monoamina Oxidase-uma inibição e actividade antioxidante associada em extractos vegetais com potenciais acções antidepressivas

Abstract

monoamina oxidase (MAO) catalisa a desaminação oxidativa das aminas e neurotransmissores e está envolvida em perturbações do humor, depressão, stress oxidativo e reacções farmacológicas adversas. Este trabalho estuda a inibição da MAO-A humana por Hypericum perforatum, Peganum harmala, e Lepidium meyenii, que são relatados para melhorar e afetar o humor e as condições mentais. Subsequentemente, a actividade antioxidante associada à inibição da MAO é determinada pela primeira vez em extractos vegetais. H. perforatum inibiu a MAO-a humana e os extractos de flores deram a maior inibição (IC50 de 63, 6 µg/mL). Os extratos de plantas foram analisados por HPLC-DAD-MS e continham pseudohipericina, hipericina, hiperforina, adhiperforina, hiperfirina e flavonóides. A hiperforina não inibiu a MAO-a humana e a hipericina foi um fraco inibidor desta isoenzima. A quercetina e os flavonóides contribuíram significativamente para a inibição da MAO-A. P. as sementes de harmala extraiem MAO-A altamente inibida (CI50 de 49,9 µg/L), sendo mil vezes mais potentes do que os extratos de H. perforatum devido ao seu conteúdo de alcalóides da β-carbolina (harmalina e harmina). Os extractos de raiz de L. meyenii (maca) não inibiram a MAO-A. Estas plantas podem exercer acções de protecção relacionadas com os efeitos antioxidantes. Os resultados deste trabalho mostram que os extractos de P. harmala e H. perforatum apresentam actividade antioxidante associada à inibição da MAO (isto é, menor produção de H2O2).

1. Introdução

a enzima monoamino oxidase (MAO) metaboliza aminas xenobióticas e endógenas e neurotransmissores incluindo serotonina, dopamina, norepinefrina, tiramina, triptamina e a neurotoxina MPTP . Ocorre como duas isoenzimas, MAO-A e MAO-B, que desempenham um papel importante no sistema nervoso central (SNC) e órgãos periféricos. MAO-B está envolvido em doenças neurodegenerativas e MAO-A em condições psiquiátricas e depressão. Os inibidores da MAO – B são úteis como neuroprotectores, enquanto que os inibidores da MAO-A são antidepressivos eficazes embora o seu uso possa provocar reacções adversas (por exemplo, crise hipertensiva com alimentos contendo tiramina) . Por outro lado, a oxidação de aminas biogénicas e neurotransmissores por enzimas MAO gera peróxido de hidrogénio (H2O2), radicais de oxigénio e aldeídos, que são factores de risco para lesões oxidativas celulares. Por conseguinte, a inibição da MAO pode resultar na protecção contra o stress oxidativo e as neurotoxinas . Investigações recentes têm apontado que os extratos vegetais e alimentares podem inibir as enzimas MAO, resultando nos efeitos biológicos acima mencionados . Por outro lado, como resultado da inibição da MAO, esses produtos podem estar envolvidos em interações indesejáveis com outras preparações à base de plantas, alimentos ou medicamentos .

Hypericum perforatum L. (família Hypericaceae) (St. John’s wort) é amplamente utilizado para fins de saúde e seus produtos estão disponíveis comercialmente, como ervas, nutracêuticos, chás, tinturas, sucos, oleosa macerates, phytopharmaceuticals, e de aditivos alimentares e suplementos . H. o perforatum é popular no tratamento da depressão ligeira e moderada . Pode desencadear interacções farmacológicas adversas com outras ervas, medicamentos ou alimentos . Sua capacidade de aliviar e melhorar distúrbios de humor e depressão é atribuída a compostos ativos que exibem propriedades antidepressivas . O mecanismo de acção mais aceite é a inibição da recaptação da monoamina, mas podem ser envolvidos mecanismos adicionais, incluindo a inibição da monoamina oxidase e efeitos sinérgicos . Peganum harmala (família Zygophyllaceae) e Lepidium meyenii (família Brassicaceae) (maca) são plantas com efeitos no SNC e potenciais ações antidepressivas . P. harmala, nativo da região mediterrânica e da Ásia e estendido para as áreas da América do Norte, é usado como um remédio multiusos para a saúde, incluindo doenças do SNC. As preparações desta planta podem desencadear interacções farmacológicas adversas . L. meyenii é uma planta comestível dos Andes centrais cujas raízes são usadas como um energizador de alimentos e nutraceutical para melhorar as condições físicas e mentais e a fertilidade . O objetivo deste trabalho foi estudar a inibição dos humanos MAO-A, por extratos de H. perforatum, P. harmala, e L. meyenii (maca), bem como de seus componentes ativos, que foram identificados e analisados por HPLC-DAD-MS e, posteriormente, avaliar a atividade antioxidante que é especificamente associada com a inibição da MAO. Esta actividade antioxidante específica é determinada pela primeira vez em extractos vegetais.

