml), conservada durante 5 minutos, y se añadió con 0,3 ml de solución H2SO4 de 0,5 M. Se midió la absorbancia a 450 nm para determinar la diimina de TMB, un producto amarillo resultante de la oxidación de TMB por HRP y el H2O2 generado en la desaminación oxidativa catalizada por MAO. La oxidación de TMB en presencia de inhibidores de la MAO se comparó con los controles correspondientes sin inhibidores y los espacios en blanco apropiados mostraron ausencia de interferencias.

3. Resultados y discusión

Preparaciones comerciales de H. perforatum inhibieron la MAO-A humana con potencia similar: valores de CI50 de 142,3 ± 30.6 µg/ml (preparado a base de hierbas), 193 ± 61 µg/mL (cápsulas) y 173 ± 29 µg/ml (comprimidos) [Figura 1 a)]. En cuanto a las plantas, los extractos de H. perforatum de flores presentaron la inhibición más alta (IC50 de 63,6 ± 9,4 µg/mL), seguidos de tallos y hojas aéreas (IC50 143,6 ± 16,5 µg/mL), y la más baja en extractos de raíces (Figura 1(b)). Los extractos de las partes aéreas de H. perforatum se analizaron mediante HPLC-DAD-ESI (ionización electrospray negativa). Mostraron la presencia de dos naftodiantronas principales identificadas como pseudohipericina e hipericina (Figura 2 (a) y Tabla 1). Los extractos de flores tenían dos compuestos adicionales identificados como protopseudohipericina y protohipericina. Abundaban los fenólicos y flavonoides en los extractos de H. perforatum (Figura 2(b)). El ácido clorogénico y los glucósidos de quercetina rutina, hiperósido, isoquercitrina, miquelianina, acetil hiperósido y quercitrina, así como la quercetina libre y la biapigenina, se identificaron mediante HPLC-DAD (ionización ESI negativa) y DAD (Tabla 1). Por otro lado, los extractos de flores contenían cuatro floroglucinoles (Figura 2(c)) que fueron identificados por HPLC-DAD-MS (ionización ESI negativa y positiva) y DAD como hiperforina, adhiperforina, hiperfirina y adhiperfirina (Tabla 1). La presencia de estos compuestos (Figura 3) en la planta concuerda con otros resultados . El contenido de los componentes principales se determinó mediante HPLC (Tabla 2). La concentración de pseudohipericina fue mayor que la hipericina, mientras que la protopseudohipericina y la protohipericina fueron compuestos menores (0,4 µg/mg de protopseudohipericina y 0.se detectaron 17 µg/mg de protohipericina en flores). En la planta, el mayor contenido de hipericinas se encontró en flores con niveles significativamente bajos detectados en tallos y ausencia en raíces. La hiperforina fue muy abundante en flores (27,2 µg / mg), mientras que la concentración en preparados comerciales osciló entre 0,36 y 2,4 µg/mg. En flores, también aparecieron adhiperforina (1,4 ± 0,07 µg/mg), hiperfirina (4,2 ± 0,02 µg/mg) y adhiperfirina (0,46 ± 0,02 µg/mg). Los flavonoides abundaban en H. perforatum y la mayoría de ellos eran glucósidos de quercetina (Figura 2(b)) cuya presencia fue significativamente mayor en las flores que en otras partes de la planta. El contenido de quercetina libre en las flores fue de 2,0 µg/mg, mientras que en los preparados comerciales se determinó un contenido de 6,7 µg/mg.

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Figura 1

la Inhibición de la monoaminooxidasa A (MAO-a) por los extractos de las preparaciones comerciales de H. perforatum (a) (cápsulas, ■; pastillas, ▲; hierbas,▼) y extractos de diferentes partes de la planta (b) (flores, ∆; tallos superiores,×; tallos principales (centrales),×; raíces,○). Las diferencias significativas () entre extractos en una concentración seleccionada se indican con letras diferentes.

