Notes based on information in ‘Basic practical microbiology’ © Society for General Microbiology.
refere-se a técnicas assépticas antes de iniciar este ou qualquer outro trabalho prático de Microbiologia.
numa placa de derrame, uma pequena quantidade de inóculo proveniente de uma cultura de caldo é adicionada por pipeta ao centro de uma placa de Petri. Depois é vertido na placa de Petri um meio de ágar arrefecido, mas ainda fundido, num tubo ou frasco de ensaio. O prato é então rodado suavemente, ou movido para trás e para a frente (primeiro N-S, em seguida NW-SE, em seguida NE-SW), para garantir que a cultura e o meio são completamente misturados e o meio cobre a placa uniformemente.
Pour plates allow micro-organisms to grow both on the surface and within the medium. A maioria das colônias crescem dentro do meio e são pequenas em tamanho e podem ser confluentes. As poucas colônias que crescem na superfície são do mesmo tamanho e aparência que aquelas em uma placa de série.
estas placas poderiam então ser utilizadas para testar os efeitos antimicrobianos de várias substâncias. Para mais informações, consulte a investigação da acção antimicrobiana.
caso contrário, placas como esta poderiam ser parte da investigação da população de bactérias em uma amostra. A cultura de diluições em série permite calcular o tamanho da população de uma amostra bacteriana. Se se conhecer a diluição e o volume do inóculo, normalmente 1 cm3, pode determinar-se a contagem viável da amostra por cm3. A contagem viável é o número de bactérias ou aglomerados de bactérias por cm3. As diluições escolhidas devem produzir entre 30 e 100 colónias contáveis separadas. (Ver também a técnica normal: As notas técnicas e de segurança
1 utilizam um banho de água a 50 ° C para armazenar garrafas de ágar fundido.
2 tome cuidado para não contaminar a ágar fundida nas garrafas com água do banho de água. Para evitar a contaminação, assegurar:
i que a água no banho de água se encontra na profundidade certa
ii que os frascos são mantidos em posição vertical
III que as partes exteriores dos frascos são limpas antes de serem utilizados.
3 numa placa vertida uniformemente, a base da placa deve ser coberta, o ágar não deve tocar na tampa da placa e a superfície deve ser lisa sem bolhas.
4 CLEOPSS Laboratory handbook section 15.2.12 suggests some alternative methods of making a pour plate, and considers their pros and cons.
procedimento
inoculação utilizando uma pipeta Pasteur
em qualquer altura, manter a pipeta o mais quieta possível.Solta a tampa/ ficha de algodão do frasco que contém o inóculo.Retirar a pipeta Pasteur estéril do recipiente, fixar a teta e segurar na mão direita.Levante o frasco / tubo de ensaio que contém o inóculo com a mão esquerda.Retire a tampa/ ficha de algodão com o dedo mindinho da mão direita.Flame The bottle/ test tube neck .
F espremer muito ligeiramente a ampola de teta da pipeta. Colocar a pipeta no frasco/ tubo de ensaio e extrair o volume necessário da cultura. Não espreme a ampola de teta da pipeta depois de Esta estar no caldo, uma vez que pode causar bolhas e possivelmente aerossóis.Retirar de novo a pipeta e inflamar o gargalo do frasco/ tubo de ensaio . Substituir a tampa/ ficha de algodão.
h colocar o frasco/ tubo de ensaio no banco ou na sua prateleira.
inocular a placa de Petri
levantar ligeiramente a tampa da placa de Petri com a mão direita e inserir a pipeta na placa de Petri. Libertar suavemente o volume necessário de inóculo no centro da cápsula. Substitui a tampa.
b colocar a pipeta num vaso de devoluções.
derramando a placa
recolhendo uma garrafa de ágar derretido estéril do banho-maria (Nota 1 e 2).Segure o frasco com a mão direita. Retire a tampa com o dedo mindinho da mão esquerda.
C Flame The neck of the bottle.
D levantar ligeiramente a tampa da placa de Petri com a mão esquerda e colocar o ágar estéril derretido na placa de Petri. Substitui a tampa.Flame o gargalo do frasco e substitua a tampa.
f Mover o prato suavemente para misturar a cultura e o meio, completamente e para garantir que a mídia cobre a placa uniforme (nota 3). Ou move o prato em três direcções: primeiro N-S, depois NW-SE, depois NE-SW, ou roda-o até que o meio e o inóculo estejam bem misturados e cubram a base do prato.
g permitir a solidificação da placa.
h tapar a placa e incubar em posição invertida.
Web links
Microbiology teacher resources
Society for General Microbiology-source of Basic Practical Microbiology, an excellent manual of laboratory techniques and Practical Microbiology for Secondary Schools, a selection of tried and tested practices using microorganisms.
Microbiologia online
MiSAC (Microbiologia nas escolas Advisory Committee) é apoiado pela Society for General Microbiology (ver acima) e os seus websites incluem mais informações de segurança e um link para pedir aconselhamento por e-mail.
(sítios Web acedidos em outubro de 2011)