2. Os materiais e métodos

Hypericum perforatum L. plantas colhidas em Ciudad Real (Espanha) foram secos e separados em partes: flores; porções aéreas superiores da planta, incluindo caules ramificados e folhas, mas sem flores; e caules principais (centrais e inferiores) e raízes. Eram moídos e o pó usado para a preparação da amostra. Ervas comerciais e suplementos de ervas (cápsulas e comprimidos) de H. perforatum também foram comprados em lojas de ervas locais. Peganum harmala L. plantas e sementes foram coletadas em Toledo (Espanha). Lepidium meyenii (maca) tanto em pó como em comprimidos comerciais foram obtidos no Peru e em lojas locais. Hypericin standard (>95% purity by HPLC) from HWI Analytik GMBH pharma solutions, hyperforin dicyclohexylammonium salt, quercetin, harmaline, harmine, catalase, clorgyline, 3,3′,5,5′-tetramethylbenzidine (TMB), and horseradish peroxidase (HRP) type II were purchased from Sigma-Aldrich.

2.1. Sample Preparation of Plant Extracts

Samples containing H. perforatum (i.e., plant parts, herbal preparation, capsules, or tablets) (500 mg) were homogenized in 10 mL of water/methanol (1 : 1) utilizando um homogeneizador de ultra-Turrax, centrifugado a 10000 rpm durante 10 minutos, tendo o sobrenadante sido recolhido. O processo foi repetido duas vezes com o resíduo e as três fracções sobrenadantes recolhidas, misturadas e analisadas por HPLC, como se indica a seguir. Após três extracções consecutivas, as recuperações de hipericina e pseudohipericina foram superiores a 97%. Amostras de L. meyenii (maca) (500 mg) e sementes de P. harmala (500 mg) foram homogeneizados, respectivamente, em 10 mL de água/metanol (1 : 1) ou 10 mL de 0,6 M de ácido perclórico : metanol (1 : 1) utilizando um homogeneizador de ultra-Turrax, centrifugado a 10000 rpm durante 10 minutos, tendo o sobrenadante sido recolhido. Este processo foi repetido duas vezes com o resíduo e os sobrenadantes colhidos foram misturados e analisados por HPLC, como mencionado abaixo.

2.2. A análise dos extractos vegetais de H. perforatum foi efectuada por RP-HPLC com uma matriz de díodos UV e detecção de fluorescência utilizando um detector de HPLC 1050 (Agilent) associado a um detector de diodos de 1100 (Dad) e um detector de fluorescência de 1046A. 150 3, 9 mm., 4 µm, coluna C18 Nova-pak (Águas) foi usada para a separação. As condições cromatográficas eram 50 mM de tampão fosfato de amónio (pH 3) (tampão a) e 20% de tampão acetonitrilo (tampão B). O gradiente foi programado de 0% (100% a) para 32% B em 8 minutos e 100% B a 10 minutos. O caudal foi de 1 mL / min, a temperatura da coluna foi de 40°C e o volume de injecção foi de 20 µL. A detecção de hipericinas foi efectuada por absorvância a 590 nm e por fluorescência a 236 nm para excitação e a 592 nm para emissão. A concentração de hipericina foi determinada a partir de uma curva de calibração da resposta (absorvância a 590 nm) versus concentração com soluções feitas em laboratório a partir do padrão de hipericina. O mesmo fator de resposta foi aplicado à pseudohipericina, protohipericina e protopseudohipericina. Os flavonóides e os glicosidos flavonóides foram analisados a 265 nm e 355 nm e a concentração de quercetina foi determinada a 355 nm a partir de uma curva de calibração de resposta versus concentração. A fracção de HPLC correspondente a flavonóides e glicosídeos flavonóides (7 a 11 min) foi recolhida por injecções sucessivas de extracto de H. perforatum (plantas aromáticas) e, após evaporação no vácuo, dissolvida em 30% de metanol e utilizada para inibição da MAO-A. Os floroglucinóis (hiperforina, adiperforina, hiperfirina e adiperfirina) foram analisados a 280 nm usando a mesma coluna (Nova-pak C18) e condições, mas sob eluição isocrática com 20% de tampão de fosfato de amónio de 50 mM, pH 3, e 80% de acetonitrilo. A concentração destes compostos foi determinada a partir de uma curva de calibração do padrão de hiperforina. A análise dos alcaloides β-carbolina em P. harmala e L. meyenii foi realizada como descrito anteriormente .