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Figure 2

HPLC chromatograms of extracts from H. perforatum flowers. (a) Detection of hypericins at 590 nm. 1: protopseudohypericin; 2: pseudohypericin; 3: protohypericin; and 4: hypericin. (b) Detection of phenols and flavonoids at 265 nm. 1: chlorogenic acid; 2: rutin; 3: hyperoside; 4: isoquercitrina; 5: miquelianina; 6: acetil hiperósido; 7: quercitrina; 8: quercetina; y 9: biapigenina. c) Detección de floroglucinoles a 280 nm. 1: hiperfirina, 2: adhiperfirina, 3: hiperforina y 4: adhiperforina.

Figura 3

Estructuras de compuestos identificados en H. perforatum: hipericinas, quercetina y flavonoides y floroglucinoles de quercetina (hiperforina, adhiperforina, hiperfirina y adhiperfirina).

La inhibición de MAO-A por H. los extractos de perforatum indican la aparición de inhibidores. Las hipericinas, la hiperforina y los flavonoides son posibles contribuyentes a esta inhibición y se evaluaron como inhibidores (Figura 4). La hipericina inhibió la MAO-A (CI50 de 35,5 ± 2,1 µM o 17,9 µg/ml) [Figura 4(a)]. A partir de la concentración de la Tabla 2, la hipericina es un contribuyente débil a la inhibición de la MAO en los extractos de H. perforatum. De hecho, el contenido calculado de hipericina en el valor IC50 en los ensayos de extracto de flor (es decir, 63,6 µg/ml) fue de 0,1 µg/mL, lo que es bajo en comparación con la IC50 de hipericina (17,9 µg/mL). La hiperforina no inhibió la MAO-A (Figura 4 b)). La quercetina inhibió la MAO-A humana(Figura 4 b)) con un valor de CI50 de 11,1 ± 0,8 µM (es decir, 3,36 µg/ml). Entonces, la quercetina era un mejor inhibidor que la hipericina, aunque su potencia todavía era baja para explicar la inhibición completa de los extractos. Por lo tanto, el contenido calculado de quercetina en la CI50 en los ensayos de extracto de flor fue de 0,13 µg/mL, que es inferior a la CI50 de la quercetina (3,4 µg/mL). Cuando la fracción correspondiente a glucósidos de quercetina y flavonoides (7-11 min, Figura 2(b)) fue recogida por RP-HPLC, inhibió la MAO-A (inhibición del 90% a 700 µg/mL de extracto), lo que indica una contribución de estos compuestos a la inhibición de la MAO en H. perforatum, probablemente por efectos aditivos. Entonces, la inhibición de la MAO-A podría surgir de componentes como la quercetina y flavonoides relacionados (es decir, glucósidos de quercetina) que son abundantes en la planta. Además, los compuestos menores no identificados aquí también podrían contribuir a la inhibición de la MAO, ya que los compuestos principales de la Tabla 2 no explican la inhibición completa.

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Figura 4

la Inhibición de la monoaminooxidasa A (MAO-a) por los componentes activos de H. perforatum: hipericina (a) y la quercetina (■) y la hiperforina (▲) (b).

Extractos de semillas de P. harmala MAO-A humano altamente inhibido (Figura 5 (a)) con un valor CI50 de 49,9 ± 5,6 µg/L. El análisis cromatográfico indicó que la inhibición se debía a la presencia de alcaloides β-carbolina, harmalina y harmina, identificados por HPLC-DAD-MS (Figura 5(c)). El contenido de estos alcaloides determinado en las semillas fue de 48,5 mg/g para harmalina y 40,0 mg/g para harmina (esto significa 2,4 ng/ml y 2,0 ng / ml, respectivamente., en ensayos en el IC50). Por lo tanto, la potencia de inhibición de MAO-A por las semillas de P. harmala fue 1274 veces más potente que la de las flores de H. perforatum. Como se muestra en la Figura 5 (b), los extractos de raíz de Lepidium meyenii no inhibieron la MAO-A. L. humana. la meyenii (maca) es una planta popular de las tierras altas de los Andes cuyas raíces se utilizan cada vez más por sus propiedades nutricionales y medicinales como energizante y para mejorar el estado de ánimo y el rendimiento sexual . Informes anteriores han indicado que contienen alcaloides, incluidas β-carbolinas, que podrían inhibir la MAO. El análisis de extractos de alcaloides β-carbolina dio 25 µg/g (polvo de maca) y 11,7 µg / g (cápsulas) de ácido 1-metil-1,2,3,4-tetrahidro-β-carbolina-3-carboxílico como compuesto principal. Esta β-carbolina específica no es un inhibidor de la MAO-A .

