Notas basadas en información de ‘Microbiología práctica básica’ © Society for General Microbiology.
Consulte las técnicas asépticas antes de comenzar este o cualquier otro trabajo práctico de microbiología.
En una placa de vertido, se agrega una pequeña cantidad de inóculo de un cultivo de caldo mediante pipeta al centro de una placa de Petri. El medio de agar enfriado, pero aún fundido, en un tubo de ensayo o botella se vierte en la placa de Petri. El plato se gira suavemente, o se mueve hacia adelante y hacia atrás (primero N-S, luego NW-SE, luego NE-SW), para garantizar que el cultivo y el medio se mezclen completamente y el medio cubra el plato de manera uniforme.
Las placas de vertido permiten que los microorganismos crezcan tanto en la superficie como dentro del medio. La mayoría de las colonias crecen dentro de la mediana y son pequeñas en tamaño y pueden ser confluentes. Las pocas colonias que crecen en la superficie son del mismo tamaño y apariencia que las de una placa de rayas.
Estas placas podrían utilizarse para probar los efectos antimicrobianos de diversas sustancias. Para obtener más información, consulte Investigación de la acción antimicrobiana.
De lo contrario, placas como esta podrían ser parte de la investigación de la población de bacterias en una muestra. El cultivo de diluciones en serie de esta manera permite calcular el tamaño de la población de una muestra bacteriana. Si se conocen la dilución y el volumen del inóculo, generalmente de 1 cm3, se puede determinar el recuento viable de la muestra por cm3. El recuento viable es el número de bacterias o grupos de bacterias por cm3. Las diluciones elegidas deben producir entre 30 y 100 colonias contables separadas. (Ver también Técnica estándar: Fabricación de diluciones en serie)
Salud & Seguridad y notas técnicas
1 Use un baño de agua a 50 °C para almacenar botellas de agar fundido.
2 Tenga cuidado de no contaminar el agar fundido en las botellas con agua del baño de agua. Para evitar la contaminación, asegúrese de:
i que el agua en el baño de agua se encuentre a la profundidad adecuada
ii que las botellas se mantengan en posición vertical
iii que el exterior de las botellas se limpie antes de utilizarlas.
3 En una placa de vertido distribuida uniformemente, la base de la placa debe estar cubierta, el agar no debe tocar la tapa de la placa y la superficie debe ser lisa sin burbujas.
4 Manual de laboratorio CLEAPSS la sección 15.2.12 sugiere algunos métodos alternativos para hacer una placa de vertido, y considera sus pros y contras.
Procedimiento
Inoculación utilizando una pipeta Pasteur
En todo momento, mantenga la pipeta lo más inmóvil posible.
a Afloje la tapa/ tapón de algodón del frasco que contiene el inóculo.
b Retire la pipeta Pasteur estéril de su recipiente, coloque la tetina y sujétela con la mano derecha.
c Levante con la mano izquierda el frasco/ tubo de ensayo que contiene el inóculo.
d Retire la tapa/ el tapón de algodón con el dedo meñique de la mano derecha.
e Llama el cuello de la botella/ tubo de ensayo.
f Apriete muy ligeramente el bulbo de los pezones de la pipeta. Coloque la pipeta en el frasco/ tubo de ensayo y extraiga el volumen necesario del cultivo. No apriete el bulbo de los pezones de la pipeta después de que esté en el caldo, ya que esto podría causar burbujas y posiblemente aerosoles.
g Retire la pipeta y vuelva a encender el cuello del frasco/ tubo de ensayo. Vuelva a colocar la tapa/ el tapón de algodón.
h Coloque la botella/ tubo de ensayo en el banco o en su estante.
Inoculación de la placa de Petri
a Levante ligeramente la tapa de la placa de Petri con la mano derecha e inserte la pipeta en la placa de Petri. Suelte suavemente el volumen requerido de inóculo en el centro del plato. Vuelva a colocar la tapa.
b Coloque la pipeta en una olla para desechar.
Verter la placa
a Recoger una botella de agar fundido estéril del baño de agua (notas 1 y 2).
b Sujete el frasco con la mano derecha. Retire la tapa con el dedo meñique de la mano izquierda.
c Llama el cuello de la botella.
d Levante ligeramente la tapa de la placa de petri con la mano izquierda y vierta el agar fundido estéril en la placa de Petri. Vuelva a colocar la tapa.
e Llama el cuello del frasco y vuelve a colocar la tapa.
f Mueva el plato suavemente para mezclar bien el cultivo y el medio y asegurarse de que el medio cubra el plato de manera uniforme (nota 3). Mueva el plato en tres direcciones: primero N-S, luego NW-SE, luego NE-SW, o gírelo hasta que el medio y el inóculo estén bien mezclados y cubran la base del plato.
g Permite que la placa se solidifique.
h Cierre la placa con cinta adhesiva e incube en posición invertida.
Enlaces web
Recursos para profesores de Microbiología
Sociedad de Microbiología General-fuente de Microbiología Práctica Básica, un excelente manual de técnicas de laboratorio y Microbiología Práctica para Escuelas Secundarias, una selección de prácticas probadas y comprobadas que utilizan microorganismos.
Microbiology online
El MiSAC (Comité Asesor de Microbiología en las Escuelas) cuenta con el apoyo de la Sociedad de Microbiología General (véase más arriba) y sus sitios web incluyen más información de seguridad y un enlace para solicitar asesoramiento por correo electrónico.
(Sitios web consultados en octubre de 2011)