2.3. Identificação por espectrometria de massa HPLC-ESI

identificação de compostos em extractos de H. perforatum foi feita por HPLC-MS (modo iónico electrospray-negativo) usando uma série de 1200 HPLC-DAD acoplada a um quadrupol-MS 6110 (Agilent). A separação cromatográfica foi realizada numa coluna de 150, 1 mm I. D. Zorbax SB-C18 (5 µm) (Agilent Technologies). As condições cromatográficas foram eluent Um: ácido fórmico (0.1%); B: ácido fórmico (0,1%) em acetonitrilo; gradiente: 0% a 70% B 8 min e 100% de B em 10 min, a taxa de fluxo de 0,3 mL/min; : 40°C; massa gama: 50-700 u, e cone de tensão: 150 V. Para a identificação de phloroglucinols (por exemplo, hyperforin), a separação foi feita através de um Nova-pak C18 (4 µm) coluna com o mesmo eluents e isocratic de eluição (eluent Um, 20% e eluent B, 80%) em uma taxa de fluxo de 0,7 mL/min e a massa espectros registrados em negativo e positivo de ionização. A identificação dos compostos foi feita com base em espectros de massa, espectros UV-vis (DAD) de picos cromatográficos e coeluição com padrões. as β-Carbolinas em P. harmala e L. meyenii foram identificadas como descrito anteriormente .

2.4. Os ensaios de inibição da monoaminoxidase (MAO-a)

MAO foram efectuados como em qualquer outro local . Brevemente, as fracções proteicas de membrana contendo MAO-A (BD-Gentest) foram diluídas às concentrações desejadas em tampão de fosfato de potássio de 100 mM (pH 7.4). Uma mistura de reacção de 0, 2 mL contendo 0, 01 mg/mL de proteína e 0.A cinuramina de 25 mM em fosfato de potássio de 100 mM (pH 7, 4) foi incubada a 37°C durante 40 minutos. Após a incubação, a reacção foi interrompida pela adição de 2 N NaOH (75 µL), seguida pela adição de 70% de HClO4 (25 µL) e a amostra foi centrifugada (10000) durante 10 minutos. O sobrenadante (20 µL) foi injectado na HPLC e o produto de desaminação da kynuramina (ou seja, 4-hidroxiquinolina) formou-se durante a reacção enzimática determinada pela detecção do conjunto de díodos RP-HPLC a 320 nm. Foi construída uma curva de Resposta da área versus concentração para calcular a concentração de 4-hidroxiquinolina. Para realizar os ensaios de inibição da MAO, as alíquotas dos extratos a partir de plantas ou preparações comerciais ou, em vez disso, compostos puros foram convenientemente diluído e adicionados às misturas de reacção contendo kynuramine (0,25 mM) e A MAO-A (0,01 mg/mL de proteína) em 100 mM de tampão fosfato de potássio (pH 7.4), com reação enzimática e a análise realizada acima, e comparados com os correspondentes controles que contêm o solvente. O padrão de inibição da clorgilina foi utilizado como um controlo positivo para a inibição (>90% de inibição a 2, 5 µM). As incubações foram realizadas pelo menos em duplicado de diferentes experimentos e os valores IC50 foram calculados usando GraphPad Prism 4.0.