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Figura 5

la Inhibición de la monoaminooxidasa A (MAO-a) por P. harmala semilla (a) y L. meyenii raíz (maca) extractos (b) (cápsulas, ▼ y polvo, ■). c) Cromatograma de HPLC del extracto de semilla de P. harmala que inhibe de manera potente la detección de absorbancia MAO-A. humana a 254 nm. Los compuestos identificados son harmalina (m / z a 215 (M + H)+, a 375 nm) y harmina (m/z a 213 (M + H)+, a 245 y 322 nm).

MAO genera peróxido de hidrógeno (H2O2) que está involucrado en el daño celular oxidativo y en condiciones patológicas . Entonces, la inhibición de la MAO puede resultar en acciones antioxidantes específicas . Para estudiar la actividad antioxidante asociada a la inhibición de la MAO, se diseñaron experimentos en esta investigación que vincularon la actividad de la MAO-A con la oxidación de la tetrametilbencidina (TMB) por la peroxidasa de rábano picante (HRP) y el H2O2 producido durante la desaminación oxidativa catalizada por la MAO (Figura 6). Extractos de H. perforatum y P. harmala que inhibieron la MAO-A, como se muestra arriba, una oxidación altamente disminuida de TMB. En contraste, los extractos de raíz de L. meyenii (maca) que no inhibieron la MAO tuvieron una baja actividad antioxidante en este ensayo. Clorgilina, que es un potente inhibidor de la MAO, una disminución importante de la oxidación de TMB cuando se usa como control. Lo mismo ocurrió con la presencia de catalasa en el medio que elimina el H2O2 generado por la MAO-A. Por lo tanto, estos resultados indican que los extractos de H. perforatum y P. harmala proporcionaron acciones antioxidantes específicas asociadas con una menor producción de H2O2 por inhibición de la MAO.

Figura 6

Actividad antioxidante asociada a la inhibición de la MAO en ensayos actividad de acoplamiento de la MAO-A con la posterior oxidación de la tetrametilbencidina (TMB) en presencia de H2O2 generado en la reacción de la MAO y peroxidasa de rábano picante (HRP). El gráfico muestra la oxidación de TMB a diimina (absorbancia a 450 nm) en ensayos de control (100%), y en presencia de H. perforatum (extractos de hierbas y flores, 800 µg/mL), extractos de semillas de P. harmala (0,8 µg/mL), L. extractos de raíz de meyenii (maca) (800 µg/mL), clorgilina (un inhibidor estándar de la MAO-A) (25 µM) y catalasa (100 µg/mL). diferencias () en comparación con los controles.