2.5. Determinação da Atividade Antioxidante Associada com inibidores da Monoamina Oxidase (MAO) a Inibição

Ensaios (0,2 mL) de misturas de reacção em 70 mM de tampão fosfato de potássio (pH 7.4), contendo 0,025 mg/mL de MAO-de UMA proteína e 0,25 mM kynuramine, foram incubadas a 37°C por 40 min na ausência (controle de ensaios) ou na presença de extratos de plantas. Os ensaios da MAO também foram realizados em presença de clorgilina (25 µM), um inibidor clássico da MAO-A (Controlo Positivo da inibição) ou enzima catalase (100 µg/mL). Após o período de incubação, adicionou-se a mistura de reacção com carvão activado (3, 5 mg), misturado e filtrado (0, 45 µm). A solução foi adicionada com 20 µL de tetrametilbenzidina de 10 mM (TMB) em 40% DMSO e 20 µL de peroxidase de rábano silvestre (HRP) tipo II (1 mg/mL), conservada durante 5 minutos e adicionada com 0, 3 mL de solução de 0,5 M H2SO4. A absorvância a 450 nm foi medida para determinar a TMB diimina, um produto amarelo resultante da oxidação da TMB pela HRP e do H2O2 gerado na desaminação oxidativa catalisada pela MAO. A oxidação da TMB na presença de inibidores da MAO foi comparada com os controlos correspondentes sem inibidores e os ensaios em branco apropriados mostraram ausência de interferências.

3. Resultados e discussão

preparações comerciais de H. perforatum inibiu a MAO-A humana com potência semelhante: IC50 valores de 142,3 ± 30.6 µg/mL (preparação à base de plantas), 193 ± 61 µg/mL (cápsulas) e 173 ± 29 µg / mL (comprimidos) [Figura 1 a)]. A respeito de plantas, H. perforatum extractos de flores oferecidas a maior inibição (IC50 de 63,6 ± 9.4 µg/mL), seguido pelo aérea caules e folhas (IC50 143.6 ± 16.5 µg/mL), e menor na raiz extratos (Figura 1(b)). Extratos das partes aéreas de H. perforatum foram analisados por HPLC-DAD-ESI (eletrospray-ionização negativa). Eles mostraram a presença de duas naftodiantronas principais identificadas como pseudohipericina e hipericina (Figura 2(a) e Tabela 1). Os extractos de flores tinham dois compostos adicionais identificados como protopseudohipericina e protohipericina. Fenólicos e flavonóides abundam nos extractos de H. perforatum [Figura 2 (b)]. O ácido clorogénico e os glicosidos de quercetina rutina, hiperosido, isoquercitrina, miquelianina, acetil hiperosido e querbitrina, bem como quercetina livre e biapigenina, foram identificados por HPLC-DAD (ionização ESI negativa) e DAD (Tabela 1). Por outro lado, os extratos de flores continham quatro floroglucinóis (Figura 2(C)) que foram identificados por HPLC-DAD-MS (ionização ESI negativa e positiva) e DAD como hiperforina, adiperforina, hiperfirina e adiperfirina (Tabela 1). A presença destes compostos (Figura 3) na planta concorda com outros resultados . O teor dos principais componentes foi determinado pela HPLC (Quadro 2). A concentração de pseudohipericina era superior à hipericina, enquanto que protopseudohipericina e protohipericina eram compostos menores (0,4 µg/mg de protopseudohipericina e 0.Foram detectados 17 µg / mg de protohipericina nas flores). Na planta, o maior conteúdo de hipericinas foi encontrado em flores com níveis significativamente baixos detectados em caules e ausência em raízes. A hiperforina foi altamente abundante em flores (27, 2 µg/mg), enquanto que a concentração em preparações comerciais variou entre 0, 36 e 2, 4 µg/mg. Em flores, adhyperforin (1.4 ± 0.07 µg/mg), hyperfirin (4.2 ± 0.02 µg/mg), e adhyperfirin (0.46 ± 0.02 µg/mg) também apareceram. Flavonóides abundavam em H. perforatum e a maioria deles eram glicosídeos de quercetina(Figura 2 (b)), cuja presença era significativamente maior em flores do que em outras partes da planta. O teor de quercetina livre nas flores foi de 2, 0 µg/mg, ao passo que foi determinado um teor de 6, 7 µg / mg em preparações comerciais.

(a)

b)

(a)
b)

Figura 1

Inibição de humanos monoamina oxidase A (MAO-A) os extratos de preparações comerciais de H. perforatum (a) (cápsulas, ■; comprimidos, ▲; plantas aromáticas,▼), e extractos de diferentes partes da planta (B) (flores, ∆; caules superiores,∆; caules principais (central), ×; raízes,∆). As diferenças significativas () entre os extractos numa concentração seleccionada são indicadas com letras diferentes.

(a) nm

(b) nm

(c) nm

(a) nm
(b) nm
(c) nm

Figure 2

HPLC chromatograms of extracts from H. perforatum flowers. (a) Detection of hypericins at 590 nm. 1: protopseudohypericin; 2: pseudohypericin; 3: protohypericin; and 4: hypericin. (b) Detection of phenols and flavonoids at 265 nm. 1: chlorogenic acid; 2: rutin; 3: hyperoside; 4: isoquercitrina; 5: miquelianina; 6: hiperosido acetilo; 7: querbitrina; 8: quercetina; e 9: biapigenina. c) detecção de floroglucinóis a 280 nm. 1: hiperfirina, 2: adiperfirina; 3: hiperforina; e 4: adiperforina.

Figura 3

Estruturas de compostos identificados em H. perforatum: hypericins, quercetina, e flavonóides quercetina e phloroglucinols (hyperforin, adhyperforin, hyperfirin, e adhyperfirin).

a inibição da MAO-A por H. os extractos de perforato indicam a ocorrência de inibidores. As hipericinas, a hiperforina e os flavonóides são possíveis contribuintes para esta inibição e foram avaliados como inibidores (Figura 4). A hipericina inibiu a MAO-a (CI50 de 35, 5 ± 2, 1 µM ou 17, 9 µg/mL) [Figura 4 a)]. Da concentração na Tabela 2, a hipericina é um factor fraco de inibição da MAO nos extractos de H. perforatum. De fato, calculado o conteúdo de o hypericin no valor IC50 em ensaios de flor extrair (por exemplo, 63.6 µg/mL) foi de 0,1 µg/mL, que é baixa em comparação com IC50 de o hypericin (17.9 µg/mL). A hiperforina não inibiu a MAO-A [Figura 4 (b)]. Quercetina inibiu a MAO-a humana [figura 4 (b)] com um valor IC50 de 11, 1 ± 0, 8 µM(ou seja, 3,36 µg/mL). Depois, a quercetina foi um inibidor melhor do que a hipericina, embora a sua potência ainda fosse baixa para explicar a inibição total dos extractos. Assim, o teor calculado de quercetina na CI50 nos ensaios de extrato de flores foi de 0,13 µg/mL, inferior à CI50 de quercetina (3,4 µg/mL). Quando a fracção correspondente aos glicosidos e flavonóides da quercetina (7-11 min, Figura 2 b)) foi recolhida por PR-HPLC, inibiu a MAO-a(inibição de 90% a 700 µg/mL de extracto) indicando uma contribuição destes compostos para a inibição da MAO no h. perforatum, provavelmente por efeitos aditivos. Em seguida, a inibição da MAO-A pode surgir de componentes como quercetina e flavonóides relacionados (isto é, glicósidos da quercetina) que são abundantes na planta. Além disso, os compostos menores não identificados aqui também podem contribuir para a inibição da MAO, uma vez que os compostos principais na Tabela 2 não explicam a inibição total.

(a)

b)

(a)
b)

Figura 4

Inibição de humanos monoamina oxidase A (MAO-A) por componentes ativos de H. perforatum: o hypericin (a) e a quercetina (■) e hyperforin (▲) (b).