H. perforatum mejora los trastornos del estado de ánimo y la depresión . Como se muestra aquí, contiene compuestos como hiperforina, hipericinas y flavonoides responsables de los efectos antidepresivos (Figura 2 y Tabla 2). Sin embargo, el mecanismo específico para la acción antidepresiva no se comprende completamente. El mecanismo más aceptado es la inhibición de la recaptación de monoamina . Sin embargo, algunos estudios sugieren una combinación de mecanismos y efectos sinérgicos . P. harmala ejerce numerosas acciones biológicas y farmacológicas. Sus semillas se utilizan cada vez más con fines recreativos debido a sus efectos psicoactivos y neuroactivos . La inhibición de la MAO-A humana es un mecanismo establecido para la acción antidepresiva . Los inhibidores irreversibles y reversibles de la MAO-A (por ejemplo, fenelzina y moclobemida) se utilizan con éxito como antidepresivos. En este estudio, los extractos de H. perforatum inhibieron la MAO-A humana, sin embargo, esta inhibición fue moderada. Era más de mil veces menor que la de los extractos de semillas de P. harmala. Sacher et al. han informado que la ocupación de sitios MAO-A en el cerebro humano determinada por imágenes de PET con unión a 11C-harmina (es decir, la misma β-carbolina responsable de la inhibición de la MAO en P. harmala) fue alta para un inhibidor reversible de la MAO como la moclobemida, pero baja para el extracto de H. perforatum (hierba de San Juan) . Esto significa que los inhibidores de MAO-A en H. perforatum no se unen de manera eficiente a los sitios activos de MAO-A en el cerebro en contraste con la β-carbolina harmina. Los inhibidores de MAO-A en H. perforatum son flavonoides como la quercetina y sus glucósidos, y los niveles de estos compuestos que llegan al cerebro podrían no ser suficientes para ocupar los sitios de MAO-A en el cerebro e inhibir la enzima . En contraste, los inhibidores de P. harmala son alcaloides β-carbolina, incluyendo harmina y harmalina, que tienen una muy buena penetración cerebral, se unen con alta afinidad a los sitios MAO y exhiben efectos antidepresivos . Por lo tanto, P. harmala podría permitirse efectos antidepresivos por inhibición de la MAO. En este sentido, podría ser de interés investigar los efectos antidepresivos del H. perforatum y P. harmala solos y en combinación, ya que tienen diferentes mecanismos de acción.

La inhibición de la MAO-A por los extractos de H. perforatum y P. harmala puede contribuir a otros efectos biológicos de estas plantas, como acciones antioxidantes y reacciones farmacológicas adversas. Los extractos de estas plantas ejercen efectos neuroprotectores y antiinflamatorios que se han relacionado con la actividad antioxidante . En este sentido, mediante el uso de un nuevo procedimiento, los resultados de este trabajo han evidenciado que H. perforatum y P. los extractos de harmala muestran actividad antioxidante asociada con la inhibición de la MAO (menor producción de H2O2). Por otro lado, una de las principales limitaciones al uso de estas plantas es su potencial para producir interacciones adversas con otras hierbas, alimentos y medicamentos . La inhibición de MAO-A puede desencadenar efectos adversos en ciertas circunstancias .

4. Conclusiones

Los extractos de H. perforatum inhibieron la MAO-A humana, y los extractos de flores fueron los inhibidores más potentes. Fueron estudiados por HPLC-DAD-MS y contenían pseudohipericina, hipericina, hiperforina, adhiperforina, hiperfirina y flavonoides. El mayor contenido de estos compuestos apareció en las flores. La hipericina fue un inhibidor débil de la MAO-A; la hiperforina no inhibió la enzima y la quercetina fue un inhibidor moderado. La fracción de glucósidos y flavonoides de quercetina contribuyó a la inhibición de la MAO. Los extractos de semillas de P. harmala inhibieron altamente la MAO-A y su potencia de inhibición fue más de mil veces mayor que los extractos de H. perforatum debido a su contenido en harmalina y alcaloides harmina. L. los extractos de raíz de meyenii (maca) no inhibieron la MAO-A. La inhibición de la MAO-A puede no explicar todos los efectos sobre el SNC atribuidos a H. perforatum, pero se espera que contribuya a estas acciones en P. harmala. Estas plantas ejercen efectos antioxidantes. Mediante el uso de un nuevo método, este trabajo ha evidenciado que los extractos de P. harmala y H. perforatum exhiben actividad antioxidante asociada con la inhibición de la MAO.

Conflictos de intereses

Los autores declaran no tener intereses financieros competitivos.

Agradecimientos

Los autores agradecen a MINECO-FEDER (SAF2015-66690-R y SAF2015-68580-C2-R) y al CSIC (España) (Proyecto 200470E658) el apoyo a este trabajo. Los autores agradecen también a Marta Aguilar Preiss por su asistencia técnica y al Dr. V. Arán por su ayuda en la identificación y selección de plantas.