extractos de sementes de P. harmala de MAO-A humana altamente inibida [Figura 5 a)], com um valor IC50 de 49,9 ± 5,6 µg / L. A análise cromatográfica indicou que a inibição se devia à presença de alcalóides β-carbolina, harmalina e harmina, identificados por HPLC-DAD-MS [Figura 5 (C)]. O conteúdo destes alcalóides determinado em sementes foi de 48,5 mg/g para harmalina e 40.0 mg/g para harmina (isto significa que de 2,4 ng/mL e 2,0 ng/mL, respectivamente., em ensaios na CI50). Assim, a potência de inibição das sementes de MAO-A Por P. harmala foi 1274 vezes mais potente do que a das flores de H. perforatum. Como demonstrado na Figura 5 (b), os extractos de raízes de Lepidium meyenii não inibiram a MAO-A. L. humana. meyenii (maca) é uma planta popular das terras altas dos Andes, cujas raízes são cada vez mais usadas por suas propriedades nutricionais e medicinais como energizante e para melhorar o humor e o desempenho sexual . Relatórios anteriores indicaram que contêm alcalóides incluindo β-carbolinas que podem inibir a MAO. A análise dos extractos de alcalóides da β-carbolina produziu 25 µg/g (pó de maca) e 11,7 µg/g (cápsulas) de ácido 1-metil-1,2,3,4-tetrahidro-β-carbolina-3-carboxílico como composto principal. Esta β-carbolina específica não é um inibidor da MAO-A.

(a)

b)

(c)

(a)
(b)
(c)

Figura 5

Inibição de humanos monoamina oxidase A (MAO-A) por P. harmala de sementes (a) e L. meyenii raiz (maca) extratos (b) (cápsulas, ▼ e pó, ■). c) cromatograma de HPLC de extracto de Semente De P. harmala que inibiu fortemente a detecção de absorvância humana MAO-A. a 254 nm. Os compostos identificados são harmalina (m/z a 215 (M + H)+, a 375 nm) e harmina (M/z a 213 (M + H)+, A 245 e 322 nm).

MAO gera peróxido de hidrogênio (H2O2) que está envolvido em danos celulares oxidativos e condições patológicas . Em seguida, a inibição da MAO pode resultar em ações antioxidantes específicas . A fim de estudar a actividade antioxidante associada à inibição da MAO, foram concebidos ensaios nesta investigação que associaram a actividade da MAO-A à oxidação da tetrametilbenzidina (TMB) pela peroxidase do rábano silvestre (HRP) e o H2O2 produzido durante a desaminação oxidativa catalisada pela MAO (Figura 6). H. perforatum e P. harmala extratos que inibiram a MAO-A, como demonstrado acima, reduziram fortemente a oxidação da TMB. Em contraste, os extractos de raiz de L. meyenii (maca) que não inibiram a MAO tiveram uma baixa actividade antioxidante neste ensaio. A clorgilina, que é um potente inibidor da MAO-a, diminuiu fortemente a oxidação da TMB quando usada como um controle. O mesmo aconteceu com a presença de catalase nos meios de comunicação que remove H2O2 gerado pela MAO-A. Portanto, estes resultados indicam que os extratos de H. perforatum e P. harmala proporcionaram ações antioxidantes específicas associadas a uma menor produção de H2O2 por inibição da MAO.

Figura 6

atividade Antioxidante associada a um inibidor da enzima MAO em ensaios de afastamento da atividade da MAO-A, com a consequente oxidação de tetrametilbenzidina (TMB), na presença de H2O2 gerado na reação de MAO, e a peroxidase de rábano (HRP). O gráfico mostra a oxidação da TMB em diimina (absorvância a 450 nm) em ensaios de controlo (100%) e na presença de H. perforatum (plantas aromáticas e extractos de flores, 800 µg/mL), P. extractos de sementes de harmala (0, 8 µg/mL), L. extractos de raiz de meyenii (maca) (800 µg/mL), clorgilina (um inibidor padrão da MAO-a) (25 µM) e catalase (100 µg/mL). diferenças () em relação aos controlos.

H. perforatum melhora as perturbações do humor e a depressão . Como mostrado aqui, ele contém compostos como hiperforina, hipericinas e flavonóides responsáveis por efeitos antidepressivos (Figura 2 e Tabela 2). No entanto, o mecanismo específico para a acção antidepressiva não é completamente compreendido. O mecanismo mais aceite é a inibição da recaptação da monoamina . No entanto, alguns estudos sugerem uma combinação de mecanismos e efeitos sinérgicos . P. harmala exerce numerosas acções biológicas e farmacológicas. As suas sementes são cada vez mais utilizadas para fins recreativos devido aos seus efeitos psicoactivos e neuroactivos . A inibição da MAO-a humana é um mecanismo estabelecido para a acção antidepressiva . Os inibidores irreversíveis e reversíveis da MAO-A (por exemplo, fenelzina e moclobemida) são usados com sucesso como antidepressivos. Neste estudo, os extractos de H. perforatum inibiram a MAO-A. Contudo, esta inibição foi moderada. Foi mais de mil vezes mais baixa do que a de extractos de sementes de P. harmala. Sacher et al. relataram que a ocupação de MAO-de UM sites para o cérebro humano determinado pelo PET imaging com 11C-harmina ligação (i.é., a mesma β-carbolina responsável pela inibição da MAO em P. harmala) foi alta para um inibidor reversível da MAO, tais como moclobemide, mas de baixo para H. perforatum extrair (St. John’s wort) . Isto significa que os inibidores da MAO-A em H. perforatum não se ligam eficientemente aos locais activos da MAO-A no cérebro em contraste com a harmina β-carbolina. Os inibidores da MAO – A em H. perforatum são flavonóides tais como quercetina e seus glicosídeos e os níveis destes compostos que atingem o cérebro podem não ser suficientes para ocupar os locais da MAO-A no cérebro e inibir a enzima . Em contraste, os inibidores de P. harmala são alcaloides β-carbolina, incluindo harmina e harmalina, que têm uma penetração cerebral muito boa, se ligam com alta afinidade aos locais da MAO, e exibem efeitos antidepressivos . Assim, P. harmala pode ter efeitos antidepressivos por inibição da MAO. A este respeito, poderia ser interessante investigar os efeitos antidepressivos de H. perforatum e P. harmala isoladamente e em combinação, uma vez que têm diferentes mecanismos de Acção.A inibição da MAO-A por extractos de H. perforatum e P. harmala pode contribuir para outros efeitos biológicos destas plantas, tais como acções antioxidantes e reacções farmacológicas adversas. Os extractos destas plantas exercem efeitos neuroprotectores e anti-inflamatórios relacionados com a actividade antioxidante . A este respeito, através de um novo procedimento, os resultados deste trabalho têm evidenciado que H. perforatum e P. os extractos de harmala mostram actividade antioxidante associada à inibição da MAO (menor produção de H2O2). Por outro lado, uma das principais limitações ao uso destas plantas é o seu potencial para produzir interações adversas com outras ervas, alimentos e medicamentos . A inibição da MAO-A pode provocar efeitos adversos em determinadas circunstâncias .

4. Conclusões

extractos de H. perforatum inibiram a MAO-a humana, e os extractos de flores foram os inibidores mais potentes. Foram estudados por HPLC-DAD-MS e continham pseudohipericina, hipericina, hiperforina, adhiperforina, hiperfirina e flavonóides. O maior conteúdo destes compostos apareceu em flores. A hipericina foi um inibidor fraco da MAO-A; a hiperforina não inibiu a enzima e a quercetina foi um inibidor moderado. A fracção dos glicosidos e flavonóides da quercetina contribuiu para a inibição da MAO. P. as sementes de harmala extraem a MAO-A altamente inibida e a sua potência de inibição foi mais de mil vezes superior à dos extractos de H. perforatum devido ao seu conteúdo em alcalóides da harmalina e da harmina. L. os extractos de raiz de meyenii (maca) não inibiram a MAO-A. a inibição da MAO-A pode não explicar a totalidade dos efeitos do SNC atribuídos a H. perforatum, mas espera-se que contribua para estas acções na P. harmala. Estas plantas exercem efeitos antioxidantes. Ao utilizar um novo método, Este trabalho evidenciou que os extractos de P. harmala e H. perforatum apresentam actividade antioxidante associada à inibição da MAO.

conflitos de interesses

os autores não declaram nenhum interesse financeiro concorrente.

Agradecimentos

Os autores são gratos a MINECO-FEDER (SAF2015-66690-R e SAF2015-68580-C2-R) e o CSIC (Espanha) (Projeto 200470E658) para apoio a este trabalho. Os autores também estão gratos a Marta Aguilar Preiss pela assistência técnica e ao Dr. V. Arán por ajudar na identificação e seleção da planta.